方雪瑩

(南陽市中心醫(yī)院綜合ICU，河南南陽 473000)

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一種氣道慢性炎癥性疾病，隨著病情進展，部分患者可逐步出現(xiàn)肺動脈高壓（pulmonary hypertension，PH）表現(xiàn)，引起臟器一系列病理變化，如右心功能衰竭、肺血流減少等，增加COPD患者心血管疾病發(fā)生率與病死率[1]。因而，早期評估COPD患者PH發(fā)生情況具有必要性。慢性炎癥是COPD發(fā)病的重要病理機制，炎癥因子可引起肺動脈內(nèi)皮細胞、纖維細胞、內(nèi)皮細胞不斷增殖，引起肺血管再次生長，削弱血管壁反應(yīng)能力，同時加強肌肉收縮能力，致肺血管阻力進行性升高，進而形成PH。臨床研究發(fā)現(xiàn)，血清miR-21、miR-155均與炎癥反應(yīng)相關(guān)，可促進肺纖維化的發(fā)展[2,3]。由此推測，血清miR-21、miR-155可能與COPD患者PH發(fā)生有關(guān)，但兩指標與COPD患者PH的關(guān)系研究較少。鑒于此，本研究旨在分析血清miR-21、miR-155水平與COPD患者PH發(fā)生的關(guān)系，具示如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準，選取2019年3月～2021年3月南陽市中心醫(yī)院收治的120例COPD患者為研究對象，患者及家屬均簽署知情同意書。（1）納入標準：①COPD符合《慢性阻塞性肺疾病基層診療指南(2018年)》[4]中相關(guān)診斷標準，且胸部X線、肺功能等檢查確診；②肺功能分級為Ⅱ～Ⅳ級；③患者依從性良好，均可配合心臟彩超檢查；④均因COPD急性加重入院。（2）排除標準：①合并支氣管哮喘、間質(zhì)性肺病等其他呼吸系統(tǒng)疾病的患者；②藥物、先天性心臟病、門脈高壓等引起PH的患者；③合并腫瘤、嚴重腎功能不全的患者；④近期使用糖皮質(zhì)激素治療的患者。120例COPD患者中，男性68例，女性52例；年齡51～74歲，平均（60.91±2.36）歲；肺功能分級：Ⅱ級21例，Ⅲ級77例，Ⅳ級22例。

1.2 方法

1.2.1 PH評估及分組方法 患者入院后均接受心臟彩超多普勒技術(shù)（飛利浦，EPIQ5）檢查，參照《中國肺高血壓診斷和治療指南2018》[5]評估患者PH發(fā)生情況，若心臟彩超估測肺動脈壓力≥35mmHg則診斷為PH，納入發(fā)生組，其余納入未發(fā)生組。

1.2.2 實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）法檢測血清miR-21、miR-155水平 患者入院后，采集患者清晨7～9點空腹＞8h外周肘靜脈血4ml，放置于含有促凝劑的采集管中，室溫下靜置10min后，以2500r/min速率離心15min，取血清，保存于-80℃的環(huán)境中。采用總RNA提取試劑盒（蘇州吉瑪基因股份有限公司）對樣本中總RNA進行提取，采用BioRad逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄完畢后采用qPCR法檢測血清miR-21、miR-155水平，實時熒光定量PCR儀及配套試劑盒選自博奧生物有限公司。miR-21 PCR的引物序列為，正向引物：5′-GTTAGCTTATCAGACTGA-3′；反向引物：5′-GTGCAGGGTCCGAGGTAT-3′。miR-155 PCR的引物序列為，正向引物：5′-TGCGCTAATGCTAATCGTGATA-3′；反向引物：5′-CCAGTGCAGGGTCCGAGGTATT-3′。采用2-△△Ct法計算血清miR-21、miR-155相對表達量。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 25.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料均經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布的計量資料采用表示，組間比較用獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料用百分比和例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗；等級資料采用秩和檢驗；經(jīng)Logistic回歸分析檢驗血清miR-21、miR-155與COPD患者PH發(fā)生的關(guān)系；檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 COPD患者PH評估情況

120例COPD患者中，26例發(fā)生PH，占21.67%（26/120）。

2.2 基線資料比較

對發(fā)生、未發(fā)生PH的2組COPD患者性別、年齡、肺功能分級進行比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 發(fā)生、未發(fā)生PH的COPD患者基線資料比較

2.3 血清miR-21、miR-155水平

對發(fā)生、未發(fā)生PH的COPD患者血清miR-21、miR-155水平進行比較，發(fā)生組血清miR-21（3.04±0.56）、miR-155（2.35±0.42）水平高于未發(fā)生組（2.45±0.51）、（2.18±0.43），差異有統(tǒng)計學意義（t=6.870、2.719，P＜0.001、P=0.008）。見附圖。

附圖 發(fā)生、未發(fā)生PH的COPD患者血清miR-21、miR-155水平柱狀圖

2.4 Logistic回歸分析結(jié)果

將COPD患者入院時血清miR-21、miR-155水平作為自變量（均為連續(xù)變量），將COPD患者PH發(fā)生情況作為因變量（1=發(fā)生，0=未發(fā)生），經(jīng)Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清miR-21、miR-155過表達與COPD患者PH發(fā)生有關(guān)（P＜0.05）。見表2。

表2 血清miR-21、miR-155水平與COPD患者PH發(fā)生關(guān)系的Logistic回歸分析結(jié)果

3 討論

PH是COPD常見并發(fā)癥，目前臨床評估PH主要依靠右心導管檢查和心臟彩超，但右心導管檢查具有創(chuàng)傷性，而心臟彩超檢測的肺動脈壓力值與患者實際的肺動脈壓力值可能有出入，導致臨床運用受限。因此，早期尋找有效指標評估COPD患者PH情況對臨床診斷及治療具有重要意義。

COPD發(fā)生PH機制仍不完全明確，但有研究表明，炎癥環(huán)境下，血管內(nèi)皮細胞損傷使血小板粘附聚集，凝血-纖溶系統(tǒng)激活，導致肺血管內(nèi)形成原位栓，肺循環(huán)受阻，逐步形成PH；且炎癥可引起平滑肌細胞增生、膠原沉積等，損害肺血管內(nèi)皮細胞功能，致使血管出現(xiàn)收縮現(xiàn)象，進而形成PH[6,7]。血清miR-21參與免疫反應(yīng)調(diào)控，可調(diào)控炎癥反應(yīng)、基質(zhì)金屬蛋白酶的生成等。血清miR-155在促進免疫細胞的成熟以及維持免疫細胞的功能中都發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，同時可分泌細胞因子上調(diào)參與炎癥反應(yīng)。由此推測，血清miR-21、miR-155水平可能與COPD患者發(fā)生PH具有一定的聯(lián)系。

本研究結(jié)果顯示，發(fā)生組血清miR-21、miR-155水平高于未發(fā)生組，且經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，血清miR-21、miR-155過表達與COPD患者PH發(fā)生有關(guān)，進一步證實血清miR-21、miR-155過表達可增加COPD患者PH發(fā)生的風險。分析其原因可能是，miR幾乎介導了所有疾病的生理病理過程，包括細胞增殖、分化、遷移、調(diào)亡等[8]。miR-21可通過參與多種信號通路來調(diào)控肺血管的緊張性與舒張性，miR-21過表達可促使行使功能的蛋白水平下降，導致內(nèi)皮平滑肌細胞增殖，引起肺循環(huán)血管收縮和內(nèi)皮重塑，誘導PH[9]。此外，miR-21過表達可上調(diào)炎癥因子，引起氣道損傷，導致凝血-纖溶系統(tǒng)被啟動，出現(xiàn)肺血管充血、水腫等，引起管道通路狹窄，肺循環(huán)阻力升高，形成PH。miR-155在T細胞分化中起調(diào)控作用，參與炎癥、免疫功能的調(diào)控，表達上調(diào)時可刺激多種炎癥因子表達，導致肺血管內(nèi)皮功能受損，肺動脈平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞增殖，管腔狹窄等，使肺動脈壓力升高[10]。同時，miR-155過表達釋放的炎癥因子可增加自由基、氧化因子產(chǎn)生的敏感度，導致內(nèi)皮功能紊亂，加速肺動脈壓力的升高。

綜上所述，血清miR-21、miR-155過表達與COPD患者發(fā)生PH密切相關(guān)，血清miR-21、miR-155過表達可增加COPD患者PH發(fā)生的風險，臨床可早期檢測血清miR-21、miR-155水平來評估COPD患者PH發(fā)生的風險。