談忠毅 談瑄忠▲ 許慧琴

盆腔炎性疾?。╬elvic inflammatory disease，PID）是指女性上生殖道及其周圍組織感染造成的一組疾病，包括盆腔腹膜炎、輸卵管炎、子宮內(nèi)膜炎和輸卵管卵巢膿腫等，若得不到及時(shí)治療，可能造成異位妊娠、慢性盆腔痛、不孕以及炎癥反復(fù)發(fā)作等后遺癥的發(fā)生，即盆腔炎性疾病后遺癥（Sequelae of Pelvic Inflammatory Disease，SPID）。SPID多發(fā)于育齡婦女，其可出現(xiàn)組織被廣泛的破壞和粘連、組織增生及瘢痕形成等病理改變，嚴(yán)重影響患者的身心健康[1]。中醫(yī)治療SPID具有明顯的優(yōu)勢(shì)，消積顆粒是南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南京中醫(yī)院的院內(nèi)制劑，是高淑華主任醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)方[2]。本方由赤芍、紅花、香附、蒲公英、生薏苡仁、昆布等藥味組成，臨床上可明顯改善SPID患者的癥狀。本實(shí)驗(yàn)旨在研究消積顆粒對(duì)SPID 模型大鼠的影響，探究其治療機(jī)制，為SPID 的臨床治療及新藥開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥物 消積顆粒（由南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南京中醫(yī)院制劑部提供，批號(hào)：20160311）。

1.1.2 試劑 苯酚（成都市科龍公司，批號(hào)：20130515）；黃耆樹膠（國(guó)藥集團(tuán)，批號(hào)：W20111220）；大鼠白細(xì)胞介素-6（IL-6）試劑盒（上海酶聯(lián)生物有限公司，批號(hào)：201606）；大鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒（上海酶聯(lián)生物有限公司，批號(hào)：201606）；大鼠血栓素B2（TXB2）（上海酶聯(lián)生物有限公司，批號(hào)：201606）；大鼠前列腺素1α（PGF1α）（上海酶聯(lián)生物有限公司，批號(hào)：201606）。25%苯酚膠漿配制：取西黃芪膠1 g置干燥坩堝內(nèi)，加4 mL甘油研磨均勻，再加液化苯酚5 mL，繼續(xù)研磨至均勻狀態(tài)，最后加蒸餾水11 mL研磨至濃稠均勻無顆粒。

1.1.3 動(dòng)物 SPF 級(jí)未孕成年SD 雌性大鼠，體重200～220 g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（蘇）2014-0001。

1.1.4 儀器 TD 6001電子天平（天津市天馬公司）；FA2104 電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；CKX-31 生物顯微鏡（日本奧林巴斯）；Synergy HT 多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio TeK）；LDZ5-2 離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法[3-4]

1.2.1 造模 取雌性大鼠50只，隨機(jī)選取40只大鼠采用腹腔麻醉（10%水合氯醛溶液4 mL/kg），常規(guī)消毒后，下腹正中切口約2 cm，暴露子宮，在右側(cè)子宮中段處以4號(hào)針頭小心進(jìn)針，向卵巢方向緩慢注入苯酚膠漿0.04 mL/只，再逐層縫合切口，進(jìn)行正常飼養(yǎng)。保留10只不造模作為空白對(duì)照。

1.2.2 分組及給藥 造模7 d 后，將40 只大鼠按體重分層隨機(jī)分為4 組，每組10 只，分別為模型組及消積顆粒低、中、高劑量組。消積顆粒低、中、高劑量組的給藥劑量分別為2.6 g/kg、5.2 g/kg、10.4 g/kg；空白對(duì)照組、模型組則給予生理鹽水。各組按上述劑量灌胃給藥（10 mL/kg），每日1次，連續(xù)28 d。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 體征觀察及體重 每天觀察大鼠的毛發(fā)、精神、行為等體征狀況；分別在給藥前、給藥后第1、2、3、4 w測(cè)定大鼠體重。

1.3.2 血液生化指標(biāo) 末次給藥后次日大鼠眼眶取血5 mL，待靜置1 h 后，離心10 min（3000 rpm），取血清，保存溫度為-20 ℃，后期用于測(cè)定血清TXB2、IL-6、TNF-α、PGF1α等指標(biāo)。

1.3.3 臟器系數(shù) 脫頸椎處死大鼠，取出子宮、卵巢，稱重并計(jì)算其系數(shù)。

1.3.4 病理組織學(xué)檢查 取材后，將右側(cè)子宮用10%甲醛溶液固定后，脫水，石蠟包埋。切片經(jīng)HE染色，用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察。病理觀察指標(biāo)為:（1）子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞變性壞死狀況；（2）子宮壁慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)狀況；（3）子宮腔擴(kuò)張、粘連或閉塞狀況；（4）子腔壁結(jié)構(gòu)改變狀況；（5）子宮內(nèi)膜充血水腫狀況[5]。第1、3項(xiàng)指標(biāo)積分標(biāo)準(zhǔn)為：0分為無病變；1分為范圍<1/3的輕度病變；2 分為范圍在1/3～2/3 間的中度病變；3分為范圍在2/3以上的重度病變。第2、4、5項(xiàng)指標(biāo)根據(jù)病變嚴(yán)重程度計(jì)分：無明顯病變?yōu)? 分；輕度病變?yōu)?分，中度病變?yōu)?分，重度病變?yōu)?分[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 16.0 統(tǒng)計(jì)軟件包，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)體征及體重的影響模型組大鼠出現(xiàn)行為遲緩、精神萎靡、毛發(fā)蓬松等現(xiàn)象，且體重明顯減輕，與空白對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05或P<0.01）；而消積顆粒低、中、高劑量組大鼠體征明顯改善，體重在給藥第2 w后明顯增加，與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。見表1。

表1 各組大鼠體重的變化情況（）

表1 各組大鼠體重的變化情況（）

注：與空白對(duì)照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，**P<0.01

2.2 各組大鼠IL-6、TNF-α水平比較模型組血清IL-6、TNF-α較空白對(duì)照組顯著升高，而消積顆粒低、中、高劑量組IL-6、TNF-α均較模型組顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表2。

表2 各組大鼠血清IL-6、TNF-α水平比較（）

表2 各組大鼠血清IL-6、TNF-α水平比較（）

注：與空白對(duì)照組比較，##P<0.01；與模型組比較，**P<0.01

2.3 各組大鼠TXB2、PGF1α水平及其比值比較與空白對(duì)照組比較，模型組血清中的TXB2升高，PGF1α降低，TXB2/PGF1α比值提高，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；而消積顆粒低、中、高劑量組均能降低TXB2，升高PGF1α，使其TXB2/PGF1α比值降低，與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表3。

表3 各組大鼠血清TXB2、PGF1α水平及其比值比較（）

表3 各組大鼠血清TXB2、PGF1α水平及其比值比較（）

注：與空白對(duì)照組比較，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.4 各組大鼠卵巢、子宮臟器系數(shù)比較各組大鼠卵巢系數(shù)未見明顯差異；模型組子宮系數(shù)顯著升高，與空白對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）；而消積顆粒中、高劑量組均能降低子宮系數(shù)，與模型組比較差異顯著（P<0.05或P<0.01）。見表4。

表4 各組大鼠卵巢及子宮系數(shù)比較（）

表4 各組大鼠卵巢及子宮系數(shù)比較（）

注：與空白對(duì)照組比較，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.5 病理組織學(xué)檢查模型組大鼠的病理表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞變性、壞死，宮壁結(jié)構(gòu)改變，子宮腔粘連縮小、擴(kuò)張或偏位，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。在使用消積顆粒后，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞變性、壞死及宮壁結(jié)構(gòu)改變程度減輕，其中，中、高劑量組與模型組比較差異顯著（P<0.05）。見表5、圖1。

圖1 各組大鼠子宮病理學(xué)檢查結(jié)果

表5 各組大鼠子宮病理學(xué)評(píng)分結(jié)果（）

表5 各組大鼠子宮病理學(xué)評(píng)分結(jié)果（）

注：與空白對(duì)照組比較，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05

3 討論

盆腔炎性疾病是婦科臨床發(fā)病率較高的疾病，易反復(fù)發(fā)作，臨床癥狀有下腹疼痛墜脹、腰痛、月經(jīng)不調(diào)等，甚者可導(dǎo)致異位妊娠、輸卵管阻塞和不孕［6］。該病可歸屬于中醫(yī)學(xué)“婦人腹痛”“熱入血室”“癥瘕”“不孕”等范疇[2]。中醫(yī)臨床實(shí)踐認(rèn)為，盆腔炎性疾病后遺癥主要呈現(xiàn)“濕、熱、瘀”的病理狀態(tài)，究其病機(jī)特點(diǎn)，主要為濕熱余毒為患。現(xiàn)代研究亦表明，盆腔炎患者的血液呈濃、黏、凝、滯狀態(tài)，符合中醫(yī)學(xué)“血瘀證”特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用較為成熟的苯酚膠漿致炎法造模，造模7 天后肉眼觀察模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡、行為遲緩、毛發(fā)蓬松等現(xiàn)象，且體重明顯降低；病理主要表現(xiàn)為模型組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞突變壞死，宮壁結(jié)構(gòu)改變，子宮腔粘連縮小、擴(kuò)張或偏位[7]。消積顆粒能夠改善SPID 大鼠的體征和體重，使子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞突變壞死、宮壁結(jié)構(gòu)改變程度減輕。IL-6作為啟動(dòng)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子，主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生[8]，對(duì)盆腔炎早期診斷具有重要意義。TNF-α 是由活化的單核巨噬細(xì)胞和其他多種細(xì)胞產(chǎn)生，具有廣泛的生物活性，參與炎性反應(yīng)和免疫應(yīng)答[9]。消積顆粒能夠顯著降低模型組大鼠血清IL-6、TNF-α含量。由于PID時(shí)盆腔組織長(zhǎng)期炎癥侵蝕可引起增生、局部充血腫脹，產(chǎn)生炎性粘連和阻塞，從而引起子宮微循環(huán)的局部障礙，壓迫神經(jīng)纖維，引發(fā)腹痛等癥狀[10]，消積顆粒能夠顯著降低TXB2/PGF1α比值，改善血瘀相關(guān)指標(biāo)及微循環(huán)障礙。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，消積顆粒具有改善體征和體重，降低子宮系數(shù)、減輕炎癥反應(yīng)的作用，其作用機(jī)理涉及降低炎癥因子、減輕血瘀、改善血液循環(huán)等多個(gè)環(huán)節(jié)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，消積顆粒具有抗苯酚致大鼠慢性盆腔炎的作用，為臨床研究消積顆粒治療SPID提供了理論依據(jù)，也為新藥開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。