高 照，許心蕊，金秋碩，孫 浩，孫克寒，楊漫芳，張晴玥，李 洋，婁利霞，吳愛明，聶 波，

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科學(xué)教育部和北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100700；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院病理科，北京 100700；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100029）

動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是心血管和腦血管等危險(xiǎn)事件發(fā)生的病理學(xué)基礎(chǔ)［1］。AS 是由脂代謝紊亂、氧化應(yīng)激因素、炎性刺激以及內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙等多因素相互作用而成［2］。在AS 病理進(jìn)程中，氧化型低密度脂蛋白（Oxidized Low Density Lipoprotein，Ox-LDL）可通過影響脂代謝加重AS，是導(dǎo)致AS 病變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［3，4］。在巨噬細(xì)胞（macrophages ，Mφ）中，脂肪酸結(jié)合蛋白4（Fatty acid binding protein 4，F(xiàn)ABP4）過多能加劇Mφ 脂質(zhì)的吞噬，而當(dāng)FABP4 缺乏，可促進(jìn)膽固醇從Mφ 內(nèi)向外流出［5，6］。過氧化物酶體增殖物激活受體γ（Peroxisome proliferators-activated receptors γ，PPARγ）是介導(dǎo)膽固醇和游離脂肪酸從細(xì)胞內(nèi)流向細(xì)胞外的關(guān)鍵受體，其主要是通過促進(jìn)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)途徑達(dá)到防治AS 的目的［7］?；|(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases，MMPs）在AS 病變的全過程，特別是在導(dǎo)致AS 斑塊不穩(wěn)定性增加中起著主要的作用。其中，MMP-2 能降低AS 斑塊處膠原纖維、使其纖維帽變薄，不穩(wěn)定增加，是用來評估AS 斑塊不穩(wěn)定性的關(guān)鍵因子［8］。

新近研究表明，Ox-LDL 通過誘導(dǎo)FABP4 的產(chǎn)生，使 斑 塊 不 穩(wěn) 定 性 增 加［5，6，9］。同 時(shí)，F(xiàn)ABP4 能 抑制PPARγ 的表達(dá)導(dǎo)致脂質(zhì)合成增加，引起脂質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致AS 發(fā)展［10，11］。本研究團(tuán)隊(duì)前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)四妙勇安湯能抑制多種炎癥因子減輕血管內(nèi)膜炎癥反應(yīng)，減少AS 斑塊面積，使斑塊不穩(wěn)定性下降；但同時(shí)發(fā)現(xiàn)四妙勇安湯不具有降低血脂的作用［12，13］，是否能夠通過減少Ox-LDL 發(fā)揮抗AS 作用及其機(jī)制尚不清楚。因此，本研究旨在從調(diào)控Ox-LDL、FABP4、PPARγ 脂代謝途徑，探討四妙勇安湯對AS 頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的影響及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼料 ApoE-/-小鼠由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購入［許可證號：SCXK（京）2016-0006］，鼠齡為7 w，體重（20±2）g。在室內(nèi)溫度（20±2）℃、相對濕度50%、交替明暗為每12 h 一次的北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院屏障級動(dòng)物房（動(dòng)物房編號：SYXK（京）2015-0001）飼養(yǎng)，期間對于小鼠攝食、飲水及活動(dòng)均不限制。高脂配方參照文獻(xiàn)［14］，飼 料 成 分 由15% 脂 肪、0.25% 膽 固 醇 和84.75%基礎(chǔ)飼料組成，自北京華阜康科技有限公司購買［許可證號：SCXK（京）2014-0008］。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 實(shí)驗(yàn)藥物為解毒化瘀方四妙勇安湯：金銀花（批號：15051904）90 g、當(dāng)歸（批號：150313061）60 g、玄參（批號：150181431）90 g、甘草（批號：150280731）30 g，由北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院提供；鹽酸吡格列酮片，別名：卡司平（批號：國藥準(zhǔn)字H20050500），自中美華東有限公司購買；阿托伐他汀鈣片，別名：立普妥（批號：國藥準(zhǔn)字H20051408，產(chǎn)品批號：N37492），購買于輝瑞制藥有限公司。

1.1.3 主要試劑和儀器 小鼠Ox-LDL 血清酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒自伊萊瑞特生物科技股份Elabscience 有限公司購買（貨號：E-ELM0066c）；PPARγ、FABP4、MMP-2 以 及GAPDH第一抗體均購自美國Abcam 公司（貨號分別為ab45036、ab92501、ab37150 以 及ab9485）；羊 抗 兔IgG-HRP、BCA 蛋 白 測 定 試 劑 盒、5%BSA 和 增 強(qiáng)型RIPA 裂解液都購自博士德生物（貨號分別為BA1054、AR1189、AR0004、AR0102）；SP 二步法試劑盒（貨號：SP-9001）、DAB 顯色液（貨號：ZLI-9018）及中性樹膠（貨號：ZLI-9555），均自北京中杉金橋（ZSGB-BIO）有限公司購買。AU5800 全自動(dòng)生化測定儀（美國貝克曼-庫爾特有限公司）；BX60光學(xué)顯微鏡（日本Olympus 公司）；RM2135 組織切片機(jī)（德國Arcadia 公司）；EG1150 組織包埋機(jī)（德國Arcadia 公司）；MK3 全自動(dòng)酶標(biāo)儀（Thermo 公司）；LAS-4000 MINI 生物分子成像儀（日本富士公司）。

1.2 方法

1.2.1 模型制備 全部小鼠于1 周適應(yīng)性喂養(yǎng)后，參照文獻(xiàn)［15］，應(yīng)用頸總動(dòng)脈（右）套管術(shù)（Perivascular carotid collar placement，PCCP）制備ApoE-/-頸AS 小鼠模型。頸部至腋下剃毛并清潔，消毒麻醉后，于頸右側(cè)部剪開約2 cm 切口，使血管暴露于視野中并將呈搏動(dòng)狀態(tài)的右頸總動(dòng)脈分離，直至頸動(dòng)脈分叉處。隨后把內(nèi)徑橫切面為0.3 mm 的硅膠套管剪成長2.5 mm 的小段，套在頸右動(dòng)脈外周并固定上下端。假手術(shù)組不結(jié)扎，其余步驟相同。從PCCP 術(shù)當(dāng)天起由普飼改為高脂飼料繼續(xù)養(yǎng)10 周。本研究符合北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院動(dòng)物倫理規(guī)定，并在征得其批準(zhǔn)下進(jìn)行［編號：京中東內(nèi)（2016）06］。

1.2.2 分組及給藥 PCCP 術(shù)后隨機(jī)將40 只小鼠分為模型組、四妙勇安湯組、吡格列酮組、阿托伐他汀組，每組8 只。PCCP 術(shù)當(dāng)天起，按四妙勇安湯34.9 g/kg、鹽酸吡格列酮2.28 g/kg、阿托伐他汀2.57 g/kg 的劑量每天（上午8 時(shí)30 分）灌胃給藥1次，連續(xù)8 周。假手術(shù)和模型組以相同劑量去離子水灌胃，與各給藥組周期保持一致。

1.2.3 全自動(dòng)生化分析儀器測血清中脂質(zhì)含量自PCCP 術(shù)當(dāng)日給藥起到8 周給藥周期結(jié)束后對小鼠進(jìn)行取材，應(yīng)用摘取小鼠眼球取血方式收集血液，4 ℃離心機(jī)3 000 r/min 離心15 min。運(yùn)用全自動(dòng)生化儀檢測血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C 的含量［12］。

1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）檢測血清中Ox-LDL濃度 按照說明，根據(jù)ELISA 套盒所附實(shí)驗(yàn)執(zhí)行步驟，測小鼠血清含Ox-LDL 量。在酶標(biāo)儀450 nm 波長處讀取各組小鼠血清Ox-LDL 的OD 值，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.2.5 蘇木精-伊紅（HE）染色 將每只小鼠右頸總?cè)〕鰯R置在4%多聚甲醛，固定24 h 后脫水進(jìn)行石蠟包埋，切片厚3 μm，行HE 染色。60 ℃烤片機(jī)1 h，按照二甲苯、下行酒精的順序，脫蠟至水，流水狀態(tài)沖洗，按蘇木素染色液染色、1%鹽酸乙醇分化、流水狀態(tài)沖洗藍(lán)化、伊紅染色的順序進(jìn)行染色。上行酒精、二甲苯脫水、透明，采用中性樹膠黏附蓋玻片于載玻片上。并于光鏡下（×200）隨機(jī)選1～3 個(gè)視野觀察并收集圖像，應(yīng)用Image Pro Plus 6.0 圖象處理程序?qū)ρ軈?shù)測量。測量指標(biāo)：血管內(nèi)膜厚度（IT）、中膜厚度（MT）、內(nèi)彈力板環(huán)繞管腔面積（LA）、斑塊面積（PA）、內(nèi)膜與中膜厚度比（IT/MT）以及斑塊血管管腔面積比（PA/LA），并取IT、PA、IT/MT、PA/LA 均 值 進(jìn) 行 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 分 析［12］。見圖1。

圖1 頸動(dòng)脈IT、PA、IT/MT、PA/LA 測量方法（×200）Fig 1 Measure method of IT，PA，IT/MT，and PA/LA of carotid artery（×200）

1.2.6 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn) 同HE 法制片。在60 ℃烤片機(jī)烤2 h，常規(guī)脫蠟至水后，順序經(jīng)0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液中高溫抗原修復(fù)，3%過氧化氫破壞內(nèi)源性過氧化物酶活性，添加一抗FABP4（1∶200）、PPARγ（1∶150）和MMP-2（1∶200）于載 玻片上，置于4 ℃，16 h 后取出滴加二抗辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG，滴加DAB 顯色液（1∶1 000），隨后復(fù)染胞核。染色結(jié)果為：細(xì)胞核呈藍(lán)色，PPARγ蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、泡沫細(xì)胞等胞核著色，胞質(zhì)偶見，F(xiàn)ABP4 和MMP-2 在內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、泡沫細(xì)胞等胞漿著色。根據(jù)染色程度判斷其表達(dá)情況，鏡下見不同程度的黃色或棕黃色為陽性，陰性僅見胞核藍(lán)染［16］。

1.2.7 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn) 全程于冰上進(jìn)行。依據(jù)組織重量加入相應(yīng)RIPA，并對所提蛋白半定量。25 μg 蛋白上樣；電泳、電轉(zhuǎn)采取SDS-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）方法，5%脫脂奶粉封閉1 h，加入一抗FABP4（1∶1 000）、PPARγ（1∶1 000）、MMP-2（1∶1 000）和GAPDH（1∶1 000）分別倒入相應(yīng)分子量大小PVDF 膜處，置于4 ℃。16 h 后取出添加二抗：山羊抗兔IgG（1∶5 000）1 h，ECL 發(fā)光液顯色，凝膠程序系統(tǒng)中曝光、拍照，運(yùn)用Image J 圖像處理軟件對目的條帶與內(nèi)參進(jìn)行灰度值測量，并對兩者比值（目的條帶/內(nèi)參）統(tǒng)計(jì)分析［17］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 四妙勇安湯對AS 小鼠血清中脂質(zhì)含量的影響

與假手術(shù)組對比，模型組小鼠血清TC、TG、LDL-C 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），HDL-C 升高（P＜0.05）；與模型組比較，四妙勇安湯組和阿托伐他汀組TC、LDL-C 均升高（P＜0.05），HDL-C 均降低（P＜0.05），TG 無明顯變化，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；吡格列酮組TC、TG 未見明顯變化，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），HDL-C 降低（P＜0.05），LDL-C 升高（P＜0.05）。見表1。

表1 四妙勇安湯對AS 小鼠血清中脂質(zhì)含量的影響（n=8，±s，mmol/L）Tab 1 Effect of Simiao Yongan Decoction on lipids of AS mice（n=8，±s，mmol/L）

表1 四妙勇安湯對AS 小鼠血清中脂質(zhì)含量的影響（n=8，±s，mmol/L）Tab 1 Effect of Simiao Yongan Decoction on lipids of AS mice（n=8，±s，mmol/L）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

LDL-C 10.35±4.68 7.92±1.15 15.60±0.71#14.72±2.14#13.00±3.97#9.129 0.000組別假手術(shù)組模型組四妙勇安湯組吡格列酮組阿托伐他汀組F P TC 28.96±1.43 29.74±1.31 43.41±10.94#30.46±1.51 37.62±7.27#8.825 0.000 TG 1.50±0.45 1.57±0.43 1.65±0.64 1.87±0.45 1.69±0.35 0.706 0.593 HDL-C 0.60±0.10 1.17±0.19*0.46±0.16#0.57±0.10#0.72±0.21#24.087 0.000

2.2 四妙勇安湯對AS 小鼠血清中Ox-LDL 的影響

相比于假手術(shù)組，模型組小鼠血清Ox-LDL 升高（P＜0.05）；與模型組比較，四妙勇安湯組、吡格列酮組和阿托伐他汀組Ox-LDL 均降低（P＜0.05）。見表2。

表2 四妙勇安湯對AS 小鼠血清Ox-LDL 的影響（n=6，±s，ng/mL）Tab 2 Effect of Simiao Yongan Decoction on Ox-LDL of AS mice（n=6，±s，ng/mL）

表2 四妙勇安湯對AS 小鼠血清Ox-LDL 的影響（n=6，±s，ng/mL）Tab 2 Effect of Simiao Yongan Decoction on Ox-LDL of AS mice（n=6，±s，ng/mL）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

Ox-LDL 60.58±10.79 103.53±33.99*51.06±12.05#52.55±13.16#40.61±5.88#11.045 0.000組別假手術(shù)組模型組四妙勇安湯組吡格列酮組阿托伐他汀組F P

2.3 四妙勇安湯對ApoE-/-AS 小鼠頸動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)的影響

HE 染色結(jié)果顯示：假手術(shù)組小鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)膜無增厚，中膜無增殖無遷移，血管壁厚薄均一，未明顯觀察到AS 班塊。相比于假手術(shù)組，模型組觀察到頸動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)皮下間隙處有泡沫細(xì)胞大量沉積，凸向血管腔（P＜0.05），并可見中膜的平滑肌排列不整齊，向內(nèi)膜處遷移（P＜0.05），血管管腔狹窄明顯（P＜0.05），斑塊面積擴(kuò)大（P＜0.05），AS 斑塊明顯形成。與模型組對比，四妙勇安湯組、吡格列酮組和阿托伐他汀組頸右動(dòng)脈血管壁IT 降低（P＜0.05），平滑肌排列整齊、未見明顯變化，IT/MT 降低（P＜0.05），頸動(dòng)脈內(nèi)膜泡沫細(xì)胞含量降低，PA 明顯減少。見圖2～3。

圖2 四妙勇安湯對ApoE-/-AS 小鼠頸動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)的影響（HE 染色，×400）Fig 2 Effect of Simiao Yongan Decoction on pathological change in carotid artery of ApoE-/-AS mice（HE staining，×400）

圖3 四妙勇安湯對ApoE-/-AS 小鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜厚度（IT）、斑塊面積（PA）、內(nèi)膜比中膜厚度（IT/MT）、斑塊面積比血管管腔面積（PA/LA）的影響（n=5，±s）Fig 3 Effect of Simiao Yongan Decoction on intima thickness（IT），plaque area（PA），intima-media thickness（IT/MT），and lumen area ratio of plaque vessels（PA/LA）in carotid artery of ApoE-/-AS mice（n=5，±s）

2.4 四妙勇安湯對ApoE-/-AS 小鼠頸動(dòng)脈組織FABP4、PPARγ 和MMP-2 蛋白表達(dá)的影響

免疫組織組化結(jié)果可見：假手術(shù)組頸動(dòng)脈組織中FABP4 和MMP-2 陽性表達(dá)強(qiáng)度均較弱，PPARγ陽性表達(dá)強(qiáng)度較強(qiáng)。與假手術(shù)組相比，模型組FABP4 和MMP-2 陽性表達(dá)強(qiáng)度均較強(qiáng)，PPARγ 陽性強(qiáng)度較弱。與模型組相比，四妙勇安湯組、吡格列酮組和阿托伐他汀組給藥8 周后FABP4 和MMP-2 陽性表達(dá)強(qiáng)度均減弱，PPARγ 陽性表達(dá)強(qiáng)度較強(qiáng)。見圖4。

圖4 四妙勇安湯對ApoE-/-AS 小鼠頸動(dòng)脈FABP4、PPARγ 和MMP-2 蛋白表達(dá)的影響（免疫組織化學(xué)染色，×400）Fig 4 Effect of Simiao Yongan Decoction on FABP4，PPARγ，and MMP-2 proteins in carotid artery of ApoE-/-AS mice（Histochemistry stain，×400）

2.5 四妙勇安湯對ApoE-/-AS 小鼠脂代謝相關(guān)蛋白FABP4、PPARγ 及斑塊穩(wěn)定性蛋白MMP-2 表達(dá)水平的影響

Western blot 結(jié)果可見：與假手術(shù)組對比，模型組FABP4 和MMP-2 蛋白含量均升高（P＜0.05），PPARγ 蛋白含量降低（P＜0.05）。相比于模型組，四妙勇安湯組FABP4、MMP-2 蛋白含量均下降（P＜0.05），PPARγ 蛋白含量增加（P＜0.05）；吡格列酮組和阿托伐他汀組FABP4 和MMP-2 蛋白含量均 減 少（P＜0.05），PPARγ 蛋 白 含 量 增 加（P＜0.05）。見圖5。

圖5 四妙勇安湯對ApoE-/-AS 小鼠脂代謝相關(guān)蛋白FABP4、PPARγ 和MMP-2 水平影響Fig 5 Effect of Simiao Yongan Decoction on FABP4，PPARγ，and MMP-2 proteins in carotid artery of ApoE-/-AS mice

2.6 四妙勇安湯調(diào)控Ox-LDL 脂代謝途徑增加ApoE-/-小鼠AS 斑塊穩(wěn)定性的機(jī)制

其增加斑塊穩(wěn)定性的分子機(jī)制可能與抑制Ox-LDL 及其脂代謝途徑有關(guān)。見圖6。

圖6 四妙勇安湯調(diào)控Ox-LDL 脂代謝途徑增加ApoE-/-小鼠AS 斑塊穩(wěn)定性的機(jī)制Fig 6 Mechanism of effect of Simiao Yongan Decoction on stability of AS plaque of ApoE-/- mice via regulating Ox-LDL lipid metabolic pathway

3 討論

在AS 病理過程當(dāng)中，脂質(zhì)代謝障礙伴隨AS 的全過程［18］。Ox-LDL 是脂質(zhì)代謝異常的直接因素，以擁有較強(qiáng)的趨化性和細(xì)胞毒性為其致病特征，能夠誘導(dǎo)并加劇其被巨噬細(xì)胞識別吞噬，是導(dǎo)致泡沫細(xì)胞形成的直接原因［19-21］。Chainika 等［22］研究證實(shí)，血清Ox-LDL 升高可視為加劇AS 病變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。LDL-C 經(jīng)歷氧化修飾轉(zhuǎn)變成Ox-LDL，是導(dǎo)致AS 發(fā)生、發(fā)展必不可少的因素。本研究通過高脂聯(lián)合PCCP 術(shù)制備ApoE-/-小鼠AS 模型，給予四妙勇安湯藥物干預(yù)，發(fā)現(xiàn)它能顯著降低頸動(dòng)脈斑塊AS 小鼠血清Ox-LDL 水平，能夠在不降低TC、LDL-C 情況下，使AS 小鼠斑塊面積減少，抗AS 作用療效顯著。

血管IT、PA、IT/MT 以及PA/LA 的測量是預(yù)測AS 及心腦血管疾病等的重要因子［12］。本研究中頸動(dòng)脈HE 染色可見模型組內(nèi)膜厚度、平滑肌排列不整齊并增殖遷移，斑塊面積及血管狹窄率顯著增加，而給予四妙勇安湯治療能夠使IT、PA、IT/MT和PA/LA 均降低，進(jìn)而表明四妙勇安湯干預(yù)能減少內(nèi)膜厚度、抑制中膜平滑肌增殖，并有效減少頸動(dòng)脈斑塊面積和血管狹窄率，使斑塊穩(wěn)定性增加。

FABP4 作為游離脂肪酸結(jié)合伴侶蛋白，在脂代謝過程中具有轉(zhuǎn)運(yùn)、靶向定位的作用［17］。有研究表明［23］，F(xiàn)ABP4 在膽固醇代謝過程中具有重要調(diào)節(jié)作用，Ox-LDL 含量增加可誘導(dǎo)Mφ 中FABP4 含量升高，增多Mφ 內(nèi)膽固醇含量、導(dǎo)致AS 過程中泡沫細(xì)胞的產(chǎn)生和堆積。PPARγ 的活化依靠配體激活，隸屬于核內(nèi)受體超家族，參與機(jī)體脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)，能改善小鼠脂質(zhì)代謝紊亂，干預(yù)AS 病理進(jìn)程［24］。研究表明，激活PPARγ 能夠拮抗Ox-LDL 介導(dǎo)的脂質(zhì) 代 謝 紊 亂［25］，降 低MMP-2 表 達(dá)，增 加 斑 塊 穩(wěn) 定性［26］。MMP-2 是蛋白水解酶之一，在AS 過程中，通過降解多種膠原和基底膜成分，裂解AS 斑塊膠原纖維、減少斑塊處纖維帽的厚度，MMP-2 含量增加 是AS 斑 塊 不 穩(wěn) 定 性 升 高 的 重 要 評 價(jià) 因 子［27，28］。本研究免疫組化和WB 結(jié)果均表明：四妙勇安湯可激活頸動(dòng)脈PPARγ，顯著降低FABP4 和MMP-2 的蛋白表達(dá)。因而，推測四妙勇安湯通過抑制Ox-LDL 的產(chǎn)生，抑制FABP4 的表達(dá)，激活PPARγ，使斑塊穩(wěn)定性增加，MMP-2 降低，發(fā)揮抗AS 作用。

研究顯示［29］，他汀類藥能改善內(nèi)皮細(xì)胞功能、通過抗炎等多種途徑防治AS。但Zadelaar 等［30］研究發(fā)現(xiàn)，由于ApoE-/-小鼠缺乏膽固醇相關(guān)合成蛋白低密度脂蛋白受體等，所以沒有降低ApoE-/-小鼠 膽 固 醇 的 作 用，Zhang 等［31］報(bào) 道 的 他 汀 類 在ApoE-/-AS 小鼠具有升高膽固醇作用。本研究發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀組雖然使ApoE-/-AS 小鼠血清TC、LDL-C 含量增加，但能通過抑制Ox-LDL 的產(chǎn)生，減少FABP4 和MMP-2 含量，增加斑塊的穩(wěn)定性。與上述報(bào)道他汀類在ApoE-/-AS 小鼠不具有降低膽固醇作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。與Claesen 等［32］報(bào)道的在ApoE 缺失小鼠中，他汀類藥物通過多向效應(yīng)干預(yù)AS，而不依賴于降低膽固醇的結(jié)果也一致。PPARγ 激動(dòng)劑吡格列酮，可通過調(diào)節(jié)糖脂代謝、增加血管內(nèi)皮功能，抑制平滑肌增殖等多種途徑發(fā)揮抗AS 的作用［33］。本研究設(shè)立PPARγ 激動(dòng)劑吡格列酮為陽性藥，因前期研究表明四妙勇安湯能夠激活血管和肝臟的PPARγ 表達(dá)［14，34］，本研究進(jìn)一步證明其能夠激活頸動(dòng)脈中PPARγ，增加其表達(dá)，發(fā)揮防治AS 的作用，其抗AS 作用與吡格列酮藥物作用一致。本研究的假手術(shù)組與模型組小鼠同為ApoE-/-小鼠高脂飼料喂養(yǎng)，因此血脂檢測發(fā)現(xiàn)TC、LDL-C 均升高，然而，從HE 染色病理結(jié)果觀察到假手術(shù)組頸右動(dòng)脈未形成斑塊，模型組頸AS 斑塊明顯形成，驗(yàn)證了頸動(dòng)脈套管有利于快速導(dǎo)致斑塊的產(chǎn)生，而假手術(shù)組只剝離血管不套管不會(huì)形成斑塊，與模型組形成明顯區(qū)別。

綜上所述，四妙勇安湯通過拮抗ApoE-/-AS小鼠Ox-LDL 介導(dǎo)的血管壁損傷，激活PPARγ，抑制FABP4 表達(dá)［23，25］；同時(shí)，PPARγ 活性增加能夠減輕Ox-LDL 誘導(dǎo)的血管損傷，降低MMP-2，使斑塊穩(wěn)定性增加，發(fā)揮穩(wěn)定AS 斑塊作用［35，36］。

本研究僅從整體動(dòng)物水平對四妙勇安湯調(diào)控Ox-LDL 脂代謝途徑發(fā)揮穩(wěn)定AS 斑塊的機(jī)制進(jìn)行了初步的探討，后續(xù)將從細(xì)胞水平進(jìn)行深入的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。