王曉雯，丁大中，欒成章

（山東省青島市食品藥品檢驗(yàn)研究院·國(guó)家藥品監(jiān)督管理局海洋中藥質(zhì)量研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071）

布洛偽麻片為布洛芬和鹽酸偽麻黃堿組成的復(fù)方制劑，主要用于治療感冒或過(guò)敏性鼻炎引起的發(fā)熱、頭痛、咽喉痛、四肢酸痛、關(guān)節(jié)痛、鼻塞、流涕、打噴嚏等癥狀［1］。目前，該制劑含量測(cè)定的法定檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為2020 年版《中國(guó)藥典（二部）》［2］，也有文獻(xiàn)報(bào)道了幾種改進(jìn)的液相色譜檢測(cè)方法［3-5］，但均存在流動(dòng)相添加離子對(duì)試劑而造成操作煩瑣、色譜平衡時(shí)間長(zhǎng)、損傷色譜柱，以及因處方中布洛芬和鹽酸偽麻黃堿含量差異而造成色譜圖中兩者峰面積差異過(guò)大的問(wèn)題。本研究中建立了同時(shí)測(cè)定布洛偽麻片中布洛芬和鹽酸偽麻黃堿含量的超高效液相色譜法［6-12］，為控制該制劑質(zhì)量提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters ACQUITY UPLC 超高效液相色譜儀，包含Empower 色譜工作站（美國(guó)Waters公司）；AG285型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度為十萬(wàn)分之一）。

1.2 試藥

布洛偽麻片（山東新華制藥股份有限公司，批號(hào)分別為2011040，2011041，2011039，規(guī)格為每片含布洛芬0.2 g，鹽酸偽麻黃堿30 mg）；布洛芬對(duì)照品（批號(hào)100179 - 201707，含量99.9%），鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)171237-201510，含量99.8%），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純，氯乙酸、氨水均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters BEH Phenyl 柱（150 mm × 2.1 mm，1.7μm）；流動(dòng)相：氯乙酸溶液（pH3.0）-乙腈（52∶48，V/V）；流速：0.5 mL/ min；檢測(cè)波長(zhǎng)：257 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。

2.2 溶液制備

取布洛芬對(duì)照品100 mg、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品15 mg，精密稱(chēng)定，置同一500 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容，搖勻，即得布洛芬、鹽酸偽麻黃堿質(zhì)量濃度分別為0.2，0.03 mg/mL 的混合對(duì)照品溶液。取樣品 20 片，研細(xì)，稱(chēng)取細(xì)粉適量，精密稱(chēng)定，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 mL 置50 mL 容量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，即得供試品溶液。以流動(dòng)相作為空白對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：分別取2.2 項(xiàng)下3 種溶液適量，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果布洛芬峰與鹽酸偽麻黃堿峰分離良好，且空白對(duì)照溶液在與對(duì)照品溶液保留時(shí)間相同處無(wú)干擾峰，表明專(zhuān)屬性良好。詳見(jiàn)圖1。

圖1 超高效液相色譜圖Fig.1 UPLC chromatograms

線性關(guān)系考察：精密吸取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分進(jìn)樣量（X，mg）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得布洛芬回歸方程Y1= 0.000 013X1- 0.000 3（r= 0.999 6），鹽酸偽麻黃堿回歸方程Y2=0.000 016X2-0.000 219（r=0.999 9）。結(jié)果表明，布洛芬、鹽酸偽麻黃堿進(jìn)樣量分別在0.201～0.602 mg 和 0.030～0.091 mg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果布洛芬及鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.11%及0.12%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液適量，室溫下分別于第 0，1，3，6，12，24 h 時(shí)按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果布洛芬及鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.11%及0.14%（n= 6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：稱(chēng)取樣品粉末（批號(hào)為2011040），精密稱(chēng)定，共6 份，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果布洛芬及鹽酸偽麻黃堿含量的RSD分別為0.33%及0.42%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)2011040），研細(xì)，取粉末適量，共9份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液各適量，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3 批樣品各適量，分別按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量，同時(shí)與2020 年版《中國(guó)藥典（二部）》中含量測(cè)定方法所得結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果布洛芬、鹽酸偽麻黃堿的平均含量分別為99.20%和100.77%，與采用藥典方法得出含量的RSD均不超過(guò)0.3%（見(jiàn)表2）。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果Tab.2 Results of content determination of pseudoephedrine hydrochloride and ibuprofen in samples

3 討論

采用藥典中相關(guān)方法及根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，于流動(dòng)相中添加十二烷基硫酸鈉的離子對(duì)試劑會(huì)造成色譜平衡時(shí)間長(zhǎng)、損傷色譜柱等問(wèn)題。本研究通過(guò)預(yù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)并篩選出氯乙酸溶液搭配乙腈的流動(dòng)相系統(tǒng)，避免了離子對(duì)試劑的使用。

全波長(zhǎng)掃描可知，布洛芬與鹽酸偽麻黃堿的最大吸收波長(zhǎng)分別為224 nm 和219 nm，藥典中選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為兩個(gè)主成分最大吸收波長(zhǎng)附近的215 nm，但存在末端吸收基線噪音高、色譜圖中兩主峰面積差異巨大等缺陷。預(yù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)了兩種波長(zhǎng)方案：一是選擇兩主成分吸收曲線的交叉點(diǎn)，分別為220 nm 和237 nm，其中220 nm 與215 nm 更接近，存在相同缺陷，而在237 nm波長(zhǎng)下，鹽酸偽麻黃堿的吸光度相比215 nm降低80%以上，因其處方含量小，相同質(zhì)量濃度下的吸光度大幅降低會(huì)影響該成分檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性；二是選擇鹽酸偽麻黃堿的次強(qiáng)吸收波長(zhǎng)257 nm，避免了末端吸收造成基線噪音過(guò)高，該波長(zhǎng)處吸光度約為215 nm 處的60%，足以保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，同時(shí)布洛芬在此波長(zhǎng)下吸光度雖低，但處方中含量高，也能保證足夠的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性。故最終確定了257 nm的檢測(cè)波長(zhǎng)。

藥典及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道使用C18柱或氰基柱，經(jīng)查詢(xún)分析，本研究中兩個(gè)主成分均為含苯環(huán)的小分子化合物，選擇苯基柱是因?yàn)槠渚邆涞膒-p共軛相互作用能增強(qiáng)極性芳香族化合物的分離和保留能力。故本研究中選擇苯基柱。

遵循樣品溶劑與流動(dòng)相盡量一致的原則，預(yù)試驗(yàn)中使用了新篩選的流動(dòng)相提取樣品，并平行對(duì)比藥典中的樣品提取方法，結(jié)果兩種方案均能將目標(biāo)組分完全提取出來(lái)，兩個(gè)主成分在溶劑中的穩(wěn)定性也滿足試驗(yàn)需求。本研究結(jié)果表明，所建方法能滿足各項(xiàng)試驗(yàn)的要求，且使用新建方法與現(xiàn)行藥典中方法檢測(cè)樣品含量的結(jié)果基本一致。

本研究中使用UPLC 法替代了現(xiàn)行藥典中的高效液相色譜（HPLC）法，由于UPLC 儀器的管路孔徑及適用的色譜柱填料粒度均遠(yuǎn)小于常規(guī)HPLC 法，樣品質(zhì)量濃度、進(jìn)樣體積、液相流速均需進(jìn)行相應(yīng)縮減，同時(shí)流動(dòng)相和進(jìn)樣溶液推薦使用0.2 mm 濾膜濾過(guò)，流動(dòng)相建議當(dāng)天配制當(dāng)天使用。

綜上所述，本研究中建立了可同時(shí)檢測(cè)布洛偽麻片中布洛芬和鹽酸偽麻黃堿含量的UPLC 法，彌補(bǔ)了現(xiàn)有方法的缺陷，具有準(zhǔn)確、快速、便捷、合理的特點(diǎn)，對(duì)其他劑型中布洛芬與鹽酸偽麻黃堿的含量測(cè)定及相關(guān)制劑的質(zhì)量控制也有借鑒意義。