朱方園，邵營波，陳 琦，賀亞寧，劉朝俊，聶 冰，劉 慧

(鄭州大學(xué)人民醫(yī)院/河南省人民醫(yī)院乳腺外科，河南 鄭州 450003)

女性乳腺癌現(xiàn)已超過肺癌成為全世界新發(fā)病例最多的惡性腫瘤，也是病死率最高的惡性腫瘤之一，2020年全世界約有230萬女性乳腺癌新發(fā)病例，約占所有癌癥新發(fā)病例的11.7%，占所有癌癥致死病例的6.9%[1]。乳腺癌是一種異質(zhì)性疾病，臨床上按照免疫組織化學(xué)特點(diǎn)將其分為腔面A型(luminal A)、腔面B型(luminal B)、人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)過表達(dá)型及三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)[2]，根據(jù)不同分型擬定個(gè)體化治療方案。TNBC患者的雌激素受體、孕激素受體及HER-2均為陰性，約占所有類型乳腺癌的15.0%[3]，具有發(fā)病年齡低、侵襲轉(zhuǎn)移力強(qiáng)、預(yù)后差等特點(diǎn)[4]，目前缺乏有效的治療靶點(diǎn)，因此,迫切需要尋找新的腫瘤標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)以改善患者預(yù)后。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是長度大于200個(gè)核苷酸的不編碼蛋白質(zhì)的RNA分子，調(diào)控著包括乳腺癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[5-7]。lncRNA 前列腺癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄本7(prostate cancer associated transcript 7,PCAT7)是一種促癌基因，已證明其在非小細(xì)胞肺癌、鼻咽癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)異常[8-9]。ZHOU等[10]首次報(bào)道了PCAT7在乳腺癌組織及細(xì)胞中表達(dá)異常，并促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲，抑制細(xì)胞凋亡。但有關(guān)PCAT7在TNBC中的作用仍需進(jìn)一步研究。本研究通過干擾TNBC MDA-MB-436細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PCAT7的表達(dá)，探討lncRNA PCAT7對TNBC MDA-MB-436細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響及相關(guān)機(jī)制，旨在為TNBC的治療尋找潛在靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞人TNBC MDA-MB-436細(xì)胞購自美國ATCC細(xì)胞庫，置于液氮中保存。

1.2 主要試劑與儀器lncRNA PCAT7小干擾RNA(lncRNA PCAT7-small interfering RNA,lncRNA PCAT7-siRNA)、control siRNA由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)并合成；siRNA轉(zhuǎn)染試劑購自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司，Leibovitz′s L-15培養(yǎng)基購自武漢普諾賽生命科技有限公司，胰島素、Tris緩沖生理鹽水(Tris-buffered saline and 0.1% Tween-20,TBST)購自翌圣生物科技(上海)股份有限公司，辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，青霉素-鏈霉素雙抗購自生工生物工程(上海)股份有限公司，結(jié)晶紫染料購自天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution,PBS)購自武漢博士德生物工程有限公司，多聚甲醛購自國藥集團(tuán)(上海)化學(xué)試劑有限公司，超純RNA提取試劑盒、二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白定量試劑盒購自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，反轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(real-time polymerase chain reaction,Real-Time PCR)試劑盒購自南京諾唯贊生物科技有限公司，Transwell小室及Western blot檢測試劑盒購自美國Corning公司，放射免疫沉淀(radio-immunoprecipitation,RIPA)蛋白裂解液購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)上樣緩沖液購自上海西唐生物有限公司，谷胱甘肽、胎牛血清購自以色列Biological Industries公司，胰蛋白酶、碘化丙啶(propidium iodide,PI)購自美國Sigma公司，Matrigel基質(zhì)膠購自美國Corning公司，p27一抗購自美國SAB公司，電化學(xué)發(fā)光(electrochemiluminescence,ECL)檢測試劑盒購自北京莊盟國際生物基因科技有限公司；Forma型CO2培養(yǎng)箱、NanoDrop 2000分光光度計(jì)購自美國Thermo公司，臺式高速低溫離心機(jī)購自德國Eppendorf公司，BD FACS Calibur流式細(xì)胞儀購自美國BD公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染設(shè)計(jì)合成3種lncRNA PCAT7-siRNA及1種control siRNA，其中l(wèi)ncRNA PCAT7-siRNA1序列為5′-GUGGCAGAUACCACCUUAAATT-3′，lncRNA PCAT7-siRNA2序列為5′-CCCGUCUUUACUAAAUAUATT-3′，lncRNA PCAT7-siRNA3序列為5′-GUGCCAAGGAGACUCAAUATT-3′，control siRNA序列為5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′。將MDA-MB-436細(xì)胞從液氮中取出，置入預(yù)熱至37 ℃的水浴鍋中快速晃動，解凍后將細(xì)胞接種于含體積分?jǐn)?shù)15%胎牛血清、體積分?jǐn)?shù)1%青霉素-鏈霉素雙抗、10 mg·L-1胰島素、10 mg·L-1谷胱甘肽的Leibovitz′s L-15培養(yǎng)基中，置于37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；取對數(shù)生長期MDA-MB-436細(xì)胞，胰蛋白酶消化，以細(xì)胞密度2×105L- 1接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞融合度達(dá)80%時(shí)，將細(xì)胞分為lncRNA PCAT7-siRNA1組、lncRNA PCAT7-siRNA2組、lncRNA PCAT7-siRNA3組3個(gè)干擾組和1個(gè)空載組，分別轉(zhuǎn)染lncRNA PCAT7-siRNA1、lncRNA PCAT7-siRNA2、lncRNA PCAT7-siRNA3和control siRNA，轉(zhuǎn)染6 h后更換為完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集各組細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 Real-Time PCR法檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞lncRNA PCAT7表達(dá)情況收集轉(zhuǎn)染 6 h后繼續(xù)培養(yǎng)48 h的各組MDA-MB-436細(xì)胞，使用超純RNA提取試劑盒提取總RNA，使用NanoDrop 2000分光光度計(jì)測定RNA純度和濃度，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒對樣本進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA，根據(jù)Real-Time PCR試劑盒說明書配制反應(yīng)體系(20 μL)，lncRNA PCAT7正向引物序列為5′-AAACAAGCCAACCGCACAAT-3′，反向引物序列為5′-CCTGCTTGCTGTGTTACTGC-3′；內(nèi)參基因甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)正向引物序列為5′-AAGACCTTGGGCTGGGACTG-3′，反向引物序列為5′-ACCAAATCCGTTGACTCCGA-3′。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃循環(huán)反應(yīng)10 s，60 ℃循環(huán)反應(yīng)30 s，循環(huán)40次，溶解曲線95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，65 ℃ 15 s，重復(fù)35個(gè)循環(huán)。以GAPDH作為內(nèi)參基因，采用2-△△Ct法計(jì)算lncRNA PCAT7 mRNA的相對表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取均值，選擇lncRNA PCAT7相對表達(dá)水平最低的干擾組MDA-MB-436細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測MDA-MB-436細(xì)胞增殖能力取“1.3.2”項(xiàng)選定的、lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組MDA-MB-436細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，使用“1.3.1”項(xiàng)配制的Leibovitz′s L-15培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，以每孔1 000個(gè)細(xì)胞鋪于6孔板中，將細(xì)胞置于37 ℃含體積分?jǐn)?shù)5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔2 d更換1次培養(yǎng)基，培養(yǎng)14 d后，移去舊的培養(yǎng)基，PBS清洗1次，加入 40 g·L-1多聚甲醛室溫固定30 min，移去多聚甲醛，PBS清洗2次，加入結(jié)晶紫，搖床上輕輕搖晃 30 min，移去結(jié)晶紫，PBS清洗，完全晾干，顯微鏡下觀察，計(jì)算細(xì)胞克隆形成數(shù)目。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取均值。

1.3.4 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測MDA-MB-436細(xì)胞遷移能力取“1.3.2”項(xiàng)選定的lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組MDA-MB-436細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，將細(xì)胞消化后重懸，接種于6孔板中，細(xì)胞單層融合后，移去培養(yǎng)基，使用 200 μL 移液器槍頭垂直制作劃痕，PBS輕輕洗去劃下細(xì)胞及細(xì)胞碎片，加入完全培養(yǎng)基，分別于0、48 h 對各組細(xì)胞進(jìn)行拍照，使用Image J軟件測量劃痕寬度并計(jì)算劃痕愈合率。劃痕愈合率=(0 h 劃痕寬度-48 h劃痕寬度)/0 h劃痕寬度×100%。

1.3.5 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測MDA-MB-436細(xì)胞侵襲能力取“1.3.2”項(xiàng)選定的lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組MDA-MB-436細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，消化重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為5 × 108L-1，將200 μL細(xì)胞懸液接種于預(yù)先鋪設(shè)稀釋Matrigel膠的Transwell小室的上室，下室中加入600 μL 的體積分?jǐn)?shù)20%胎牛血清完全培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)箱中靜置48 h，棄去培養(yǎng)基，將小室置于含PBS的燒杯中輕輕涮洗3遍，40 g·L-1多聚甲醛室溫固定1 h，洗去固定液后結(jié)晶紫室溫染色30 min，PBS清洗3遍，晾干后顯微鏡下隨機(jī)選取3個(gè)視野，計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)，取均值。

1.3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測MDA-MB-436細(xì)胞周期分布情況取“1.3.2”項(xiàng)選定的lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組MDA-MB-436細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，1 500 r·min-1離心5 min，預(yù)冷PBS洗滌2次，加入預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)75%乙醇，4 ℃固定4 h，離心去除乙醇，PBS洗滌1次，加入100 μL核糖核酸酶，37 ℃水浴30 min，加入400 μL PI染液，4 ℃避光孵育30 min，流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測各組細(xì)胞周期，重復(fù)3次，取均值。

1.3.7 Western blot法檢測MDA-MB-436細(xì)胞p27蛋白表達(dá)情況取“1.3.2”項(xiàng)選定的lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組MDA-MB-436細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，使用預(yù)冷PBS洗滌2次，加入RIPA裂解液裂解細(xì)胞，充分震蕩，冰上靜置30 min，4 ℃ 13 500 r·min-1離心 20 min，收集上清，使用BCA蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量。將上清與SDS-PAGE上樣緩沖液混合，電泳30 min后轉(zhuǎn)膜，脫脂牛奶室溫封閉2 h，加入p27一抗(稀釋度為1500)，4 ℃孵育過夜，TBST洗滌3次，每次10 min，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(稀釋度為15 000)，室溫孵育 2 h，TBST洗滌3次，每次10 min，洗滌后加入二抗室溫下孵育 2 h，使用ECL發(fā)光液顯影，吸去發(fā)光液，采用凝膠成像系統(tǒng)拍照，應(yīng)用Image J軟件分析目的條帶灰度值，以目標(biāo)蛋白條帶灰度值與內(nèi)參GAPDH條帶灰度值的比值表示目標(biāo)蛋白的相對表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取均值。

2 結(jié)果

2.1 各組MDA-MB-436細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PCAT7 mRNA相對表達(dá)量比較lncRNA PCAT7-siRNA1組、lncRNA PCAT7-siRNA2組、lncRNA PCAT7-siRNA3組及空載組MDA-MB-436細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PCAT7 mRNA相對表達(dá)量分別為0.91±0.02、0.72±0.01、0.55±0.01及1.00±0.03。lncRNA PCATT-siRNA1組MDA-MB-436細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PCAT7 mRNA相對表達(dá)量與空載組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-4.286,P>0.05)；lncRNA PCAT7-siRNA2組和lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PCAT7 mRNA相對表達(dá)量顯著低于空載組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-28.028、-47.748,P<0.05)；lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞中l(wèi)ncRNA PCAT7 mRNA相對表達(dá)量顯著低于lncRNA PCAT7-siRNA2組(t=12.705,P<0.01)，選擇lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 lncRNA PCAT7-siRNA3組與空載組MDA-MB-436細(xì)胞增殖能力比較培養(yǎng)14 d后，lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組MDA-MB-436細(xì)胞克隆形成數(shù)分別為(69.00±5.51)、(116.67±3.28)個(gè),lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞克隆形成數(shù)顯著少于空載組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-7.434,P<0.01)。

2.3 lncRNA PCAT7-siRNA3組與空載組MDA-MB-436細(xì)胞遷移能力比較結(jié)果見圖1。細(xì)胞劃痕培養(yǎng)48 h后，lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組細(xì)胞劃痕愈合率分別為(13.52±1.69)%、(46.89±2.41)%，lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞劃痕愈合率顯著低于空載組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-11.340,P<0.01)。

A：lncRNA PCAT7-siRNA3組；B：空載組。

2.4 lncRNA PCAT7-siRNA3組與空載組MDA-MB-436細(xì)胞侵襲能力比較結(jié)果見圖2。lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組MDA-MB-436細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)分別為(52.67±10.90)、(150.67±8.41)個(gè)；lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞侵襲數(shù)顯著少于空載組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-7.120，P<0.01)。

A：lncRNA PCAT7-siRNA3組；B：空載組。

2.5 lncRNA PCAT7-siRNA3組與空載組MDA-MB-436細(xì)胞周期分布比較結(jié)果見圖3和表1。lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞比例顯著高于空載組，G2/M期細(xì)胞比例顯著低于空載組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.920、-6.990,P<0.01)；lncRNA PCAT7-siRNA3組與空載組MDA-MB-436細(xì)胞S期細(xì)胞比例比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.083,P>0.05)。

A：lncRNA PCAT7-siRNA3組；B：空載組。

表1 lncRNA PCAT7-siRNA3組與空載組MDA-MB-436細(xì)胞周期分布比較

2.6 lncRNA PCAT7-siRNA3組與空載組MDA-MB-436細(xì)胞中p27蛋白相對表達(dá)量比較結(jié)果見圖4。lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組MDA-MB-437細(xì)胞中p27蛋白相對表達(dá)量分別為0.98±0.04、0.54±0.13；lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞中p27蛋白相對表達(dá)量顯著高于空載組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.200，P<0.05)。

A：空載組；B：lncRNA PCAT7-siRNA3組。

3 討論

女性乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，成為威脅女性身心健康的主要問題之一[11]。TNBC的發(fā)病過程涉及癌基因過表達(dá)以及抑癌基因突變、缺失等，因缺乏有效的治療靶點(diǎn)，目前TNBC的治療以化學(xué)治療為主，但僅20%～30%的TNBC患者對化學(xué)治療敏感，導(dǎo)致TNBC患者的預(yù)后差于其他分型的乳腺癌患者[12]。因此，探索影響TNBC增殖、遷移和侵襲的相關(guān)機(jī)制有望為TNBC的治療提供新思路。

研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)，并參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[13]。lncRNA PCAT7位于染色體9q22.32，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)lncRNA PCAT7影響人體多種惡性腫瘤的進(jìn)展[8-10]。相關(guān)研究顯示，lncRNA PCAT7在鼻咽癌組織中的表達(dá)顯著高于相對應(yīng)的正常組織，且與不良預(yù)后有關(guān)，敲低lncRNA PCAT7可抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖能力[9]。另有研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA PCAT7在非小細(xì)胞肺癌組織及細(xì)胞中高表達(dá)，下調(diào)lncRNA PCAT7的表達(dá)可抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲[8]。ZHOU等[10]研究發(fā)現(xiàn)，下調(diào)lncRNA PCAT7可抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。但目前關(guān)于lncRNA PCAT7在TNBC中的作用及機(jī)制尚未明確。

為研究lncRNA PCAT7對TNBC細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，本研究將MDA-MB-436細(xì)胞分為lncRNA PCAT7-siRNA1組、lncRNA PCAT7-siRNA2組、lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組，分別轉(zhuǎn)染lncRNA PCAT7-siRNA1、lncRNA PCAT7-siRNA2、lncRNA PCAT7-siRNA3和control siRNA，選擇lncRNA PCAT7相對表達(dá)水平最低的lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，觀察lncRNA PCAT7-siRNA3組和空載組MDA-MB-436細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞周期分布、遷移能力和侵襲能力，探討lncRNA PCAT7對TNBC MDA-MB-436細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響，研究顯示，lncRNA PCAT7-siRNA3組lncRNA PCAT7 mRNA相對表達(dá)量低于空載組，提示lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞中的lncRNA PCAT7被成功下調(diào)，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞的克隆形成數(shù)量顯著低于空載組，說明下調(diào)lncRNA PCAT7表達(dá)可抑制TNBC MDA-MB-436細(xì)胞的增殖能力；進(jìn)一步比較2組細(xì)胞周期分布發(fā)現(xiàn)，lncRNA PCAT7-siRNA3組G0/G1期細(xì)胞比例高于空載組，G2/M期細(xì)胞比例低于空載組，提示下調(diào)lncRNA PCAT7可能通過調(diào)控細(xì)胞周期分布而抑制TNBC細(xì)胞增殖能力；劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，細(xì)胞劃痕培養(yǎng)48 h后，lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞的劃痕愈合率顯著低于空載組，說明下調(diào)lncRNA PCAT7表達(dá)可抑制MDA-MB-436細(xì)胞的遷移能力，提示lncRNA PCAT7可能參與了TNBC細(xì)胞的遷移過程；侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞的侵襲細(xì)胞數(shù)顯著少于空載組，說明下調(diào)lncRNA PCAT7表達(dá)可抑制MDA-MB-436細(xì)胞的侵襲能力，提示lncRNA PCAT7可能參與了TNBC細(xì)胞的侵襲過程。

p27是細(xì)胞周期抑制蛋白Cip/Kip家族成員，通過與細(xì)胞周期蛋白CDK2結(jié)合抑制激酶活性，從而抑制細(xì)胞周期，發(fā)揮抑癌作用[14]。GU等[15]研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA HCG11在骨肉瘤中低表達(dá)，并通過與miR-492-5p結(jié)合而上調(diào)p27的表達(dá)，從而抑制骨肉瘤生長。lncRNA TRMP可通過抑制p27調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及腫瘤異種移植增長[16]。本研究結(jié)果顯示，lncRNA PCAT7-siRNA3組MDA-MB-436細(xì)胞中p27的相對表達(dá)水平顯著高于空載組，推測下調(diào)lncRNA PCAT7對MDA-MB-436細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的抑制作用可能與調(diào)控細(xì)胞周期抑制蛋白p27的表達(dá)有關(guān)。

綜上所述，下調(diào)lncRNA PCAT7表達(dá)可顯著抑制TNBC MDA-MB-436細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，其中抑制MDA-MB-436細(xì)胞增殖能力的機(jī)制可能與促進(jìn)細(xì)胞周期抑制蛋白p27的表達(dá)有關(guān)，提示lncRNA PCAT7可能成為TNBC治療的潛在靶點(diǎn)。