任 煜，劉婷婷，祁冰潔，祝凌麗

(安慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 科研中心實(shí)驗(yàn)室，安徽 安慶 246052)

高血壓是惡性心腦血管事件的主要危險(xiǎn)因素之一，腦卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性腎臟病是其主要并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅人類的身體健康，是醫(yī)學(xué)界重點(diǎn)的課題之一。降壓藥物調(diào)節(jié)血壓的途徑有多種，包括影響交感神經(jīng)，影響腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)，調(diào)節(jié)鈣通道，改善血管內(nèi)皮功能，影響血液流變學(xué)，改變心臟血流動(dòng)力學(xué)，抑制血管重構(gòu)，利尿降壓等。[1]臨床治療高血壓的藥物很多，但這些藥物的靶點(diǎn)比較單一，都有其副作用，因此，發(fā)現(xiàn)安全有效的抗高血壓藥物具有重要意義。

人參是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材，對(duì)人體健康具有很重要的作用。人參中含有很多的生理活性物質(zhì)，其中人參皂苷是迄今為止研究最多的活性物質(zhì)，其中人參皂苷Rg2具有抗心肌缺血、改善失血性休克血流動(dòng)力學(xué)、調(diào)節(jié)血壓、改善腦缺血的作用。[2-4]近年來(lái)，越來(lái)越多的學(xué)者研究人參皂苷Rg2對(duì)心血管系統(tǒng)的影響。研究表明人參皂苷對(duì)于自發(fā)性高血壓大鼠的有降壓作用。[5]但人參皂苷Rg2具有舒張血管環(huán)的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究采用離體血管環(huán)灌流方法，考察人參皂苷Rg2對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌的舒張作用并探討其作用機(jī)制，為篩選治療心血管疾病治療的天然藥物提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 藥品與試劑

人參皂苷Rg2(G-Rg2，成都曼思特生物有限公司)；去甲腎上腺素(NE，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：103K0979)；乙酰膽堿(ACH，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：BCBC9786V)；二甲基亞砜(DMSO，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：SHBC2107V)；左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：BCBF4375V)，1H-[1，2，4]惡草靈并[4，3-a]喹喔啉-1-酮(ODQ，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：060M4102)；吲哚美辛(Indomethacin，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：030M1660V)；氯化鉀(KCl，國(guó)產(chǎn)分析純)；氯化鈣(CaCl2，國(guó)產(chǎn)分析純)。

K-H試液的為本課題組臨用時(shí)自制：NaCl 118 mmol/L，KCl 4.7 mmol/L，NaHCO325 mmol/L，KH2PO41.2 mmol/L，MgSO41.2 mmol/L，CaCl21.3 mmol/L，d-glucose 10 mmol/L，純水配制后，再充分通95% O2和5% CO2的混和氣體后，用PH計(jì)測(cè)PH值，并滴定至PH7.4。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

Maclab AID生物記錄軟件(ADInstrument，澳大利亞)；Radnoti組織器官灌流系統(tǒng)(ADInstrument，澳大利亞)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠，雄性，體重250-300 g，清潔級(jí)，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，批號(hào)：SCXK 200F(京)0004。

2 方法

2.1 大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的制備

將大鼠端頭處死后，迅速打開(kāi)胸腔分離胸主動(dòng)脈，立即投入4℃預(yù)冷的氧飽和Kreb-Henseleit(K-H)液中，小心分離周圍組織后，剪成3-4 mm長(zhǎng)的血管環(huán)。將處理好的動(dòng)脈環(huán)置于含K-H液的37℃恒溫浴槽中，一端固定于浴槽底部，另一端連接張力換能器，固定后調(diào)整動(dòng)脈環(huán)張力至0.5 g，并不斷通入95% O2和5% CO2的混合氣體。用PowerLab /8P生物信號(hào)記錄系統(tǒng)分析記錄血管的等張收縮力，平衡15分鐘。更換K-H液后，將張力維持在0.5 g的血管環(huán)的張力上調(diào)0.5 g，穩(wěn)定15 min；重復(fù)換液并將張力繼續(xù)上調(diào)0.5 g，直至達(dá)到血管環(huán)最佳靜息張力2.0 g，在該條件下穩(wěn)定90 min，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。首先加入KCl溶液(終濃度為60 mmol/L)至浴槽，達(dá)到最大幅度后換液，加入K-H試液，平衡到2.0 g，穩(wěn)定15 min。

2.2 血管環(huán)內(nèi)皮完整性的檢測(cè)

采用去甲腎上腺素(NE，終濃度為10-6mol/L)刺激血管環(huán)，使其張力上升至最大幅度，而后加入ACH(終濃度為10-5mol/L)，計(jì)算該血管環(huán)的舒張幅度，選擇舒張幅度大于60%和小于10%的血管環(huán)進(jìn)行后續(xù)預(yù)刺激收縮實(shí)驗(yàn)。

2.3 去內(nèi)皮胸主動(dòng)脈環(huán)的制備

取血管環(huán)，用玻璃棒輕輕碾壓血管，以除去血管內(nèi)皮。加入NE溶液(終濃度為10-6mol/L)至浴槽，使血管環(huán)收縮；待血管張力穩(wěn)定后，加入Ach溶液(終濃度為10-5mol/L)使血管舒張。若血管環(huán)舒張幅度小于最大收縮幅度的5%，則可認(rèn)為內(nèi)皮去除完全，可用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.4 累積濃度人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)內(nèi)皮完整的離體胸主動(dòng)脈的作用

采用NE刺激穩(wěn)定后的離體血管環(huán)，使其穩(wěn)定在最大收縮幅度，加入不同累積濃度的人參皂苷Rg2(G-Rg2終濃度均為10-5、10-4、10-3、10-2mol/L)，對(duì)應(yīng)給藥時(shí)間點(diǎn)分別記為給藥點(diǎn)1、2、3、4。用K-H營(yíng)養(yǎng)液代替Rg2溶液外，其余操作步驟相同，作為空白對(duì)照組。采用肌張力換能器分別在給藥點(diǎn)1、2、3、4上測(cè)定給藥組與空白組的血管環(huán)張力，計(jì)算其舒張率：舒張率(%)=加入G-Rg2后血管環(huán)舒張幅度/NE誘發(fā)血管環(huán)的最大收縮幅度×100%。試驗(yàn)重復(fù)10次，記錄并比較不同時(shí)間點(diǎn)各組的血管環(huán)舒張率。

2.5 累積濃度的人參皂苷Rg2對(duì)去內(nèi)皮的離體胸主動(dòng)脈的作用

將血管內(nèi)皮除去后，按照2.4的方法，描記血管環(huán)張力曲線，并比較相同藥物濃度對(duì)內(nèi)皮完整與除去內(nèi)皮的血管的舒縮活動(dòng)的異同。

2.6 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)NO合酶抑制劑(L-NAME)、鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶抑制劑(ODQ)、環(huán)氧化酶抑制劑吲哚美辛(Indomethacin)預(yù)孵育的內(nèi)皮完整的離體胸主動(dòng)脈的影響

取2.4項(xiàng)下內(nèi)皮完整的血管環(huán)，分別將NO合酶抑制劑L-NAME(終濃度為0.1 mmol/L)、鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶抑制劑ODQ(終濃度為0.01 mmol/L)、吲哚美辛(Indomethacin)(終濃度為0.01 mmol/L)加入組織浴槽使之作用于穩(wěn)定后的內(nèi)皮完整的血管環(huán)，孵育20 min后，NE刺激血管收縮，當(dāng)其穩(wěn)定在最大幅度后，加入不同累積濃度的人參皂苷Rg2(G-Rg2終濃度均為10-5、10-4、10-3、10-2mol/L)，描記張力曲線。用K-H營(yíng)養(yǎng)液代替Rg2溶液外，其余操作步驟相同，作為空白對(duì)照組。再按2.4項(xiàng)下方法分別測(cè)定各給藥組血管環(huán)張力并計(jì)算起舒張率。試驗(yàn)重復(fù)10次，記錄并比較不同時(shí)間點(diǎn)各組的血管環(huán)舒張率。

2.7 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)NE所致的去內(nèi)皮的離體胸主動(dòng)脈收縮反應(yīng)的影響

將去內(nèi)皮的血管平衡在2.0 g，平衡15 min，待穩(wěn)定后先加入累積濃度分別為3×10-8mol/L、10-7mol/L、3×10-7mol/L、10-6mol/L的去甲腎上腺素(NE)來(lái)收縮血管，作為空白對(duì)照，然后換液，平衡血管，將血管穩(wěn)定在2.0 g，加入終濃度為10-3mol/L的Rg2，孵育血管20 min，用上述濃度的NE再次來(lái)收縮血管，描記張力曲線。分別測(cè)定各給藥組血管環(huán)張力并計(jì)算起舒張率。試驗(yàn)重復(fù)10次，記錄并比較不同時(shí)間點(diǎn)各組的血管環(huán)舒張率。。

2.8 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)KCl所致的去內(nèi)皮的離體胸主動(dòng)脈收縮反應(yīng)的影響

將去內(nèi)皮的血管平衡在2.0 g，平衡15 min，待穩(wěn)定后先加入累積濃度分別為7.5 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L、60 mmol/L的KCl來(lái)收縮血管，作為空白對(duì)照，然后換液，平衡血管，將血管穩(wěn)定在2.0 g，加入10-3mol/L的Rg2，孵育血管20 min，用上述濃度的KCl再次來(lái)收縮血管，分別測(cè)定各給藥組血管環(huán)張力并計(jì)算起舒張率。試驗(yàn)重復(fù)10次，記錄并比較不同時(shí)間點(diǎn)各組的血管環(huán)舒張率。

2.9 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)CaCl2所致的去內(nèi)皮的離體胸主動(dòng)脈收縮反應(yīng)的影響

將去內(nèi)皮的血管平衡在2.0 g，平衡15 min，待穩(wěn)定后，在高鉀Krebs試液中，加入空白溶液孵育血管20 min，加入CaCl2溶液，使其終濃度分別為10-3mol/L、10-2.5mol/L、10-2mol/L、10-1.5mol/L，作為空白對(duì)照組，然后換液，將血管平衡到2.0 g，平衡15 min，換液3次，加入濃度為10-3mol/L的Rg2，孵育血管20 min，加入上述濃度的CaCl2再次來(lái)收縮血管，分別測(cè)定各給藥組血管環(huán)張力并計(jì)算起舒張率。試驗(yàn)重復(fù)10次，記錄并比較不同時(shí)間點(diǎn)各組的血管環(huán)舒張率。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS23.0軟件處理兩組間均數(shù)比較作t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較作方差分析(ANOVA)采用單因素方差分析，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

4 結(jié)果

4.1 累積濃度的人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)于內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮的離體胸主動(dòng)脈的舒張作用

在內(nèi)皮完整的情況下，人參皂苷Rg2(G-Rg2，終濃度均為10-5、10-4、10-3、10-2mol/L)均能夠降低血管環(huán)張力，與NE刺激下的最大張力比較，差異顯著(P<0.01)。并且具有劑量依賴關(guān)系。但對(duì)于除去內(nèi)皮的血管環(huán)，不同累積濃度的人參皂苷Rg2(G-Rg2)未能影響其張力，與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。表明不同濃度人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)內(nèi)皮完整離體胸主動(dòng)脈環(huán)有明顯舒張作用，對(duì)去內(nèi)皮的離體胸主動(dòng)脈無(wú)明顯作用，說(shuō)明人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)血管的舒張作用呈內(nèi)皮依賴性。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 人參皂苷Rg2對(duì)內(nèi)皮完整與去內(nèi)皮血管環(huán)張力的影響

4.2 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)NO合酶抑制劑( L-NAME)預(yù)孵育的內(nèi)皮完整的離體胸主動(dòng)脈的影響

人參皂苷Rg2(G-Rg2，終濃度均為10-5、10-4、10-3、10-2mol/L)能夠?qū)?nèi)皮完整且采用L-NAME預(yù)孵育的血管環(huán)的舒張作用仍然存在，但與未加L-NAME組比較明顯減弱，差異顯著(P<0.01)，并且人參皂苷Rg2對(duì)去內(nèi)皮血管無(wú)明顯舒張作用。表明人參皂苷Rg2的血管舒張作用可能通過(guò)內(nèi)皮依賴的NO-cGMP途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 人參皂苷Rg2對(duì)L-NAME干預(yù)條件下血管環(huán)舒縮活動(dòng)的影響

4.3 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶抑制劑(ODQ)預(yù)孵育的內(nèi)皮完整的離體胸主動(dòng)脈的影響

人參皂苷Rg2(G-Rg2，終濃度均為10-5、10-4、10-3、10-2mol/L)能夠?qū)?nèi)皮完整且采用ODQ預(yù)孵育的血管環(huán)的舒張作用仍然存在，但與未加ODQ組比較明顯減弱，差異顯著(P<0.01)，并且對(duì)去內(nèi)皮血管無(wú)明顯舒張作用。進(jìn)一步說(shuō)明人參皂苷Rg2的血管舒張作用可能通過(guò)內(nèi)皮依賴的NO途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 人參皂苷Rg2對(duì)ODQ干預(yù)條件下血管環(huán)舒縮活動(dòng)的影響

4.4 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)環(huán)氧化酶抑制劑吲哚美辛(Indomethacin)預(yù)孵育的內(nèi)皮完整的離體胸主動(dòng)脈的影響

人參皂苷Rg2(G-Rg2，終濃度均為10-5、10-4、10-3、10-2mol/L)對(duì)內(nèi)皮完整，并且采用Indom組預(yù)孵育的血管環(huán)的舒張作用與未加Indom組比較無(wú)顯著差異(P>0.05)，并且對(duì)去內(nèi)皮血管無(wú)明顯舒張作用。表明人參皂苷Rg2的血管舒張作用可能不是通過(guò)內(nèi)皮依賴的PGI2途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 人參皂苷Rg2對(duì)Indom干預(yù)條件下血管環(huán)舒縮活動(dòng)的影響

4.5 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)NE所致的離體胸主動(dòng)脈環(huán)收縮反應(yīng)的影響

去除血管內(nèi)皮，用累積濃度分別為3×10-8mol/L、10-7mol/L、3×10-7mol/L、10-6mol/L的去甲腎上腺素(NE)刺激血管收縮作為空白對(duì)照組。用終濃度為10-3mol/L的人參皂苷Rg2(G-Rg2)，孵育去內(nèi)皮的血管20min，不同濃度的去甲腎上腺素(NE)與空白對(duì)照組相比，沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。表明人參皂苷Rg2(G-Rg2)的血管舒張作用可能不是通過(guò)抑制受體依賴性的鈣通道來(lái)實(shí)現(xiàn)的。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 人參皂苷Rg2對(duì)NE所致的大鼠的離體胸主動(dòng)脈收縮的收縮率的影響

4.6 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)KCl所致的離體胸主動(dòng)脈環(huán)收縮反應(yīng)的影響

去除血管內(nèi)皮，用不同濃度的氯化鉀刺激血管收縮作為空白對(duì)照組，用終濃度為10-3mol/L的人參皂苷Rg2(G-Rg2)孵育去內(nèi)皮的血管20min。用終濃度為10-3mol/L的人參皂苷Rg2(G-Rg2)孵育后，不同濃度的KCl與空白對(duì)照組相比，在KCl濃度為15 mmol/L和30 mmol/L上顯著性差異(P<0.01)。表明人參皂苷Rg2(G-Rg2)可能抑制電壓依賴性鈣離子通道，抑制細(xì)胞外鈣進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 人參皂苷Rg2對(duì)KCl所致離體胸主動(dòng)脈的血管環(huán)收縮的收縮率的作用

4.7 人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)CaCl2所致的離體胸主動(dòng)脈環(huán)收縮反應(yīng)的影響

去除血管內(nèi)皮，在無(wú)鈣的K-H試液中，用不同濃度的氯化鈣刺激血管收縮作為空白對(duì)照組。用終濃度為10-3mol/L的人參皂苷Rg2(G-Rg2)孵育去內(nèi)皮的血管20 min，用終濃度為人參皂苷Rg2(G-Rg2)10-3mol/L的Rg2孵育后，不同濃度的CaCl2與空白對(duì)照組相比，人參皂苷Rg2(G-Rg2)在CaCl2濃度為10-3、10-2.5、10-2、10-1.5mol/L上均出現(xiàn)顯著性差異(P<0.01)。進(jìn)一步表明人參皂苷Rg2(G-Rg2)可能抑制電壓依賴性鈣離子通道，抑制細(xì)胞外鈣進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞。結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 人參皂苷Rg2對(duì)CaCl2以所致離體胸主動(dòng)脈的血管環(huán)收縮的收縮率的作用

5 討論

舒張血管的作用與血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞有關(guān)。[6]去甲腎上腺素(NE)能夠選擇性的激活血管平滑肌上的α1受體，開(kāi)放受體操縱性鈣通道(ROC)，細(xì)胞內(nèi)鈣離子增加使血管收縮。[7]NE能夠激活磷脂酶C(PLC)，促使細(xì)胞內(nèi)鈣離子的釋放。[8]本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用NE來(lái)收縮血管，作為血管收縮模型。ACH能夠激活血管內(nèi)皮細(xì)胞上的M受體，促進(jìn)NO的釋放，激活血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)NO-cGMP通路，引起血管是舒張。[9]因此本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用ACH來(lái)驗(yàn)證血管內(nèi)皮的完整性。本研究發(fā)現(xiàn)，在血管內(nèi)皮完整的情況下，人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)去甲腎上腺素收縮的離體血管具有舒張作用。血管內(nèi)皮去除后，人參皂苷Rg2(G-Rg2)無(wú)舒張血管的作用。此研究表明，人參皂苷Rg2對(duì)NE收縮的血管舒張作用是內(nèi)皮依賴性的。

血管內(nèi)皮細(xì)胞能夠調(diào)節(jié)血管張力，是最主要的結(jié)構(gòu)。內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)刺激釋放各種各樣的舒張血管因子來(lái)發(fā)揮舒張血管的作用。在大血管中，NO，PGI2作為主要的舒張血管因子。NO是血管內(nèi)皮細(xì)胞上最強(qiáng)的血管舒張因子。[10]L-NAME作為一氧化氮合酶抑制劑，能抑制一氧化氮合酶的活性，減少NO的生成，抑制血管的舒張作用。NO-cGMP通路的關(guān)鍵酶是鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，抑制鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶就是阻斷了NO-cGMP通路，抑制血管的舒張。ODQ為鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶抑制劑，阻止了cGMP的生成，阻斷了由NO-cGMP通路引起的血管舒張作用。前列環(huán)素(PGI2)也是血管的血管舒張因子，當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到外界的刺激后，環(huán)氧合酶(COX)氧化花生四烯酸生成不穩(wěn)定的前列腺素(PG)G2和PGH2，(PG)G2和PGH2在血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的前列環(huán)素合酶(PGIS)的作用下生成PGI2。[11]PGI2作用于血管平滑肌細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的cAMP的生成增多，導(dǎo)致血管的舒張。[12]環(huán)氧化酶是合成PGI2的關(guān)鍵酶，吲哚美辛是COX抑制劑，通過(guò)抑制環(huán)氧化酶，減少PGI2的生成，影響血管的舒張作用。本實(shí)驗(yàn)觀察到，一氧化氮合酶抑制劑L-NAME、鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶抑制劑ODQ可以減弱人參皂苷Rg2(G-Rg2)對(duì)內(nèi)皮完整的血管的舒張作用，說(shuō)明人參皂苷Rg2(G-Rg2)舒張血管的作用可能與NO-cGMP途徑有關(guān)。COX抑制劑吲哚美辛不能阻斷人參皂苷Rg2(G-Rg2)的血管舒張作用，說(shuō)明人參皂苷Rg2(G-Rg2)的血管舒張血管的作用可能不通過(guò)血管釋放PGI2因子，引起血管的舒張。

血管平滑肌的收縮和舒張作用與細(xì)胞內(nèi)鈣的釋放和細(xì)胞外鈣的內(nèi)流有關(guān)系，特別在心血管系統(tǒng)上，Ca2+是重要的信號(hào)分子與信使，開(kāi)放鈣離子通道，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌舒張收縮因子等作用，[18]血管平滑肌上存在兩種鈣離子通道，即受體操縱性鈣離子通道(ROCC)和電壓依賴性鈣離子通道(VDCC)。[13]受體操縱性鈣通道是通過(guò)激動(dòng)劑與膜上相應(yīng)受體結(jié)合，使受體發(fā)生變化而其通道的開(kāi)放，不同于電壓依賴性鈣離子通道，它不會(huì)因?yàn)槟る娢坏母淖兌l(fā)生改變，其開(kāi)啟是與磷酸肌醇的形成有關(guān)。在細(xì)胞膜上電壓依賴性鈣離子通道主要有T、L、N、P、Q、R六種類型的。而存在于血管上主要是L性鈣離子通道，在高電壓下的時(shí)候，L型鈣離子通道容易被激活，尤其在膜電位達(dá)到通道-40mV時(shí)。開(kāi)放后，細(xì)胞外的就會(huì)大量的內(nèi)流，引起超極化，從而引起血管的收縮，其Ca2+內(nèi)流持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。[14]鈣離子通過(guò)這兩個(gè)鈣離子通道進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，引起血管收縮。NE能夠開(kāi)放受體操縱性鈣通道(ROCC)，導(dǎo)致外鈣內(nèi)流，同時(shí)，NE能夠與受體結(jié)合激活G蛋白，產(chǎn)生PIP3，引起內(nèi)鈣的釋放，使平滑肌收縮。[15]氯化鉀能夠引起血管平滑肌細(xì)胞去極化，開(kāi)放電壓依棘性的鈣通道，促進(jìn)細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流，使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加，[16]而引起血管的收縮，流入細(xì)胞內(nèi)的鈣離子與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的雷諾丁受體結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)鈣的釋放，即鈣誘導(dǎo)的鈣釋放。同時(shí)引起血管的收縮。[17]血管環(huán)在預(yù)加入鈣鰲合劑EGTA的無(wú)鈣的高鉀的K-H液中孵浴后，細(xì)胞處于去極化的狀態(tài)，電壓依賴性的鈣通道處于活化狀態(tài)，再加入Ca2+，此時(shí)所引起的血管環(huán)收縮主要是細(xì)胞外鈣通過(guò)鈣通道流入細(xì)胞內(nèi)所引起。[18]有研究表明，人參皂苷Rg2能夠阻滯鈣離子通道，減少Ca2+內(nèi)流，對(duì)氧糖剝離/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion，OGD/R)皮層神經(jīng)元細(xì)胞具有保護(hù)作用。[19]在腦缺血缺氧，腦缺血再灌注時(shí)，Ca2+濃度在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)會(huì)異常升高，從而造成神經(jīng)細(xì)胞損傷，人參皂苷Rg2可以阻斷Ca2+通道，阻滯Ca2+的內(nèi)流，縮短Ca2+通道開(kāi)放時(shí)間、降低通道開(kāi)放概率，減輕神經(jīng)細(xì)胞的鈣超載，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷具有改善作用。[20]本研究觀察到，人參皂苷Rg2(G-Rg2)不能舒張去內(nèi)皮NE預(yù)收縮的血管環(huán)(p>0.05)，說(shuō)明人參皂苷Rg2(G-Rg2)可能不阻斷受體操縱型鈣離子通道。人參皂苷Rg2(G-Rg2)能夠舒張去內(nèi)皮KCl預(yù)收縮的血管環(huán)(p<0.05)，說(shuō)明人參皂苷Rg2(G-Rg2)可能阻斷電壓依賴性鈣離子通道。為了證明人參皂苷Rg2(G-Rg2)是否作用于電壓依賴性鈣離子通道，血管環(huán)在預(yù)加入鈣鰲合劑EGTA的無(wú)鈣的高鉀的K-H液中孵浴后，電壓依賴性的鈣通道處于活化狀態(tài)，加入CaCl2，引起血管的收縮，觀察發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rg2(G-Rg2)能夠抑制去內(nèi)皮CaCl2預(yù)收縮的血管環(huán)，說(shuō)明人參皂苷Rg2(G-Rg2)可能抑制細(xì)胞外鈣通過(guò)電壓依賴性鈣離子通道進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞。

綜上所述，人參皂苷Rg2(G-Rg2)具有良好的舒張血管的作用并且呈內(nèi)皮依賴性，其機(jī)制可能與內(nèi)皮依賴性環(huán)氧化酶途徑和抑制電壓依賴性鈣離子通道的開(kāi)放所導(dǎo)致的細(xì)胞外鈣的內(nèi)流有關(guān)。