高晟斌，徐 棟，陳 峰，王從童，楊 敏，劉彥黎，姜 波，溫 政，韋雪華，孫蓉蓉

（1.中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032；2.威海市動物疫病預(yù)防與控制中心，山東威海 264200；3.山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟南 250000；4.高密市畜牧業(yè)發(fā)展中心，山東高密 261500；5.榮成市畜牧獸醫(yī)事業(yè)發(fā)展中心，山東榮成 264300；6.威海市文登區(qū)農(nóng)業(yè)機械發(fā)展中心，山東威海 264400）

雞球蟲?。╟hicken coccidiosis）是由一種或多種球蟲感染后引起的雞腸道寄生蟲病[1]。2022 年5月11 日，山東省威海市環(huán)翠區(qū)溫泉鎮(zhèn)某農(nóng)場飼養(yǎng)的肉雞出現(xiàn)大量不明原因死亡。為了解疫病發(fā)生情況，查明病因，以便及時控制疫病，相關(guān)專業(yè)技術(shù)人員赴現(xiàn)場開展了緊急流行病學(xué)調(diào)查。

1 材料和方法

1.1 病例定義

2022 年5 月5 日起，出現(xiàn)突然排出大量血糞、精神沉郁、反應(yīng)遲鈍、閉目呆立、兩翅下垂、步態(tài)揺擺、運動失調(diào)、急性死亡等癥狀之一的，定為疑似病例；疑似病例死后，經(jīng)盲腸內(nèi)容物鹽漂浮法鏡檢可見球形蟲卵者，定為確診病例[1]。

1.2 調(diào)查方法

按照現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查方法[2]，實地觀察農(nóng)場周邊環(huán)境、雞舍布局、飼養(yǎng)模式等情況，詢問場主和工作人員雞場發(fā)病情況。

1.3 實驗室診斷

顯微鏡檢查[3]：將病死雞腸道內(nèi)容物放在玻璃片上，加入一定量的生理鹽水，通過顯微鏡觀察球蟲卵囊或裂殖體；取患病雛雞的新鮮糞便若干，將其放在玻璃容器中，加入一定量的氯化鈉溶液，用玻璃棒充分?jǐn)噭蚝筮^濾，靜置15 min 后，取表面液體放在玻璃片上，顯微鏡下觀察球蟲卵囊。

核酸檢測：采集雞咽喉-泄殖腔拭子、組織樣品，采用北京森康生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)的通用型禽流感病毒實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒和新城疫病毒熒光RT-PCR 檢測試劑盒，分別進行兩種病毒的核酸檢測。

2 結(jié)果

2.1 基本情況

該農(nóng)場建于2021年，為養(yǎng)殖、種植復(fù)合型農(nóng)場，地處山東省威海市環(huán)翠區(qū)溫泉鎮(zhèn)，西部臨河，東部臨街，占地1 500 m2（圖1）。該場共有5 個禽舍，分別飼養(yǎng)60日齡蛋雞200只、35日齡瑯琊雞800只、38 日齡肉雞500 只、30 日齡山雞518 只，以及鴿子50 只、孔雀3 只。山雞、肉雞、鴿子、孔雀為散養(yǎng)，且飼養(yǎng)在同一圍欄中。主要飼喂玉米面、豆粕、菜葉。豆粕購于當(dāng)?shù)仫暳箱N售商，玉米面、菜葉來自自家農(nóng)場。

圖1 雞場地理位置

2.2 診斷

2.2.1 臨床癥狀 病雞出現(xiàn)精神沉郁、站立不穩(wěn)、采食飲水大幅下降、糞便發(fā)紅、拉稀等癥狀（圖2），可初步判斷為疑似球蟲病病例。

圖2 病雞和血便

2.2.2 剖檢癥狀 臟器和肌肉顏色暗淡，有貧血癥狀；盲腸腫大、充血，腸壁呈暗紅色，腸壁增厚；腸黏膜脫落，腸內(nèi)有壞死組織；小腸腸管增厚，內(nèi)有氣體和積液，腸道表面有出血點和淡白色壞死斑點；腸道內(nèi)容物中有血液、血凝塊和褐色黏稠物。具體見圖3。

圖3 剖檢癥狀

2.2.3 實驗室診斷 涂片檢查發(fā)現(xiàn)，病死雞腸道內(nèi)容物有大量球蟲卵囊，患病雛雞新鮮糞便內(nèi)有大量圓形球蟲卵囊。通用型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測和新城疫病毒熒光RT-PCR 檢測結(jié)果均為陰性（圖4）。

圖4 熒光RT-PCR 檢測結(jié)果

2.3 發(fā)病情況

2.3.1 時間分布 2022 年5 月5 日，該場分別從山東省青島市、菏澤市調(diào)運2 批雞，其中從青島市調(diào)運了800 只30 日齡瑯琊雞，飼養(yǎng)在2、3 號禽舍；從菏澤市調(diào)運了518 只35 日齡山雞，飼養(yǎng)在5 號圍欄。5 月6 日死亡3 只山雞，5 月7 日死亡3 只山雞，5 月9 日死亡2 只山雞，5 月10 日死亡1 只山雞、8 只瑯琊雞，5 月11 日死亡2 只山雞、2 只瑯琊雞，5 月12 日死亡5 只瑯琊雞，5 月13 日死亡3 只瑯琊雞。具體發(fā)病死亡數(shù)量及處理時間軸見圖5。

圖5 發(fā)病死亡數(shù)量及處理時間軸

2.3.2 空間及群間分布 1 號舍飼養(yǎng)蛋雞，2、3號舍飼養(yǎng)調(diào)入的瑯琊雞，4 號圍欄飼養(yǎng)肉雞，5 號圍欄飼養(yǎng)調(diào)入的山雞。5 月6 日，首發(fā)病例出現(xiàn)在5 號圍欄；5 月10 日，3 號雞舍出現(xiàn)病例；5 月11日，2 號雞舍出現(xiàn)病例（圖6）。病例分布在剛調(diào)入的山雞和瑯琊雞群，經(jīng)卡方檢驗，兩群死亡率無顯著性差異（P=0.879 ＞0.05，表1）。

表1 不同飼養(yǎng)禽類發(fā)病死亡情況

圖6 空間分布

2.4 病因假設(shè)及驗證

現(xiàn)場調(diào)查發(fā)現(xiàn)，本次發(fā)病的3 個雞群均為5月5 日調(diào)入，其他雞群未發(fā)病死亡；臨床檢查發(fā)現(xiàn)，發(fā)病雞臨床癥狀符合雞球蟲病癥狀；實驗室檢測發(fā)現(xiàn)，發(fā)病雞群腸道內(nèi)容物及糞便中有球蟲卵，且排除了禽流感和新城疫等病原的感染。綜上推測，該農(nóng)場出現(xiàn)的雞群死亡由球蟲感染引起。

經(jīng)調(diào)查，山雞群調(diào)運前，未申報檢疫。通過電話詢問，啟運山雞的場點為粗放型養(yǎng)殖場，生物安全管理措施落后，因此調(diào)入的部分山雞調(diào)運前可能已感染球蟲，進場后也未進行驅(qū)蟲，到達(dá)環(huán)境濕熱的威海市后，由于長途調(diào)運產(chǎn)生應(yīng)激[4]，以及飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件較差（地面為渣土、碎石結(jié)構(gòu)，塵土多，飲水器周邊已形成泥水，糞便清理不及時），導(dǎo)致疫病暴發(fā)。5 號舍雞群發(fā)病后，由于所有禽舍共用一名飼養(yǎng)員管理，共用飼料運輸車輛等生產(chǎn)工具，飼養(yǎng)員在不同欄舍間來回串行，可能將病原傳播到其他欄舍，因2 號、3 號舍飼養(yǎng)的是剛調(diào)入的瑯琊雞，受長途運輸、環(huán)境改變等應(yīng)激因素影響，機體抵抗力下降，導(dǎo)致發(fā)病，而其他欄舍未有應(yīng)激暫未受到影響。

5 月11 日確診的當(dāng)天，全群飼喂敵菌凈，清掃雞舍，并對雞舍進行全方位消毒。采取以上措施后，疫情未得到控制；5 月13 日，更換用藥，全群使用復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉和維生素C，5 月14 日后未再出現(xiàn)新病例，由此也驗證了病因假設(shè)。

3 討論

感染雞的球蟲種類繁多，寄生部位各異。堆型艾美耳球蟲、哈氏艾美耳球蟲、變位艾美耳球蟲等寄生于小腸前段；毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲寄生于小腸中段；布氏艾美耳球蟲寄生于小腸后端、直腸和盲腸近端；柔嫩艾美耳球蟲寄生于盲腸[5]。受實驗室檢測條件限制，本次調(diào)查沒有使用球蟲的特異性引物進行核酸擴增，沒有對球蟲的生物信息[6]進行進化分析。根據(jù)解剖結(jié)果，主要病變發(fā)生在小腸、盲腸部位，且盲腸病變較為嚴(yán)重，由此推測，引起該場發(fā)病的球蟲可能為以柔嫩艾美耳球蟲為主的多種球蟲混合感染。

本次調(diào)查的農(nóng)場為2021 年新建農(nóng)場，發(fā)病禽舍為首次啟用的新舍，發(fā)病動物為該場引進飼養(yǎng)的首批動物，自然疫源感染的可能性較低。受地域限制，本次調(diào)查沒有對啟運場點進行實驗室檢測，但啟運山雞的場點管理粗放，生物安全管理措施松散，球蟲感染的可能性較大。此次球蟲病暴發(fā)提示：產(chǎn)地檢疫是限制球蟲病場群間傳播的重要防控手段；獸醫(yī)主管部門應(yīng)當(dāng)進一步加大產(chǎn)地檢疫重要性的宣傳培訓(xùn)力度，提高養(yǎng)殖從業(yè)人員防疫意識；養(yǎng)殖場戶應(yīng)在引種調(diào)入前加強檢疫，提高飼養(yǎng)管理水平，保持養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生清潔，做好定期消毒滅源。

4 結(jié)論

根據(jù)現(xiàn)場調(diào)查及實驗室檢測結(jié)果，確認(rèn)該場雞群疫病暴發(fā)由雞群調(diào)運導(dǎo)致球蟲傳入引起，因未采取驅(qū)蟲措施，未進行隔離飼養(yǎng)，未做好衛(wèi)生安全管理，導(dǎo)致疫病在場內(nèi)擴散。本次暴發(fā)提示，應(yīng)加強調(diào)入禽群檢疫、隔離，場內(nèi)定期驅(qū)蟲，做好衛(wèi)生安全管理。