樊文科,朱克明,李文生
復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院解剖與組織胚胎學(xué)系,臨床解剖中心,上海 200032
隨著臨床醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)教育的發(fā)展,臨床應(yīng)用解剖學(xué)應(yīng)運(yùn)而生,并顯示出強(qiáng)大的生命力,它主要面向臨床研究生和臨床醫(yī)學(xué)繼續(xù)教育,在扎實(shí)掌握解剖結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,運(yùn)用所學(xué)解剖知識來分析和解決臨床問題,提高和培養(yǎng)醫(yī)學(xué)生的創(chuàng)新精神,同時也是適應(yīng)當(dāng)代“轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)”研究熱潮的一種具體實(shí)踐[1]。在“國家醫(yī)療,健康中國”衛(wèi)生戰(zhàn)略背景下,我校解剖與組織胚胎學(xué)系以臨床解剖中心為平臺,以附屬中山醫(yī)院、華山醫(yī)院為依托,常年舉辦各類臨床解剖高級學(xué)習(xí)班。根據(jù)不同需求,對解剖標(biāo)本的質(zhì)量要求各有差異,傳統(tǒng)的甲醛灌注浸泡尸體標(biāo)本固定技術(shù)簡單可靠,仍在實(shí)驗(yàn)室中廣泛應(yīng)用,但標(biāo)本質(zhì)地及形態(tài)由于蛋白質(zhì)凝固,脫水而發(fā)生明顯皺縮[2]。而采用冷藏技術(shù)保存的標(biāo)本由于反復(fù)冷凍及復(fù)溫導(dǎo)致標(biāo)本變形明顯,且標(biāo)本在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)生緩慢變質(zhì)[3]?;谂R床神經(jīng)外科培訓(xùn)對腦組織固定有較高的要求,我們對新鮮腦組織標(biāo)本保存處理做了嘗試性改進(jìn),取得較為滿意的效果,現(xiàn)報(bào)道如下:
1.1.1 標(biāo)本 選用新鮮頭部無外傷尸體標(biāo)本16例,標(biāo)本由上海紅十字會復(fù)旦大學(xué)遺體捐獻(xiàn)接收站提供。
1.1.2 器材 點(diǎn)動式壓力泵(河南傳碩信息技術(shù)有限公司),手工鋼鋸,手術(shù)刀,止血鉗,解剖剪,縫合線,0.5 cm 一頭尖玻璃管,0.4 cm 橡膠管。
1.1.3 試劑及其溶液配比 按每個標(biāo)本2%福爾馬林1000 mL,30%甘油50 mL 作為固定液A 液。在混合固定液A 液基礎(chǔ)上加入2% 硝酸鉀溶液50 mL,麝香草酚10 g,30% 乙醇2500 mL 作為固定液B 液。
1.2.1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 用自來水將材料沖洗干凈,將大體標(biāo)本面朝上水平放置在解剖臺上,于第5 頸椎(C5)處用U 形枕木墊高。
1.2.2 取材和灌注 在C5上緣水平切取尸體頭頸部標(biāo)本。橫行切開皮膚,切口斜向下前方,向兩側(cè)水平延伸達(dá)脊柱,離斷頸部肌群,橫斷椎骨,避開甲狀腺下極以避免灌注時自甲狀腺斷端流失灌注液,注意保持切口平整,處理血管時向外牽拉,盡可能保留較長的血管。表淺軟組織離斷后,再用鋼鋸鋸至頭頸部與軀干完全分離[4]。自來水沖洗干凈斷面,將頭部標(biāo)本倒置,斷面朝上,修潔斷面,尋找頸總動脈和頸內(nèi)靜脈,將連接壓力泵端的0.4 cm 橡膠管套進(jìn)玻璃管一端,結(jié)扎。另一端插入頸總動脈,結(jié)扎。先用0.9%生理鹽水緩慢沖洗動靜脈,確保動靜脈暢通。用空氣增壓法排凈血管殘留液體。先以制備好的2%福爾馬林A 液用點(diǎn)動式壓力泵每個標(biāo)本連續(xù)點(diǎn)動灌注1000 mL,后用保鮮袋結(jié)扎放置-14 ℃冰箱保存。15 d 后取出,流水解凍0.5 d 后重復(fù)上述方法灌注固定液B 液。灌注結(jié)束,將標(biāo)本置于剩余固定液B 液中浸泡2 d 后即可取出使用,并達(dá)到理想狀態(tài),如圖1A。未用完標(biāo)本繼續(xù)于保存液中保存,無須反復(fù)冰凍、解凍。經(jīng)過15 d 解剖操作,觀察標(biāo)本形態(tài),結(jié)構(gòu),腦實(shí)質(zhì)等無明顯改變,使用良好,如圖1B。
圖1 改良標(biāo)本固定方法處理后的腦標(biāo)本A:內(nèi)鏡下斜坡區(qū)解剖 1.垂體 2.腦橋 3.展神經(jīng) 4.基底動脈 5.小腦下前動脈 6.椎動脈 B:內(nèi)鏡下鞍底解剖1.直回2.視神經(jīng)3.垂體Fig.1 Brain specimen treated by modified fixation methodA: Endoscopic anatomy of clivus region; 1, hypophysis; 2, pons; 3, abducent nerve; 4, basilar artery; 5,Anterior inferior cerebellar artery; 6, vertebral artery B: Endoscopic anatomy of sellar bottom; 1, gyrus rectus;2, optic nerve; 3,hypophysis
通過改良標(biāo)本灌注固定方法對新鮮尸頭標(biāo)本進(jìn)行處理,標(biāo)本對眼、呼吸道基本無刺激,腦實(shí)質(zhì)基本無自溶,腦部動靜脈無明顯變硬,顏色紅潤,容易區(qū)分,腦各部形態(tài)接近新鮮標(biāo)本,保持一定的彈性和韌性(表1)?;緷M足臨床神經(jīng)外科學(xué)習(xí)培訓(xùn)使用,取得學(xué)習(xí)培訓(xùn)單位的良好評價(jià)。
表1 改良標(biāo)本固定液和傳統(tǒng)用福爾馬林對標(biāo)本固定效果的比較Tab.1 Comparison of specimen results between modified fixation liquid and formalin fixation
應(yīng)選用新鮮、病歷資料顯示無外傷及重大腦部疾病的標(biāo)本。新鮮程度決定腦實(shí)質(zhì)的自溶狀態(tài),而外傷及腦部重大疾病決定灌注液能否充分準(zhǔn)確到達(dá)灌注目標(biāo)部位,最終關(guān)系灌注保存和使用效果。
動靜脈內(nèi)可能有血凝塊影響正常灌注,為此灌注前需要用生理鹽水進(jìn)行沖洗,確保動靜脈暢通。為確保固定液到達(dá)顱腔各血管,而又不致血管爆裂,采用點(diǎn)動法灌注。
目前常用防腐固定劑有單一型和混合型。改良固定保存液中加入2%福爾馬林能夠起到對標(biāo)本加強(qiáng)防腐固定作用,與傳統(tǒng)5%~10%固定保存液相比能夠最大程度減小標(biāo)本組織的收縮,同時減少刺激性有害氣體對人體的傷害。在混合防腐固定劑中,甘油是一種良好的選用藥物。利用它的防腐性、吸濕性和對某些無機(jī)鹽類藥物的特殊溶解力,所配成的溶液比較穩(wěn)定[5]。硝酸鉀常作為發(fā)色劑,護(hù)色劑,抗微生物防腐劑使用。麝香草酚對細(xì)菌、酵母和霉菌均有較強(qiáng)的抑制作用,是一種廣譜抑菌劑[6],不僅增強(qiáng)防腐抗霉力和對標(biāo)本護(hù)色作用,而且配方中加入一定比例的酒精,麝香草酚可以減少甲醛的強(qiáng)烈刺激氣味。
以往用于神經(jīng)外科培訓(xùn)的標(biāo)本或經(jīng)過多次冷藏解凍,或單純經(jīng)甲醛灌注。實(shí)際應(yīng)用過程中發(fā)現(xiàn),均出現(xiàn)不同程度的組織脫水、自溶;傳統(tǒng)甲醛灌注,影響到對腦實(shí)質(zhì)、腦部動靜脈、腦部小結(jié)構(gòu)的觀察、操作,很難達(dá)到接近臨床的體驗(yàn)。此法采用冰凍固定與濕法保存相結(jié)合,使上述問題得到一定解決,具明顯優(yōu)勢。