施 鵬，吳 鑫，童國(guó)強(qiáng)，易 翔，管 瑩，左可成，陳 才，羅高建，倪書干，樂細(xì)選，朱美玲

（勁牌有限公司，湖北大冶 435100）

近年來，國(guó)內(nèi)白酒行業(yè)競(jìng)爭(zhēng)日趨激烈，消費(fèi)市場(chǎng)不斷細(xì)分化與多元化，差異化和定制化的產(chǎn)品設(shè)計(jì)逐漸成為新品研發(fā)的主流趨勢(shì)。一方面隨著社會(huì)的發(fā)展，人們的消費(fèi)觀念發(fā)生了很大的改變，消費(fèi)進(jìn)入了“生感階段”，即在滿足物質(zhì)生活需求的同時(shí)，追求精神生活的需要。消費(fèi)者已不再是“飽腹”的需求，而是“科學(xué)地吃”“吃出健康”的高質(zhì)量的追求，健康飲酒、理性飲酒的消費(fèi)理念深入人心，健康成為人們最根本的需要。另一方面，在現(xiàn)代高效快節(jié)奏生活方式下越來越多的人出現(xiàn)慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndrome,CFS)，慢性疲勞綜合征是一組以嚴(yán)重疲勞為主要癥狀的癥候群，其原因不明并持續(xù)存在或反復(fù)發(fā)作，且患者經(jīng)充分休息后仍得不到緩解，持續(xù)時(shí)間在6 個(gè)月以上，部分患者還伴有低熱、咽喉痛、頭痛、肌肉或關(guān)節(jié)痛、淋巴結(jié)腫痛、注意力不集中、記憶力減退、失眠和抑郁等癥狀，進(jìn)而使得患者日?；顒?dòng)能力下降，嚴(yán)重者甚至常年臥床，無法正常工作、生活，給患者的家庭和社會(huì)帶來了巨大的心理壓力和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，我國(guó)慢性疲勞綜合征的發(fā)病率正逐年上升，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)患病人數(shù)中，女性約為男性的4倍。慢性疲勞綜合征的發(fā)病具有職業(yè)及年齡特點(diǎn)，白領(lǐng)階層、高校教師、醫(yī)護(hù)人員等為高發(fā)人群，慢性疲勞綜合征已嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。因此，抗疲勞功能成為眾多消費(fèi)者的強(qiáng)烈訴求。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，人體的健康依賴于陰陽平衡，臟腑協(xié)調(diào)，氣血充盈。疲勞與“虛勞”“虛證”有關(guān)。中醫(yī)針對(duì)“虛勞”采取的措施主要為增強(qiáng)人體的正氣，即《素問·刺法論篇》所言“正氣內(nèi)存，邪不可干”。人的正氣主要由精氣等物質(zhì)構(gòu)成，因此補(bǔ)氣血類藥物對(duì)于增強(qiáng)人體正氣，緩解疲勞有顯著作用。人參大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)脾益肺；黃芪補(bǔ)氣固表；淫羊藿補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨；枸杞子滋補(bǔ)肝腎，益精明目。通過查閱現(xiàn)代藥理學(xué)的相關(guān)報(bào)道，發(fā)現(xiàn)人參、黃芪、淫羊藿、枸杞子在緩解體力疲勞方面有較為顯著的作用。但以酒為載體使用人參、黃芪、淫羊藿、枸杞子來緩解體力疲勞的研究未見文獻(xiàn)報(bào)道。因此本研究針對(duì)人參、黃芪、淫羊藿、枸杞子復(fù)方酒劑進(jìn)行了小鼠實(shí)驗(yàn)，觀察小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、血清尿素氮、血乳酸以及肝糖原，以期研究開發(fā)的產(chǎn)品是否具備緩解體力疲勞的功效。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)BALBC/C 雄性成年小鼠300 只，體重18～22 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物室環(huán)境條件：溫度為20 ℃±2 ℃，相對(duì)濕度55%～75%。

1.1.2 樣品制備

緩解體力疲勞功能白酒、38%vol 酒基：勁牌有限公司。成人推薦每天攝入100 mL。按成人60 kg體重計(jì)，推薦攝入量可折算為每日1.67 mL/kg·bw。試驗(yàn)時(shí)取10 倍濃縮液（緩解體力疲勞功能白酒經(jīng)60 ℃減壓濃縮，以蒸餾水及38%vol 酒基調(diào)配至乙醇濃度15%vol），冷藏備用。

1.1.3 儀器設(shè)備

BSA423-CW電子天平（德國(guó)Sartorious），DB080 小鼠恒溫游泳池（北京智鼠多寶生物科技），SpectarMax M2 全能酶標(biāo)儀（美國(guó)Molecular Devices)，BS-200 全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)Mindray），PD866E-345K 計(jì)時(shí)器（湖南興科達(dá)電氣有限公司），HH 系列-8 水浴鍋（青島聚創(chuàng)環(huán)保集團(tuán)有限公司），血清尿素氮、乳酸及肝糖原測(cè)定試劑盒（北京中生生物工程高技術(shù)公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 分組與給藥

雄性小鼠300 只，適應(yīng)3 d 后隨機(jī)分為4 大組，分別進(jìn)行負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，血漿尿素氮測(cè)定，肝糖原測(cè)定和血乳酸測(cè)定，每大組75 只。將每組75 只雄性小鼠隨機(jī)分正常對(duì)照組、酒基對(duì)照組和3 個(gè)劑量組，每組15只。

對(duì)照組小鼠給予蒸餾水；酒基對(duì)照組給予15%vol 酒基（取38%vol 酒基39.5 mL，蒸餾水定容至100 mL）；各劑量組受試物配制如下：低劑量組（16.7 mL/kg·bw）、中劑量組（33.4 mL/kg·bw）、高劑量組（50.1 mL/kg·bw）分別取10 倍濃縮液8.35 mL加38 %vol 酒基36.2 mL、10 倍濃縮液16.7 mL 加38%vol酒基32.9 mL、10倍濃縮液25.1mL加38%vol酒基29.6 mL，再逐一以蒸餾水定容至100 mL。

對(duì)照物和受試物以經(jīng)口灌胃的方式給予，灌胃量均為0.2 mL/10 g·bw，連續(xù)灌胃30 d。試驗(yàn)期間，各組小鼠自由進(jìn)食和飲水，并于試驗(yàn)開始、試驗(yàn)中期及試驗(yàn)?zāi)┢诜謩e稱取3次體重。

1.2.2 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

末次給小鼠灌胃樣品30 min 后，將小鼠尾根部固定5%體重的鉛絲，小鼠放置在游泳箱中進(jìn)行游泳試驗(yàn)測(cè)定，游泳池水深約35 cm，水溫控制在（25±1）℃。記錄小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間，作為小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。

1.2.3 血清尿素氮測(cè)定

末次給小鼠灌胃樣品30 min 后，將小鼠放置在游泳箱中進(jìn)行游泳，水溫控制在（30±1）℃，游泳時(shí)間為20 min，游泳后將小鼠取出休息20 min 后立即取眼球采血。分離血清按試劑盒說明書用半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定BUN。

1.2.4 肝糖原測(cè)定

末次給小鼠灌胃樣品30 min 后，立即處死，取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干，準(zhǔn)確稱取肝臟75 mg，按試劑盒說明書采用蒽酮比色法測(cè)定其肝糖原含量。

1.2.5 血乳酸測(cè)定

先于末次灌胃30 min 后采眼眶血。采血后的小鼠于30 ℃±1 ℃水箱中游泳10 min，立即取出擦干采眼眶血，游泳后的小鼠置于安靜狀態(tài)下休息20 min 后，再次采眼眶血。按試劑盒說明書分別測(cè)定小鼠游泳前、游泳后和休息后的血乳酸水平。血乳酸曲線下面積用下式表示：

血乳酸曲線下面積＝1/2×（游泳前血乳酸值＋游泳后血乳酸值）×10＋1/2×（游泳后血乳酸值＋游泳后休息后血乳酸值）×20

1.2.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

方差分析及Dunnett’s T3檢驗(yàn)（SPSS軟件包）。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠負(fù)重游泳時(shí)間測(cè)定結(jié)果

小鼠體重及負(fù)重游泳時(shí)間測(cè)定結(jié)果如表1所示。

表1 負(fù)重游泳試驗(yàn)小鼠各期體重及受試物對(duì)負(fù)重游泳時(shí)間的影響(X±SD)

試驗(yàn)?zāi)┢谛∈篌w重相對(duì)于初始體重均有所增加，但同期體重組間沒有顯著性差異，表明受試物對(duì)小鼠體重沒有明顯影響。

酒基對(duì)照組同對(duì)照組相比，無顯著性差異，表明酒基對(duì)小鼠負(fù)重游泳無影響。中劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間與對(duì)照組、酒基對(duì)照組相比顯著增加，差異均有顯著性（P＜0.05)，表明受試物有顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的作用。

2.2 血漿尿素氮水平測(cè)定結(jié)果

血漿尿素氮水平測(cè)定結(jié)果如表2 所示。

表2 血清尿素氮試驗(yàn)期間小鼠體重變化及恒溫游泳20min后血清尿素氮水平(X±SD)

試驗(yàn)?zāi)┢谛∈篌w重相對(duì)于初始體重均有所增加，三個(gè)劑量組中、晚期體重較空白對(duì)照下降，但與酒基對(duì)照組間沒有顯著差異，表明受試物對(duì)小鼠體重沒有明顯影響，該結(jié)果與2.1結(jié)論一致。

小鼠游泳后血清尿素氮測(cè)定結(jié)果表明，酒基對(duì)照組和3 個(gè)劑量組小鼠尿素氮水平低于對(duì)照組，中劑量組小鼠尿素氮水平低于酒基對(duì)照組，且差異顯著（P＜0.05)。該結(jié)果表明受試物有降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血清BUN水平的作用。

2.3 肝糖原測(cè)定結(jié)果

肝糖原測(cè)定結(jié)果如表3所示。

由表3 可見，試驗(yàn)期間各組小鼠體重均有所增加，但同期體重組間沒有顯著性差異，表明受試物對(duì)小鼠體重沒有明顯影響，該結(jié)果與前面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

表3 受試物對(duì)小鼠體重及肝糖原含量的影響(X±s)

酒基對(duì)照組同對(duì)照組相比，無顯著性差異，表明酒基對(duì)小鼠肝糖原水平無影響。各劑量組與對(duì)照組相比，差異均無顯著性差異，中劑量與酒基對(duì)照組相比，肝糖原含量增加，差異有顯著性（P＜0.05）。該結(jié)果表明，抗疲勞健康白酒具有升高小鼠肝糖原含量的作用。

2.4 血乳酸曲線下面積值測(cè)定結(jié)果

試驗(yàn)期間，小鼠3 次（初始、中期和末期）體重如表4所示。

表4 血乳酸試驗(yàn)期間小鼠體重的變化(X±SD)

試驗(yàn)?zāi)┢谛∈篌w重相對(duì)于初始體重均有所增加，但同期體重組間沒有顯著性差異，表明受試物對(duì)小鼠體重沒有明顯影響，該結(jié)果與前面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

小鼠在游泳前、游泳后及休息20 min 后血乳酸水平及其差值如表5所示。

表5 受試物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸水平的影響（X±SD，mmol/L）

酒基對(duì)照組同對(duì)照組相比，無顯著性差異，表明酒基對(duì)小鼠血乳酸含量無影響。各組小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸水平明顯升高，經(jīng)20 min的休息后迅速下降。各劑量組小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸曲線下面積和對(duì)照組無顯著性差異，高劑量組小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸曲線下面積較酒基對(duì)照組降低，且差異顯著（P＜0.05）。說明受試物有降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸水平的作用。

3 討論與結(jié)論

當(dāng)疲勞發(fā)生時(shí)不僅機(jī)體的工作運(yùn)動(dòng)能力下降，身體也呈現(xiàn)亞健康狀態(tài)或疾病前兆。長(zhǎng)期處于疲勞狀態(tài)身體會(huì)過早衰老，罹患器質(zhì)性疾病的風(fēng)險(xiǎn)也將大幅增高。力竭游泳實(shí)驗(yàn)、血漿尿素氮、肝糖原及血乳酸是檢測(cè)機(jī)體疲勞的重要指標(biāo)。運(yùn)動(dòng)能力的下降是體力疲勞最為直觀的外在表現(xiàn)，負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)可以反映出運(yùn)動(dòng)能力的下降程度，同時(shí)也是緩解體力疲勞能力的重要指標(biāo)；血漿尿素氮隨體內(nèi)氨基酸分解代謝而增高，當(dāng)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷增加，氨基酸分解加劇，血漿尿素氮水平也呈正向增高，緩解體力疲勞樣品抑制或清除血漿尿素氮的能力同其抗疲勞功效呈正相關(guān)；糖原是機(jī)體重要能量來源，肝糖原是貯存糖原的主要方式之一，糖原分解為葡萄糖以滿足運(yùn)動(dòng)所需，糖原儲(chǔ)存量同運(yùn)動(dòng)耐力有密切的關(guān)系，當(dāng)糖原消耗過多會(huì)引起機(jī)體疲勞；乳酸是在劇烈運(yùn)動(dòng)的情況下，肌肉因缺氧發(fā)生糖酵解反應(yīng)而產(chǎn)生的，乳酸大量積累導(dǎo)致肌肉酸脹，引起疲勞，因此血乳酸清除能力越強(qiáng)，抗疲勞作用越顯著。

在實(shí)驗(yàn)中，緩解體力疲勞白酒中劑量組可以顯著提高負(fù)重游泳時(shí)間，可顯著降低小鼠血漿尿素氮水平，顯著增加肝糖原含量；高劑量組可顯著降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸曲線下面積，說明緩解體力疲勞功能白酒具有緩解體力疲勞的功效。經(jīng)常飲用緩解體力疲勞功能白酒能減少罹患慢性疲勞綜合征的風(fēng)險(xiǎn)，有利于提高消費(fèi)者的身體健康。