王曉明

《神農(nóng)本草經(jīng)》記載道：鹿角乃為藥材之上品。《中國藥典》中指出藥用鹿角為梅花鹿、動物馬鹿，具有活血、強筋壯骨及溫腎補虛的作用[1]?，F(xiàn)實當中，存在著多種帶角的鹿，不同樣式的角枝實為鹿類動物最為典型的結(jié)構(gòu)特征。我國與鹿之間淵源深厚，實為鹿類進化的中心，有著豐富的鹿資源，不僅能有馬鹿、梅花鹿等藥典當中記載的鹿，而且還有其他數(shù)十種鹿科動物，其數(shù)量在全球鹿類總數(shù)中的比重達45.8%。盡管藥典當中明確規(guī)定可當作中藥來用的鹿角僅為馬鹿、梅花鹿的角及其角盤，但其他鹿類的角同樣有著不錯的藥用價值，比如毛冠鹿、赤麂、林麂及馬鹿等。骨質(zhì)疏松實為一種臨床多發(fā)病，典型特征為骨組織顯微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)進行性改變、骨量減少等，患此病后，患者非常容易引發(fā)骨折，尤其是全身代謝性骨癥，因而對人們?nèi)粘Ｉ?、工作均造成了嚴重影響。骨質(zhì)疏松有著十分復(fù)雜的發(fā)病機制，且許多學(xué)者[2-3]指出，其發(fā)病根源在于骨膠原合成速度較正常低。因此，此病可看作一種膠原病。本文圍繞中醫(yī)“腎藏精，主骨”等理論，探討鹿角對骨質(zhì)疏松所產(chǎn)生的影響，現(xiàn)探討如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2021年1月—2022年1月期間，選取7種鹿角，即赤麂、毛冠鹿、小麂、林麂、黑麂、馬鹿及梅花鹿角等,并圍繞梅花鹿鹿角，測定其抗骨質(zhì)疏松的活性。

1.2 方法

1.2.1 鹿角的性狀鑒定

以手摸、眼觀等方式來分析鹿角的性狀特點，以鹿角的形態(tài)特征為依據(jù)（如角干形態(tài)、分叉等），進行鹿角形態(tài)公式的編制，用B代表角柄，C代表角干部分，A表示角的前叉，P代表角的后叉，S代表坐地叉，α代表前叉與后叉間的角度，X為分一叉，而“X……”代表分叉數(shù)據(jù)＞3個，“⌒”此角呈虹狀，據(jù)此來闡述鹿角的物理特征。

1.2.2 梅花鹿鹿角盤抗骨質(zhì)疏松的活性測定

（1）實驗動物。小鼠80只，（22.3±1.2）g，雌雄均為40只。（2）實驗藥品。葡萄糖酸鈣片（海南制藥廠有限公司，國藥準字H46020253，規(guī)格：0.5 g×100片）、注射用環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準字H32020857，規(guī)格：0.2 g×10瓶）、羥脯氨酸標準品（浙江紫荊生物技術(shù)有限公司杭州分公司，國械注準20163400047，規(guī)格：20人份）等。（3）儀器。山東高密彩虹分析儀器有限公司產(chǎn)的紫外可見分光光度計（UV-754型）；上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn)的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（RE-52AA型）；金羊天平儀器廠生產(chǎn)的電子計數(shù)天平。（4）實驗方法。①提取有效部位。把梅花鹿的鹿角研磨成粉（300 g），采用乙醇（70%）浸泡，時間為24 h，過濾且合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對提取液進行減壓濃縮，且將乙醇回收，用凍干機把濃縮之后的提取液進行凍干處理，最終便能獲得乙醇提取物（70%）；提取乙醇后，把粉干燥處理，然后用蒸餾水（80℃）進行提取（24 h），過濾、合并水提液，且進行減壓濃縮，把濃縮的水體液進行凍干處理，最終便能獲得鹿角盤水提物。②制備供試藥品。乙醇提取物組：取凍干之后的鹿角盤70%乙醇提取物0.6 g、1.8 g，置入到容量瓶中（100 mL），用生理鹽水稀釋到刻度，配成溶液6 mg/mL、18 mg/mL。環(huán)磷酰胺：取注射用環(huán)磷酰胺（0.4 g），融入生理鹽水中（200 mL），得到溶液2 mg/mL備用。③實驗分組。隨機將小鼠分成空白組、水提物低劑量組（500 mg/kg）、環(huán)磷酰胺模型組（20 mg/kg）、水提物高劑量組（1 000 mg/kg）、乙醇提取物高劑量組（180 mg/kg）、乙醇提取物低劑量組（60 mg/kg）。④構(gòu)建動物模型及給藥。建立環(huán)磷酰胺骨質(zhì)疏松模型，采用上午造模而下午用藥的范式，除空白組外，其他組均灌胃使用造模藥物：環(huán)磷酰胺20 mg/（kg·d），連續(xù)用藥14 d。

1.3 觀察指標

分析鹿角的性狀，對比各組免疫器官指數(shù)[免疫器官質(zhì)量（mg）/小鼠體重（g）=免疫器官指數(shù)]、古骨計量學(xué)指標（如股骨長度、股骨橫徑等）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗；計量資料以（±s）表示，行t檢驗，P＜0.05則差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鹿角的性狀鑒定結(jié)果

（1）毛冠鹿。又被稱之為青麂。雄性具非常短且不分叉的樁角，被毛遮蓋而不明顯，公式為♂C。（2）赤麂。雄性赤麂長，并且向后還有彎曲的雙叉角，其角向后且朝內(nèi)彎曲，最突出特點即為角柄多長于角干，公式為♂Cx。（3）小麂。雄性小麂的角較為簡單，公式為：♂Cx，C＞B。（4）黑麂。相似于赤麂，其角柄較角干長，并且很小，公式：♂C，C＜B。（5）林麂。其角比較小，角尖且直，角柄長于角干，公式為：♂Cx，C＜B。（6）梅花鹿。其角一般為4叉角，眉叉于角干近基部與角干之間呈銳角，且向前伸出，二叉處在角干的中部，公式為♂A1P1A2P2A3P3。（7）馬鹿。角枝呈現(xiàn)為圓形，分為6～9叉。眉叉在鹿角主干的基部伸出，向前方延展，并且與主干間呈近似直角，公式為♂A1P1SA1P2A1P3。

2.2 藥材鹿角抗骨質(zhì)疏松的活性分析

20 mg/（kg·d）環(huán)磷酰胺能夠降低小鼠胸腺指數(shù)（t=4.28，P＜0.05），且股骨橫徑、股骨干重、股骨長減少（t=5.47、6.12、6.61，P＜0.05），羥脯氨酸、骨鈣含量較空白組低（t=5.41、6.29，P＜0.05），造成小鼠骨丟失。組合物低劑量組股骨干重、橫徑較模型組高（t=4.26、5.14，P＜0.05）。與模型組相比，組合物高劑量組股骨干重有明顯增加（t=4.91，P＜0.05），且組合物髙、低劑量都能夠?qū)π∈蠊氢}的流失進行拮抗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.81、7.56，P＜0.05），見表1、表2。

表1 各組小鼠臟器指數(shù)對比（mg/kg，±s）

表1 各組小鼠臟器指數(shù)對比（mg/kg，±s）

組別 數(shù)量 脾臟指數(shù) 胸腺指數(shù) 肝臟指數(shù)空白組 10 4.72±1.00 3.56±0.97 49.67±14.08環(huán)磷酰胺模型組 10 4.69±2.18 1.43±0.36 47.67±10.49水提物低劑量組 10 4.02±1.35 1.96±0.93 49.98±19.17水提物高劑量組 10 4.61±1.15 1.86±0.73 49.80±15.31乙醇提取物低劑量組 10 3.38±1.23 1.53±0.51 37.80±7.05乙醇提取物高劑量組 10 3.44±1.26 1.72±0.65 47.06±8.26組合物低劑量組 10 3.75±1.44 1.82±0.71 44.14±8.39組合物高劑量組 10 3.75±1.49 2.22±0.50 46.07±14.44

表2 各組股骨計量學(xué)指標對比（±s）

表2 各組股骨計量學(xué)指標對比（±s）

組別 數(shù)量 股骨干重（g） 股骨長（mm） 股骨橫徑（mm）空白組 10 0.049±0.003 15.18±0.56 1.65±0.08環(huán)磷酰胺模型組 10 0.035±0.003 13.74±0.40 1.49±0.08水提物低劑量組 10 0.046±0.003 14.90±0.47 1.54±0.12水提物高劑量組 10 0.041±0.002 14.80±0.30 1.51±0.05乙醇提取物低劑量組 10 0.041±0.003 14.80±0.38 1.51±0.10乙醇提取物高劑量組 10 0.042±0.003 14.81±0.65 1.55±0.14組合物低劑量組 10 0.046±0.003 14.77±0.47 1.60±0.09組合物高劑量組 10 0.045±0.001 14.84±0.38 1.52±0.05

3 討論

鹿角每年都會脫落，之后會有新的角干產(chǎn)生，而對于新生鹿角而言，其外觀會變得更為復(fù)雜[4]。需要指出的是，鹿角大小不一，部分比較簡單，僅有一個角干，且沒有分叉，如毛冠鹿，但通常情況下，鹿角均會有分叉；有些角的形態(tài)卻比較復(fù)雜，并且還比較大，比如馬鹿、梅花鹿等，馬鹿角成角規(guī)模大，而且還有著非常多的分叉[5-6]。依據(jù)鹿角的不同形狀特征，可對其進行準確區(qū)分。現(xiàn)階段，在研究藥用鹿角上，大多集中于梅花鹿、馬鹿的鹿角上，而對諸如赤麂、毛冠鹿、小麂、林麂、黑麂等，卻較少涉足[7-8]。因此，通過對多種鹿角的性狀特征進行研究，且展開比對，能夠為藥用鹿角資源的合理化、充分化利用，提供可靠保障與理論支撐，而到底何種鹿角的藥用價值更高，仍需深究。

需要指出的是，骨組織多有礦物質(zhì)、有機質(zhì)等構(gòu)成，而在礦物質(zhì)當中，含量最高的是骨鈣、骨磷，而在骨骼當中的鈣、磷，其存在形式為羥基磷酸鈣，組建成了骨骼的基本框架[9]，同時還是骨的重要硬度部分。另需指出的是，在骨骼當中，骨膠原占比大于90%[10]，所以，通過明確羥脯氨酸的具體含量，便能夠?qū)⒐钱斨械挠袡C質(zhì)含量給推算出來。因此，羥脯氨酸的含量多少，能夠?qū)⒐琴|(zhì)量狀況、骨骼硬度、骨骼礦化程度及骨量多少等給反映出來；另外，通過與小鼠骨長、骨干重、骨徑等骨計量學(xué)指標相結(jié)合，能夠從中明確小鼠骨質(zhì)疏松的具體程度[11]。針對葡萄糖酸鈣來講，其不僅有著良好的補鈣效果，而且還是對骨質(zhì)疏松進行預(yù)防的不錯藥物，本文將葡萄糖酸鈣當作對照，目的在于分析鹿角盤水提物、鹿角盤組合物以及醇提物對骨質(zhì)疏松所產(chǎn)生的影響，并且分析其與葡萄糖酸鈣之間的聯(lián)系，從中找出供試藥物對抗骨質(zhì)疏松作用的具體途徑。

對于骨質(zhì)疏松而言，其作為一種以骨組織微觀結(jié)構(gòu)出現(xiàn)進行性改變以及骨量異常減少為典型特征的骨病類型，患病后，骨脆性會大幅增加，容易引發(fā)以骨折為典型特征的全身性骨代謝疾病[12]。針對環(huán)磷酰胺來講，其乃是當前臨床中一種比較常用的抗腫瘤藥物，有研究[13]指出，其容易造成患者骨的快速丟失。另有報道[3]指出，環(huán)磷酰胺會將脂質(zhì)過氧化進行激活，從而容易產(chǎn)生骨髓損傷毒性，最終會減少骨細胞的數(shù)量。經(jīng)本次試驗得知，小鼠環(huán)磷酰胺20 mg/（kg·d）持續(xù)灌胃14 d，模型小鼠的股骨干重有明顯減少。另外，橫徑、股骨長均有顯著減少，羥脯氨酸、骨有機質(zhì)同時也處于不斷減少狀態(tài)，與骨質(zhì)疏松的基本特征相符，提示模型構(gòu)建成功。有學(xué)者[14]指出，環(huán)磷酰胺能夠通過抑制骨細胞，從而達到阻止骨膠原合成的目的，并且還能減少其分泌量，從而減少鈣鹽沉積，加速鈣吸收，減少骨量，從而引發(fā)骨質(zhì)疏松。而針對葡萄糖酸鈣來分析，其能夠?qū)Νh(huán)磷酰胺所造成的鈣丟失進行抑制，但對羥脯氨酸所造成的影響卻并不明顯，鹿角盤水提物可以增加股骨干重、骨鈣的含量；水提取物高劑量組不僅能對小鼠骨干重、骨鈣含量進行改善，而且還能促進羥脯氨酸含量的增加。高劑量組股骨干重增加幅度高于模型組；高、低劑量組都可以對小鼠骨鈣的流失進行拮抗，其多作用于小鼠股骨干重及骨徑。另外，還需要強調(diào)的是，由環(huán)磷酰胺所造成的小鼠丟失實驗當中，鹿角盤70%乙醇提取部位、水提物高劑量可以對環(huán)磷酰胺的副作用所造成的骨膠原、骨鈣流失進行抑制。因此，單純的鈣制劑難以對骨骼對鈣的利用進行改善，而高劑量鹿角盤水提物、乙醇提取物等，則能加速骨細胞對膠原的分泌，促進鈣沉積以及骨形成，因而能夠?qū)琴|(zhì)疏松進行有效防止，所以，鹿角盤實為一種抗骨質(zhì)疏松中藥的重要資源。

綜上，鹿角盤對環(huán)磷酰胺所導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松，有著良好的拮抗作用，應(yīng)用效能突出。