朱曉琳 尚 宇

（1 大連市中心醫(yī)院病理科，遼寧 大連 116000；2 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧 大連 116000）

對于病理技術(shù)而言，免疫組織化學(xué)染色技術(shù)屬于極為重要的一種染色方法，在病理工作期間其應(yīng)用率呈現(xiàn)出顯著增加，并且在進(jìn)行疾病診斷期間，表現(xiàn)出顯著價(jià)值[1]。免疫組織化學(xué)染色作為病理技術(shù)之一，近年來獲得快速發(fā)展，但具體操作期間往往因?yàn)闇囟?、濕度、人為因素、時(shí)間等系列因素影響呈現(xiàn)出不穩(wěn)定結(jié)果的現(xiàn)象，從而使得結(jié)果對比工作難以順利展開，無法順利做到質(zhì)量控制，所以針對病理技術(shù)員表現(xiàn)出的要求逐漸提升[2]。在進(jìn)行傳統(tǒng)手工技術(shù)操作期間，往往因?yàn)橐幌盗胁淮_定因素影響使其在病理診斷中呈現(xiàn)出一系列的誤診現(xiàn)象，在此種情形下，全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色方法的有效運(yùn)用，以及呈現(xiàn)出運(yùn)行體系獨(dú)特性特點(diǎn)，并且準(zhǔn)備激光條碼掃描進(jìn)行配備，能夠利用電腦操作系統(tǒng)對軟件程序進(jìn)行有效控制，呈現(xiàn)出簡便安全染色操作特點(diǎn)，對于系列外界因素能夠充分避免，并且可將病理檢測結(jié)果準(zhǔn)確度顯著提升，最終在提升免疫組織化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化程度以及對質(zhì)量進(jìn)行控制方面表現(xiàn)出顯著價(jià)值[3]。本次研究將我院2017年12月至2020年2月收治的100例常見腫瘤患者作為試驗(yàn)對象；對患者展開包埋切片操作，完成后對應(yīng)進(jìn)行檢測方法的劃分，分別采用手工操作以及全自動(dòng)免疫組化機(jī)合理展開免疫組化染色操作，旨在探析全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色技術(shù)在常見腫瘤疾病診斷中的可行性，以實(shí)現(xiàn)疾病有效診治與預(yù)后。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將我院2017年12月至2020年2月收治的100例常見腫瘤患者作為試驗(yàn)對象；采用福爾馬林（10%）針對標(biāo)本展開固定操作，完成石蠟包埋以及切片操作后，分別采用手工操作以及全自動(dòng)免疫組化機(jī)合理展開免疫組化染色操作。

1.2 方法 分別利用手工操作以及全自動(dòng)免疫組化機(jī)展開免疫組化染色操作。于前期在組化機(jī)中有效編入每項(xiàng)抗體優(yōu)化程序，對于此次試驗(yàn)信息標(biāo)簽進(jìn)行有效打印，之后在對應(yīng)玻片上方進(jìn)行黏貼，完成一系列準(zhǔn)備后，將全自動(dòng)免疫組化機(jī)啟動(dòng)，合理展開抗原修復(fù)、烤片、DAB顯色、抗體滴加以及蘇木素復(fù)染操作，對于上述系列操作均需要在染色劑上方展開。將切片取下后，合理展開脫水透明操作，針對中性樹膠合理展開封片操作。主要利用EnVision兩步法合理展開手工染色操作，具體為：針對石蠟實(shí)施切片，確保達(dá)到脫蠟至水目的，之后合理展開抗原修復(fù)（通過高壓鍋高溫完成）操作，于室溫條件下進(jìn)行冷卻后，針對H2O2（3%）實(shí)施10 min室溫孵育，以有效消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，合理展開蒸餾水沖洗操作，之后合理展開浸泡、沖洗等一系列操作。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 免疫組化分析結(jié)果統(tǒng)計(jì) 統(tǒng)計(jì)手工操作以及全自動(dòng)免疫組化機(jī)的免疫組化分析結(jié)果，統(tǒng)計(jì)其陽性檢出率，對比兩組陽性檢出率。

1.3.2 免疫組化染色效果觀察 顯微鏡下觀察染色效果，由病理醫(yī)師和病理技術(shù)質(zhì)控員評(píng)估手工操作以及全自動(dòng)免疫組化機(jī)的免疫組化染色情況，評(píng)分0～10分，評(píng)分越高，則表示染色效果越高，對比兩組評(píng)分情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析所有數(shù)據(jù)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示計(jì)量資料，采用t檢驗(yàn)；以（%，n）表示計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化分析結(jié)果統(tǒng)計(jì) 于臨床合理完成染色封片操作后，隨機(jī)抽取兩組染片，于顯微鏡觀察下展開對應(yīng)診斷操作發(fā)現(xiàn)，最終發(fā)現(xiàn)100例全自動(dòng)免疫組化染色患者中，表現(xiàn)出背景著色患者4例，表現(xiàn)出陽性細(xì)胞患者98例，表現(xiàn)出邊緣著色患者2例；100例手工染色患者中，表現(xiàn)出背景著色患者32例，表現(xiàn)出陽性細(xì)胞患者80例，表現(xiàn)出邊緣著色患者48例。經(jīng)統(tǒng)計(jì)后可知，全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色者，陽性細(xì)胞檢出率（98.00%，98/100）顯著高于手工操作染色者（48.00%，48/100），兩種方法之間呈現(xiàn)出顯著性差異（P＜0.05）。

2.2 免疫組化染色效果比較 于全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色下，表現(xiàn)出較強(qiáng)的染色強(qiáng)度以及準(zhǔn)確組織定位結(jié)果，呈現(xiàn)出較低假陰性率以及較高陽性率，能夠獲得清晰背景，僅2例表現(xiàn)出切片邊緣著色情況。對于手工染色而言，其雖然能夠做到準(zhǔn)確組織定位，但是呈現(xiàn)出強(qiáng)弱不一染色強(qiáng)度的現(xiàn)象，表現(xiàn)出背景著色不清晰，呈現(xiàn)出非特異性染色的現(xiàn)象，表現(xiàn)出較多切片邊緣著色現(xiàn)象。組織標(biāo)本染色完成封片后，全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色和手工染色的玻片標(biāo)本鏡下對比顯示：與手工染色的組織標(biāo)本相比，全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色的組織標(biāo)本透光性較好，染色劑的組織穿透性強(qiáng)，染色信號(hào)放大，陽性細(xì)胞的表達(dá)清晰、染色程度較深，背景和非特異性染色淺，有效提高了鑒別診斷的敏感性；與手工染色的組織標(biāo)本相比，全自動(dòng)免疫組化機(jī)定位準(zhǔn)確，未出現(xiàn)染色顏色深淺不一的現(xiàn)象。顯微鏡下評(píng)估染色效果顯示，全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色評(píng)分為（9.45±0.32）分，明顯高于手工操作染色者的（7.35±0.32）分，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.369，P＜0.05）。

3 討 論

近年來，免疫組織化學(xué)技術(shù)獲得快速發(fā)展，并且在各項(xiàng)技術(shù)獲得快速發(fā)展情形下，在染色方面由人工化逐漸向自動(dòng)化發(fā)展。作為近年發(fā)展較快學(xué)科之一，呈現(xiàn)出較高靈敏度、較強(qiáng)特異性以及定位準(zhǔn)確特點(diǎn)，其能夠?qū)⒉±碓\斷準(zhǔn)確性顯著提高，在基礎(chǔ)、臨床學(xué)科中可以有效滲透，對于疾病診斷、預(yù)后判斷以及治療指導(dǎo)等方面表現(xiàn)出顯著的價(jià)值。但是免疫組織化學(xué)技術(shù)作為多因素以及多步驟決定的試驗(yàn)方法之一，具有諸多干擾因素，甚至可能呈現(xiàn)出不理想染色結(jié)果現(xiàn)象，導(dǎo)致出現(xiàn)判斷錯(cuò)誤的情況。對于手工染色而言，即使其能夠做到準(zhǔn)確定位，但是表現(xiàn)出背景不清晰以及染色強(qiáng)度強(qiáng)弱不一的特點(diǎn)，往往會(huì)表現(xiàn)出非特異性染色的現(xiàn)象，呈現(xiàn)出較多的切片邊緣著色情況[4]。與手工染色進(jìn)行比較，全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色表現(xiàn)出的優(yōu)勢較多，并且能夠顯著提升染色效果，呈現(xiàn)出較強(qiáng)的染色強(qiáng)度，可獲得清晰背景，不會(huì)表現(xiàn)出切片邊緣著色的情況[5]。

對全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色獲得較好效果的原因進(jìn)行分析，主要是其抗原修復(fù)強(qiáng)度、烤片溫度、作用時(shí)間以及每張切片試劑量均呈現(xiàn)出相對固定的特點(diǎn)，表現(xiàn)出較好的重復(fù)性[6]。通過機(jī)器噴射式清洗，對于清洗的徹底性以及均勻性可以做出充分保證，并且表現(xiàn)出手工誤差的概率較低，能夠?qū)⒈尘叭旧行Ы档汀４送?，可以保證其覆蓋的完整性，充分避免試劑的揮發(fā)，保證最適液體量以及持續(xù)維持反應(yīng)環(huán)境，從而避免呈現(xiàn)出切片邊緣著色以及干片的現(xiàn)象。而對于手工染色而言，其表現(xiàn)出較多影響因素，主要集中于組織易脫片、抗原修復(fù)時(shí)間過長以及修復(fù)時(shí)間過短等系列缺點(diǎn)，較易呈現(xiàn)出假陰性的現(xiàn)象[7-8]。

本次研究于臨床合理完成染色封片操作后，隨機(jī)抽取兩組染片，在顯微鏡觀察下展開對應(yīng)診斷操作發(fā)現(xiàn)，全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色表現(xiàn)出較強(qiáng)的染色強(qiáng)度以及準(zhǔn)確組織定位結(jié)果，呈現(xiàn)出較低假陰性率以及較高陽性率，能夠獲得清晰背景，未表現(xiàn)出切片邊緣著色情況[9]。而手工染色雖然能夠做到準(zhǔn)確組織定位，但是呈現(xiàn)出強(qiáng)弱不一染色強(qiáng)度的現(xiàn)象，表現(xiàn)出不清晰背景，呈現(xiàn)出非特異性染色的現(xiàn)象，表現(xiàn)出較多切片邊緣著色現(xiàn)象。100例全自動(dòng)免疫組化染色患者中，表現(xiàn)出背景著色患者4例，表現(xiàn)出陽性細(xì)胞患者98例，表現(xiàn)出邊緣著色患者2例；100例手工染色患者中，表現(xiàn)出背景著色患者32例，表現(xiàn)出陽性細(xì)胞患者80例，表現(xiàn)出邊緣著色患者48例，最終發(fā)現(xiàn)兩種方法之間呈現(xiàn)出顯著差異性。對比全自動(dòng)免疫組化染色和手工染色結(jié)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在背景著色、邊緣著色方面差異顯著，二者對陽性細(xì)胞的檢出效果也存在較大差異，兩種方法之間呈現(xiàn)出顯著差異性。提示全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色在染色強(qiáng)度、準(zhǔn)確組織定位、背景著色、邊緣著色方面明顯優(yōu)于手工染色，原因可能是：全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色抗原修復(fù)、烤片、DAB顯色、抗體滴加以及蘇木素復(fù)染等諸多過程均在染色機(jī)上完成，將切片取下后實(shí)施脫水以及透明，完成后合理展開中性樹膠封片。其與手工染色比較，可做到染色省力、省時(shí)，獲得上述理想效果，充分證明全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色技術(shù)應(yīng)用的可行性[10-11]。此外，觀察兩組染色效果，組織標(biāo)本染色完成封片后，對比全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色和手工染片的玻片標(biāo)本鏡下顯示效果發(fā)現(xiàn)，與手工染色的組織標(biāo)本相比，全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色的組織標(biāo)本，透光性較好，染色劑的組織穿透性強(qiáng)，染色信號(hào)放大，陽性細(xì)胞的表達(dá)清晰、染色程度較深，背景和非特異性染色淺，有效提高了鑒別診斷的敏感性；同時(shí)，全自動(dòng)免疫組化機(jī)定位準(zhǔn)確，未出現(xiàn)染色顏色深淺不一的現(xiàn)象，而手工染色處理者，非特異性背景染色不清晰，背景染色不佳，誤診風(fēng)險(xiǎn)較高，易出現(xiàn)假陽性病例；顯微鏡下評(píng)估染色效果也顯示，全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色評(píng)分為（9.45±0.32）分，而手工操作染色者評(píng)分為（7.35±0.32）分，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示可知全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色可獲得更好的組織標(biāo)本染色效果較人工染色的染色質(zhì)量更佳，有助于控制組織標(biāo)本的染色質(zhì)量水平[12]。

全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色效果佳，且染色效率顯著提升。病理檢驗(yàn)科工作繁忙，病理檢驗(yàn)任務(wù)繁重，全自動(dòng)免疫組化機(jī)的應(yīng)用，可有效提升工作效率，減輕病理醫(yī)師的工作負(fù)擔(dān)。全自動(dòng)免疫組化及染色過程只需2 h，可將大批量的標(biāo)本放置于儀器玻盤中，2 h即可完成所有病理標(biāo)本染色處理操作[13]。當(dāng)前，臨床常用的全自動(dòng)免疫組化機(jī)，多具備3個(gè)玻片盤，每個(gè)玻片盤可承載多個(gè)玻片標(biāo)本，3個(gè)玻片盤同時(shí)運(yùn)行狀況下，可一次性完成30多個(gè)病理組織標(biāo)本的染色工作。同時(shí)，現(xiàn)代全自動(dòng)免疫組化機(jī)也可實(shí)施單排撥片標(biāo)本檢測，靈活性較高，應(yīng)用于急診檢測較為方便；對于檢測數(shù)量較少的時(shí)間段和醫(yī)療機(jī)構(gòu)，使用全自動(dòng)免疫組化機(jī)的單排玻片標(biāo)本檢測，也可以節(jié)約能源，縮短檢測時(shí)間，臨床應(yīng)用效果較為理想。全自動(dòng)免疫組化機(jī)，可連接自動(dòng)免疫組化儀，實(shí)現(xiàn)連續(xù)玻片上載功能。一臺(tái)自動(dòng)免疫組化儀，可連接數(shù)個(gè)全自動(dòng)免疫組化機(jī)，并自動(dòng)運(yùn)行玻片上載程序，可有效減輕檢驗(yàn)人員的工作負(fù)擔(dān)，大大提升了檢測效率。全自動(dòng)免疫組化機(jī)的檢測操作準(zhǔn)確，與人工操作相比，可有效避免出現(xiàn)錯(cuò)誤或者操作失誤，而自動(dòng)運(yùn)行撥片上載程序，也可避免撥片管理錯(cuò)誤，有效提升了病理組織學(xué)檢驗(yàn)準(zhǔn)確性。利用全自動(dòng)免疫組化機(jī)輔助制片，大大提升了病理醫(yī)師的制片效率，可為病理診斷及臨床診斷節(jié)約大量的時(shí)間，促進(jìn)患者盡早治療，同時(shí)也有助于緩解醫(yī)療資源緊張的局勢[14]。

常規(guī)臨床病理制片中較容易出現(xiàn)組織脫落的情況，主要與操作不當(dāng)、溫度控制不當(dāng)?shù)纫蛩赜嘘P(guān)，同時(shí)受操作者的技術(shù)水平影響也較大。但是，全自動(dòng)免疫組化機(jī)，可設(shè)定出最合理的操作步驟和溫度，精確控制每一個(gè)步驟和操作溫度，保證玻片標(biāo)本病理組織處理的準(zhǔn)確性，并可防止組織脫落，避免影響后續(xù)病理診斷工作。玻片標(biāo)本的人工操作染色過程中，對于酸堿度的控制難度較大，敏銳地察覺酸堿度的異常，調(diào)整操作要求較高，對病理醫(yī)師的操作水平要求亦較高。但全自動(dòng)免疫組化機(jī)可有效解決酸堿度調(diào)節(jié)的問題。當(dāng)前，病理診斷中使用的全自動(dòng)免疫組化機(jī)已經(jīng)配備酸性修復(fù)液和堿性修復(fù)液，這兩種修復(fù)液可根據(jù)玻片標(biāo)本處理的不同階段需求，設(shè)置酸性修復(fù)液和堿性修復(fù)液的釋放量，并監(jiān)測機(jī)體pH值，進(jìn)一步調(diào)整修復(fù)液釋放量，保證達(dá)到最合理的pH值狀態(tài)，確保病理玻片標(biāo)本在酸堿度適宜的環(huán)境中完成染色等操作。另外，全自動(dòng)免疫組化機(jī)實(shí)現(xiàn)了玻片標(biāo)本試劑用量的定量滴加，并可調(diào)整玻片盤位置；試劑滴注前，玻盤調(diào)整角度，使玻片微微傾斜，促進(jìn)試劑均勻分布于標(biāo)本組織表面，以保證處理的有效性。全自動(dòng)免疫組化機(jī)中不同廢液的收集與排放，存在單獨(dú)的途徑，不同廢液可單獨(dú)排放并儲(chǔ)存起來，便于后續(xù)進(jìn)行正確處理[15]。

免疫組化技術(shù)是現(xiàn)代病理診斷的重要技術(shù)，在多種疾病診斷中發(fā)揮了重要作用，使其成為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，直接決定臨床診斷與治療方案的制訂，具有重要的臨床意義，因此必須保證免疫組化技術(shù)的準(zhǔn)確性。近年來病理診斷技術(shù)發(fā)展迅速，免疫組化技術(shù)也獲得了較大提高，病理診斷工作量大幅度提升，常規(guī)病理醫(yī)師的手工操作，難以滿足臨床病理診斷的實(shí)際需求。因此，臨床領(lǐng)域積極引進(jìn)了全自動(dòng)免疫組化機(jī)，可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)免疫組化染色操作，大大提升了免疫組化診斷的工作效率，具有省時(shí)、省力等優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)前，我國的病理實(shí)驗(yàn)室正積極面向國際化標(biāo)準(zhǔn)發(fā)展，全自動(dòng)免疫組化機(jī)的使用，可實(shí)現(xiàn)病理診斷的標(biāo)準(zhǔn)化和可控化，有助于提升其質(zhì)控水平，便于醫(yī)療機(jī)構(gòu)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)化的病理實(shí)驗(yàn)室。與人工操作相比，全自動(dòng)免疫組化機(jī)染色，既提高了操作效率，又保證了操作準(zhǔn)確性和染色有效性，具有科學(xué)合理的優(yōu)勢。免疫組化分析過程中產(chǎn)生的廢液對環(huán)境污染較為嚴(yán)重，人工收集較為繁瑣，容易出現(xiàn)污染情況；全自動(dòng)免疫組化機(jī)的廢液合理收集方式，可有效避免廢液污染，便于后續(xù)集中回收，有助于提高病理免疫組化分析的環(huán)境保護(hù)水平[16]。

綜上所述，同手工操作染色進(jìn)行比較，全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色技術(shù)能夠獲得顯著效果，對于染色標(biāo)準(zhǔn)化較易做到，對于手工染色呈現(xiàn)出人工完成取點(diǎn)可以充分避免，對于整個(gè)過程均可以做到自動(dòng)完成，可使得人為影響因素顯著減少，對于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化可以輕易達(dá)到，可凸顯全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的應(yīng)用優(yōu)勢。