曾 灝 翚 纓 張林芝

廣西壯族自治區(qū)貴港市人民醫(yī)院檢驗科，廣西貴港 537100

肝細(xì)胞癌屬于臨床上常見惡性腫瘤，主要的發(fā)病人群為40歲以上男性患者，具有較高的致死率[1-2]。該病起病具有隱匿性強(qiáng)的特征，大多數(shù)患者感覺不適再行檢查時已經(jīng)進(jìn)展至中晚期，預(yù)后效果較差。提高早期診斷的準(zhǔn)確度對改善患者預(yù)后、延長患者的生存時間具有重要的臨床意義[3]。血清指標(biāo)檢測在腫瘤早期的診斷中較為常用，具有操作簡便、價格便宜、無創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，在各類腫瘤的診斷中均有應(yīng)用[4]。但臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，單一指標(biāo)檢測的誤診率、漏診率較高，不利于惡性腫瘤的確診。為此，臨床多通過多種不同的血清指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合檢測以提高檢測的準(zhǔn)確度[5]。本研究通過血清甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）、甲胎蛋白異質(zhì)體-L3比率（alpha fetoprotein hetero-L3 ratio，AFP-L3%）、糖類抗原-199（carbohydrate antigen 199，CA199）、異常凝血酶原（protein induced by vitamin k absence or antagonist-Ⅱ，PIVKA-Ⅱ）、高爾基體蛋白73（golgi protein 73，GP73）血清學(xué)檢驗指標(biāo)進(jìn)行檢測，并對其檢測能效進(jìn)行比較，以期為肝細(xì)胞癌的診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2022年1月貴港市人民醫(yī)院（我院）收治的肝細(xì)胞癌患者40例作為惡性組，單純肝硬化患者40例作為良性組，同期健康體檢者40例作為健康組。惡性組：男24例，女16例；年齡：36～73歲，平均（51.34±2.66）歲；腫瘤大?。褐睆阶畲? cm，最小1 cm，平均（2.27±0.16）cm；TNM分期可見：Ⅰ～Ⅱ期25例，Ⅲ～Ⅳ期15例；分化情況：高、中、低分化分別為11、14、15例。良性組：男22例，女18例；年齡35～72歲，平均（50.96±2.71）歲。健康組：男21例，女19例；年齡35～74歲，平均（51.25±2.39）歲。三組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①惡性組病理檢查確診為肝細(xì)胞癌；②良性組經(jīng)肝穿刺活檢確診為肝硬化；③健康組為我院體檢中心健康體檢者；④對本研究知情同意者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重腎功能不全、心力衰竭者；②合并其他類型惡性腫瘤者；③自身免疫疾病者。

1.2 方法

①標(biāo)本采集。本研究的所有對象均檢測血清AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73指標(biāo)，惡性組、良性組患者入院后第2天清晨檢測，健康體檢者當(dāng)日檢測。采集受檢者空腹靜脈血，約3 ml。送檢后進(jìn)行離心處理，離心40 min，轉(zhuǎn)速為2000 r/min。將血清分離后，放于-80℃環(huán)境中保存；②儀器、設(shè)備。所有采集標(biāo)本進(jìn)行離心處理的儀器均產(chǎn)自湖南湘儀實(shí)驗室儀器開發(fā)有限公司，型號相同；③檢測方法和設(shè)備。CA199采用電化學(xué)發(fā)光法檢測，儀器選用德國羅氏cobas e602全自動免疫分析儀。PIVKA-Ⅱ、GP73、AFP、AFP-L3%采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測，儀器選用北京熱景MQ60 Plus全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。AFP-L3%檢測步驟：化學(xué)發(fā)光免疫分析儀分別檢測AFP及AFP-L3數(shù)值，其中AFP-L3%=AFP-L3/AFP×100%。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

以病理學(xué)診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，對三組檢測結(jié)果進(jìn)行評析，并討論單獨(dú)檢測與聯(lián)合檢測的診斷結(jié)果（準(zhǔn)確度、特異度、敏感度）。AFP檢測結(jié)果＞9.6 ng/ml，則結(jié)果記為陽性；CA199檢測結(jié)果＞27 U/ml，則結(jié)果記為陽性；AFP-L3%檢測結(jié)果＞9.3%，則結(jié)果記為陽性；GP73檢測結(jié)果＞106.5 ng/ml，則結(jié)果記為陽性；PIVKA-Ⅱ檢測結(jié)果＞40 mAu/ml，則結(jié)果記為陽性；聯(lián)合檢測中任一檢測結(jié)果為陽性，則結(jié)果記為陽性。陽性預(yù)測值=真陽性例數(shù)/檢測結(jié)果陽性例數(shù)×100%；敏感度=真陽性例數(shù)/40×100%；特異度=真陰性例數(shù)/80×100%；準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）例數(shù)/120×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73水平比較

惡性組患者的AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73水平高于良性組、健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表1。

表1 三組血清AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73水平比較（±s）

表1 三組血清AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73水平比較（±s）

注 與惡性組比較，aP＜ 0.05；AFP：甲胎蛋白；AFP-L3%：甲胎蛋白異質(zhì)體-L3比率；CA199：糖類抗原-199；PIVKA-Ⅱ：異常凝血酶原；GP73：高爾基體蛋白73

組別 n AFP（ng/ml） AFP-L3%（%） CA199（U/ml） PIVKA-Ⅱ（mAu/ml） GP73（ng/ml）惡性組 40 189.73±22.05 16.84±2.44 107.27±15.26 20 381.67±3512.21 177.54±22.62良性組 40 54.23±2.66a 6.19±0.37a 30.08±3.22a 1264.38±142.47a 98.34±3.27a健康組 40 6.09±0.27a 3.36±0.12a 4.79±0.14a 27.64±5.73a 52.85±3.49a F值 32.034 17.128 26.243 114.26 30.215 P值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.2 Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期患者的檢測水平比較

Ⅲ～Ⅳ期 患 者 的AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73水平均高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05），見表2。

表2 Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期患者的檢測水平比較（±s）

表2 Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期患者的檢測水平比較（±s）

注 AFP：甲胎蛋白；AFP-L3%：甲胎蛋白異質(zhì)體-L3比率；CA199：糖類抗原-199；PIVKA-Ⅱ：異常凝血酶原；GP73：高爾基體蛋白73

組別 n AFP（ng/ml） AFP-L3%（%） CA199（U/ml） PIVKA-Ⅱ（mAu/ml） GP73（ng/ml）Ⅰ～Ⅱ期 25 175.66±5.92 15.14±1.42 85.38±5.11 15 443.82±1135.41 155.46±16.88Ⅲ～Ⅳ期 15 202.15±6.73 17.83±1.06 117.78±4.03 22 682.34±1654.57 182.65±14.71 t值 13.017 6.340 20.926 94.214 5.356 P值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 單獨(dú)檢驗與聯(lián)合檢驗診斷效能比較

聯(lián)合檢測的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度均高于單獨(dú)檢測，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表3。

表3 單獨(dú)檢驗與聯(lián)合檢驗診斷效能比較[（n/n）%]

3 討論

肝細(xì)胞癌屬于臨床常見惡性腫瘤，具有較高的病死率，我國每年因肝細(xì)胞癌病死患者已達(dá)10萬人以上[6-7]。肝細(xì)胞癌的致病因素較多，其中以肝硬化、長期使用黃曲霉毒素超標(biāo)食物、亞硝胺等為主[8]。黃曲霉毒素多存在于發(fā)霉的食物當(dāng)中，食用后可以通過消化系統(tǒng)侵入肝臟，造成肝臟損傷，隨著肝臟受損的加劇，可引起肝細(xì)胞癌變，甚至發(fā)生變性壞死[9]。肝細(xì)胞癌早期癥狀不突出，不易察覺，隨著疾病進(jìn)展，可見腹水、肝區(qū)疼痛、嘔血、乏力等癥狀，當(dāng)患者出現(xiàn)明顯不適再行檢測時，大多已進(jìn)展至晚期[10]。早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)是應(yīng)對肝細(xì)胞癌的最佳途徑，可降低患者病死率，改善患者的預(yù)后。因此，提高肝細(xì)胞癌診斷的準(zhǔn)確率具有極其重要的臨床意義。

AFP屬于糖蛋白的一種，是臨床中的常用檢測指標(biāo)，具有免疫抑制、誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡等多種生理功能。正常情況下，AFP在健康成年人血清中的含量較低，在多種腫瘤中均可出現(xiàn)高表達(dá)，尤其是肝細(xì)胞癌[11]。AFP-L3屬于AFP中的一個分支，在癌細(xì)胞侵襲下，甲胎蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)可出現(xiàn)異質(zhì)性差異。臨床研究發(fā)現(xiàn)，肝癌患者糖鏈結(jié)構(gòu)與良性肝病患者糖鏈結(jié)構(gòu)存在顯著區(qū)別[12]。AFP-L3主要由癌細(xì)胞產(chǎn)生，并且具有血管浸潤性特征，早期可見轉(zhuǎn)移態(tài)勢，AFP-L3占比越大，則腫瘤惡性程度越高。CA199屬于腫瘤相關(guān)抗原，在胃腸道中分布較多，同時也存在于膽管細(xì)胞、唾液腺上皮細(xì)胞中，當(dāng)疾病呈現(xiàn)出惡性特征，其水平將會以升高為表現(xiàn)[13]。有研究指出，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生變性壞死時，存在于核細(xì)胞中的CA199等腫瘤標(biāo)志物可進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)而導(dǎo)致該指標(biāo)水平提升[14]。PIVKA-Ⅱ在臨床中被稱為異常凝血酶原，健康的肝細(xì)胞可在維生素K的輔助下形成凝血酶原，當(dāng)健康的肝臟細(xì)胞發(fā)生癌變或缺乏維生素K時，即可產(chǎn)生異常凝血酶原，肝臟的良性病變通常不會引起PIVKA-Ⅱ的大幅升高。GP73作為新型腫瘤標(biāo)志物的一種，屬于高爾基體的2型跨膜蛋白。有學(xué)者指出，GP73可作為肝細(xì)胞癌的腫瘤標(biāo)記物之一，但單獨(dú)檢測的特異度、準(zhǔn)確度較低，體現(xiàn)了單一檢測的劣勢[15]。

本研究對AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ聯(lián)合GP73進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，惡性組患者的AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ及GP73水平均高于良性組、健康組（P＜ 0.05），提示肝細(xì)胞癌的發(fā)生與AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73的表達(dá)具有一定的關(guān)聯(lián)，肝細(xì)胞癌患者的上述指標(biāo)均處于高表達(dá)水平，且高于良性組、健康組。Ⅲ～Ⅳ期 患 者 的AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73水平均高于Ⅰ～Ⅱ期患者（P＜ 0.05），說明隨著疾病進(jìn)展，AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73的水平會進(jìn)一步升高，其血清含量的高低對疾病惡化程度判斷具有一定的指導(dǎo)價值。通過對比其診斷效能發(fā)現(xiàn)，AFP、AFP-L3%、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73單獨(dú)檢測準(zhǔn)確度依次為60.83%、67.50%、50.83%、74.14%、63.33%，均比聯(lián)合檢測準(zhǔn)確度低（P＜ 0.05）。由此可見，采用聯(lián)合檢測可有效提高肝細(xì)胞癌疾病診斷的準(zhǔn)確度，通過聯(lián)合各指標(biāo)進(jìn)行檢測，能夠彌補(bǔ)單獨(dú)檢測的劣勢。

綜上所述，血清AFP、AFP-L3、CA199、PIVKA-Ⅱ、GP73指標(biāo)聯(lián)合檢測可提高肝細(xì)胞癌診斷的特異度、敏感度及準(zhǔn)確度，臨床應(yīng)用價值高，值得在肝細(xì)胞癌診斷中推廣使用。