曹夢(mèng)醒，師 哲，李 勇*

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院，上海 200071

自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis, AIH）是一種自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的進(jìn)行性肝臟炎癥，其診斷以谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase, ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase, AST）、免疫球蛋白IgG 以及自身抗體（ANA、SMA、抗LKM1 和抗SLA）水平升高為主[1]。 AIH 常隱匿起病而無特異性癥狀，常表現(xiàn)為嗜睡、乏力、右上腹疼痛等，且近30%患者首診時(shí)已存在肝硬化表現(xiàn)[2]。 雖然AIH 的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但與藥物接觸、病毒性肝炎史以及遺傳易感個(gè)體等因素高度相關(guān)[3]，是一種T 細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)肝臟自身抗原的免疫反應(yīng)[4]。 臨床一線用藥以大劑量地塞米松和（或）聯(lián)合硫唑嘌呤抑制T細(xì)胞免疫力為主，但這種療法常因感染、消化性潰瘍等嚴(yán)重不良反應(yīng)而難以為繼。 近些年有使用利妥昔單抗或英夫利昔單抗等生物制劑治療難治性AIH的報(bào)道，但仍存在感染、肝毒性等并發(fā)癥而加大用藥風(fēng)險(xiǎn)[5]。 因此，如何選擇治療方案以提高免疫耐受性的同時(shí)減輕副作用將成為治療AIH 的關(guān)鍵。

miRNA-223 是最早發(fā)現(xiàn)的與骨髓系細(xì)胞發(fā)育密切相關(guān)的miRNA 之一，其在骨髓細(xì)胞中高度表達(dá)，通過外泌體或細(xì)胞外囊泡轉(zhuǎn)移的方式調(diào)節(jié)骨髓祖細(xì)胞分化，并調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境[6-9]。 miRNA-223 在粒細(xì)胞系的分化和成熟過程中增加，其高水平的表達(dá)又能進(jìn)一步促進(jìn)骨髓祖細(xì)胞系向粒細(xì)胞的分化和成熟[6，10-11]。 此外，miRNA-223 對(duì)粒細(xì)胞祖細(xì)胞（即MDSC）分化與活化具有抑制作用，對(duì)其敲除可促進(jìn)粒細(xì)胞祖細(xì)胞數(shù)量的擴(kuò)增。

人參皂苷（ginsenoside, GSS）是人參最主要的活性成分，與糖皮質(zhì)激素的化學(xué)結(jié)構(gòu)以及生物學(xué)效應(yīng)相似[12]。 有大量研究證明，GSS 可通過GR 途徑抑制T 細(xì)胞的免疫活性，顯著減輕由T 細(xì)胞過度活化引起的局部炎性浸潤與組織損傷[13]。 阻斷GR 后，由GR介導(dǎo)生效的途徑不會(huì)完全削弱，證明在GR 途徑外還存在其他途徑介導(dǎo)了GSS 對(duì)免疫的抑制[14]。GSS 對(duì)糖皮質(zhì)激素（glucocorticoids, GC）具有一定的增效減毒作用。 在長期應(yīng)用GC 導(dǎo)致GR 表達(dá)下降時(shí)，GSS的應(yīng)用除增強(qiáng)GC 的免疫抑制能力外還一定程度逆轉(zhuǎn)了GC 引起的GR 轉(zhuǎn)錄與翻譯下調(diào)[15-18]。 為進(jìn)一步探究人參皂苷在AIH 中是否有GC 相似的免疫抑制效應(yīng)，本文使用S-100 誘導(dǎo)的AIH 小鼠模型，觀察GSS 對(duì)AIH 的調(diào)節(jié)作用，為AIH 的治療提供替代藥物的新選擇。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

C57BL/6 雄性小鼠購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)碼：SCXK（滬）2017-0005。 小鼠飼養(yǎng)于上海市中醫(yī)醫(yī)院動(dòng)物房SPF 級(jí)小鼠飼養(yǎng)室，飼養(yǎng)環(huán)境為恒溫24～27 ℃，濕度50%～80%，飲水與飼料經(jīng)輻照、高壓滅菌不限量供應(yīng)。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已通過上海市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理與福利委員會(huì)審核，倫理號(hào)：2021019。

1.2 藥物與試劑

人參皂苷（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B30M11C114347）；弗氏完全佐劑（美國Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：MFCD00131105）；（強(qiáng)）RIPA 裂解液（批號(hào)：20101ES60）、TRIzol（批號(hào)：19201ES60）、Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix（批號(hào)：11184ES03）、脫脂奶粉（批號(hào)：36120ES60）、Tween-20（批號(hào)：60305ES76）、PMSF（批號(hào)：20104ES03）、十二烷基硫酸鈉（批號(hào)：20106ES76）均購自翌圣生物科技（上海）有限公司；BCA 蛋白濃度測定試劑盒（江蘇碧云天生物有限公司，批號(hào)：P0012S）；超敏ECL 化學(xué)發(fā)光液（上海天能科技有限公司，批號(hào)：180-5001）；HE試劑盒（生工生物工程（上海）有限公司，批號(hào)：E607318-0200）；MEF2C（批號(hào)：5030S）、iNOS（批號(hào)：13120S）、β-Actin（13E5）（批號(hào)：4970S）均購自美國Cell Signaling Technology 公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物造模、分組及干預(yù)方法

隨機(jī)選取C57BL/6 同源小鼠6 只作為空白組；參照LOHSE 等[19]描述的實(shí)驗(yàn)性AIH 小鼠模型制備方法進(jìn)行造模。 造模方法如下：選取C57BL/6 同源小鼠應(yīng)用抗原S-100 與弗氏佐劑完全研磨乳化后腹腔注射，0.2 mL/20 g，每周1 次，第7 天再次注射加強(qiáng)免疫炎癥反應(yīng)，第14 天即造模完成。 造模成功的模型小鼠隨機(jī)分為模型組、人參皂苷(AIH+GSS)組與陽性對(duì)照地塞米松(AIH+DEX)組，每組6 只。造模過程中空白組小鼠腹腔注射PBS，0.2 mL/20 g，每周1 次，共2 次。 在第14 天造模完成后，空白組、模型組予無菌蒸餾水灌胃200 μL/20 g，AIH+GSS組予人參皂苷50 mg/kg 等容量灌胃，AIH+DEX 組予地塞米松1 mg/kg、200 μL/20 g 腹腔注射。每天1 次，共14 d。

2.2 外泌體分離

摘取小鼠眼球取血，向血液中加入EDTA-2K抗凝，離心半徑8.7 cm，3000 r/min 4 ℃15 min 離心，收集上清液于液氮中凍存?zhèn)溆茫粚⒀獫{用PBS以1∶2 進(jìn)行稀釋，以離心半徑8.7 cm，2000 r/min 4 ℃10 min 離心后取上清液至新離心管，并加入樣本1/2體積的沉淀試劑，渦旋震蕩混勻后4 ℃60 min 孵育；孵育結(jié)束后以離心半徑8.7 cm，10 000 r/min 15 min離心，棄盡上清液；以預(yù)冷PBS 清洗管壁及管底白色沉淀后，以原始血漿容量用PBS 進(jìn)行吹打復(fù)溶，富集的外泌體。

2.3 MDSC 細(xì)胞、Treg 細(xì)胞、Th17 細(xì)胞染色

收集部分細(xì)胞至流式管中計(jì)數(shù)，調(diào)整至1×106個(gè)/管，加入PBS 離心，棄上清液；加100 μL PBS 重懸，分別加入流式抗體CD11b、Gr-1、CD4 和CD25，避光孵育；加入PBS 1 mL/管，離心棄上清液。檢測MDSC 細(xì)胞：取250 μL PBS 重懸細(xì)胞后進(jìn)行流式檢測。 檢測Treg 細(xì)胞：加PBS 重懸細(xì)胞，每管加入1 mL固定/破膜緩沖液，混勻后避光孵育，離心棄上清液。于100 μL 破膜液中重懸細(xì)胞，加入抗體Foxp3，避光孵育，離心棄上清液。 取破膜液重懸細(xì)胞后進(jìn)行流式檢測。 檢測Th17 細(xì)胞：以完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按說明書加入500×eBioscience Cell Stimulation Cocktail，37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)6 h；將細(xì)胞收集至流式管中，加入PBS 1 mL/管，離心棄上清；加PBS 重懸，加入流式抗體IL-17A，避光孵育；加入PBS，離心棄上清，此步驟重復(fù)2 次；加PBS 重懸細(xì)胞后進(jìn)行流式檢測。

2.4 Western blot 分析

使用RIPA 裂解液提取肝臟組織蛋白后，BCA蛋白試劑盒檢測蛋白含量。 樣品蛋白中加入適量5×SDS loading buffer，在100 ℃的金屬浴鍋加熱5 min。 使用SDS-PAGE 凝膠進(jìn)行電泳分離膠分離蛋白，并轉(zhuǎn)移至0.45 μm 孔徑的PVDF 膜。 條帶浸沒在封閉液中室溫慢搖3 h，封閉完成后，使用TBST 配制適合濃度的一抗，將目標(biāo)條帶浸沒于一抗中，4 ℃孵育過夜，用TBST 漂洗3 次。 使用TBST 配制適合濃度的HRP 標(biāo)記二抗，將目標(biāo)條帶浸于二抗中，室溫慢搖孵育1 h。 用TBST 漂洗后，ECL 顯色液覆蓋全膜。 最后應(yīng)用Bio-Rad ChemiDocTM XRS+系統(tǒng)與Image Lab 軟件曝光。

2.5 染料法熒光定量PCR

提取肝臟組織總RNA，測各樣本RNA 濃度及純度。 在每個(gè)離心管中加入1 μg RNA 樣本，5×gDNA wiper Mix 3 μL，RNase freeH2O 補(bǔ)足至15 μL，42 ℃水浴加熱2 min；在上述15 μL 體系中加入5 μL 的4×Hifair R○ⅢSuperMix plus。反應(yīng)條件：25 ℃，5 min，55 ℃，15 min，85 ℃，5 min 得到的cDNA-20 ℃保存?zhèn)溆谩?在離心管中加入U(xiǎn)niversal Blue qPCR SYBR Green Master Mix 10 μL，加正反向引物各0.4 μL(引物見表1)， 加入cDNA 模板2 μL，ddH2O 補(bǔ)足至20 μL，混勻。按照說明書設(shè)置反應(yīng)條件，實(shí)施上機(jī)檢測，用相對(duì)表達(dá)量=2-△△Ct公式計(jì)算各個(gè)組的表達(dá)情況。

表1 引物序列

2.6 小鼠肝功能與肝組織病理學(xué)檢測

使用ALT/GPT 檢測試劑盒檢測小鼠血清ALT水平，AST/GOT 檢測試劑盒檢測AST 水平。用4%的多聚甲醛將肝組織固定24 h 后，按照相應(yīng)的步驟進(jìn)行脫水至蠟并包埋，切片5 μm，制白片后烤干備用，染色前將白片按相應(yīng)順序脫蠟至水使用。 采用HE 染色與Masson 染色，染色后使用顯微鏡觀察小鼠肝組織的變化。

2.7 統(tǒng)計(jì)方法

流式數(shù)據(jù)使用CytExpert 分析結(jié)果，PCR 結(jié)果使用相對(duì)定量法計(jì)算Ct 值，將結(jié)果導(dǎo)入GraphPad Prism 8 繪制統(tǒng)計(jì)圖，并使用ANOVA 進(jìn)行多樣本配對(duì)分析，均采用雙側(cè)檢驗(yàn)。 Western blot 結(jié)果導(dǎo)入ImageJ 軟件測算灰度值并以GraphPad Prism 8 統(tǒng)計(jì)分析繪圖。 在α=0.05 水準(zhǔn)上，當(dāng)P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 人參皂苷對(duì)AIH 小鼠肝功能的影響

模型組小鼠血清ALT、AST 水平較空白組均顯著升高（P＜0.001）；AIH＋DEX 組小鼠血清ALT、AST濃度較模型組顯著降低（P＜0.001），與空白組無明顯差異(P＞0.05）；AIH＋GSS 組ALT 與AIH＋DEX 組無明顯差異（P＞0.05），AST 顯著低于模型組（P＜0.001），略高于DEX 組（P＜0.01）。 詳見表2。

表2 人參皂苷對(duì)AIH 小鼠轉(zhuǎn)氨酶的影響（U/L，±s，n=6）

表2 人參皂苷對(duì)AIH 小鼠轉(zhuǎn)氨酶的影響（U/L，±s，n=6）

注：與空白組比較，△△△P＜0.001；與模型組比較，***P＜0.001；與AIH＋DEX 組比較，##P＜0.01。

組別轉(zhuǎn)氨酶活力ALT AST空白組模型組AIH＋DEX 組AIH＋GSS 組F 值P 值12.18±0.64 14.72±0.50△△△12.22±0.53***12.30±0.56***20.83＜0.0001 23.76±3.26 36.71±1.04△△△21.30±1.29***27.33±3.22***##46.14＜0.0001

在對(duì)小鼠肝臟進(jìn)行HE、Masson 染色檢查肝臟損傷情況中發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組小鼠肝細(xì)胞與肝小葉形態(tài)正常，界面區(qū)無炎細(xì)胞浸潤，無膠原纖維增生；模型組肝界面區(qū)炎性細(xì)胞浸潤嚴(yán)重，肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重，小葉形態(tài)異常，有明顯膠原纖維增生；AIH＋DEX 組與AIH＋GSS 組界面區(qū)炎細(xì)胞浸潤明顯減少，小葉形態(tài)較正常，膠原纖維增生較少。 詳見圖1。

圖1 人參皂苷對(duì)AIH 小鼠肝臟病理的影響

3.2 人參皂苷對(duì)免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)功能

模型組小鼠MDSC 細(xì)胞數(shù)量較空白組顯著下降（P＜0.001），Treg 細(xì)胞數(shù)量較空白組顯著下降（P＜0.01），Th17 細(xì)胞數(shù)量較空白組顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；經(jīng)AIH＋DEX 干預(yù)后，MDSC、Treg 細(xì)胞數(shù)量高于模型組，Th17 細(xì)胞數(shù)量下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；AIH＋GSS 組MDSC 細(xì)胞數(shù)量高于模型組（P＜0.001），Treg 細(xì)胞數(shù)量高于模型組（P＜0.05），Th17 細(xì)胞數(shù)量低于模型組（P＜0.05）。 詳見圖2。

圖2 人參皂苷對(duì)AIH 小鼠免疫細(xì)胞的影響

3.3 人參皂苷對(duì)miRNA-223 表達(dá)的影響

模型組miRNA-233 表達(dá)顯著高于空白組（P＜0.001）；AIH＋GSS 組與AIH＋DEX 組miRNA-223 的表達(dá)水平均顯著低于模型組（P＜0.001），而兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 詳見表3。

表3 人參皂苷對(duì)miRNA-223 水平的影響（±s，n=6）

表3 人參皂苷對(duì)miRNA-223 水平的影響（±s，n=6）

注：與空白組比較，△△△P＜0.001；與模型組比較，***P＜0.001。

miRNA-223 1.01±0.01 2.08±0.33△△△0.67±0.04***0.74±0.05***88.66＜0.0001組別空白組模型組AIH＋DEX 組AIH＋GSS 組F 值P 值

3.4 人參皂苷對(duì)MDSC 相關(guān)蛋白及其對(duì)GR 的影響

模型組Arg-1、iNOS 轉(zhuǎn)錄水平較空白組顯著降低（P＜0.001）；AIH＋DEX 組與AIH＋GSS 組Arg-1、iNOS 轉(zhuǎn)錄水平均顯著高于模型組（P＜0.001），其中，AIH＋GSS 組Arg-1、iNOS 轉(zhuǎn)錄水平略高于AIH＋DEX組（P＜0.01）。 詳見表4。

表4 人參皂苷對(duì)MDSC 功能蛋白的影響（±s，n=6）

表4 人參皂苷對(duì)MDSC 功能蛋白的影響（±s，n=6）

注：與空白組比較，△△△P＜0.001；與模型組比較，***P＜0.001；與AIH＋DEX 組比較，##P＜0.01。

組別 Arg-1 mRNA iNOS mRNA空白組模型組AIH＋DEX 組AIH＋GSS 組F 值P 值1.00±0.00 0.40±0.13△△△1.30±0.25***1.78±0.14***##80.04＜0.0001 1.00±0.00 0.44±0.04△△△1.53±0.10***2.25±0.38***##90.5＜0.0001

模型組小鼠iNOS、Arg-1、MEF2C 與GR 蛋白表達(dá)水平均較空白組顯著下降(P＜0.001)，而AIH＋DEX或AIH＋GSS 干預(yù)后表達(dá)水平均有明顯上升(P＜0.001)。詳見表5 和圖3。

圖3 人參皂苷對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

表5 人參皂苷對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響（灰度值，±s，n=3）

表5 人參皂苷對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響（灰度值，±s，n=3）

注：與空白組比較，△△△P＜0.001；與模型組比較，***P＜0.001，**P＜0.01。

組別 iNOS GR MEF2C Arg-1空白組模型組AIH＋DEX 組AIH＋GSS 組F 值P 值1.00±0.03 0.47±0.01△△△1.28±0.11***0.98±0.04***93.94＜0.0001 1.00±0.12 0.52±0.06△△△0.96±0.06***0.90±0.08**20.97 0.0004 1.00±0.04 0.35±0.02△△△0.70±0.03***0.70±0.02***257.7＜0.0001 1.00±0.02 0.51±0.01△△△0.98±0.05***0.83±0.02***183.8＜0.0001

4 討論

AIH 是一種自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的界面型肝炎，因Th17 為首的輔助性T 細(xì)胞受到異常激活并不斷損傷肝細(xì)胞所致。有大量研究證實(shí)，MDSC 細(xì)胞擁有對(duì)T 細(xì)胞較強(qiáng)的抑制能力，可以很好地減輕因輔助性T 細(xì)胞過度活化對(duì)機(jī)體的損傷，而與骨髓細(xì)胞發(fā)育高度相關(guān)的miRNA-223 對(duì)MDSC 的增殖起決定性作用[6，10-11，26-27]。 系統(tǒng)性自身免疫性疾病中抗原呈遞細(xì)胞將自身抗原肽呈遞并激活初始CD4＋T 輔助(Th0)細(xì)胞，Th0 細(xì)胞迅速活化為Th1、Th2、Th17細(xì)胞并大量釋放促炎細(xì)胞因子并誘導(dǎo)了機(jī)體正常組織炎性損傷，這也是AIH 的發(fā)病機(jī)制之一[20-21]。 在此過程中，標(biāo)記為CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg 細(xì)胞的分化受損常被認(rèn)為是自身免疫系統(tǒng)疾病發(fā)生的關(guān)鍵[22]。在AIH 患者外周血中Treg 細(xì)胞功能受損，F(xiàn)oxp3 表達(dá)明顯降低[23]。 MDSC 細(xì)胞擁有抑制T 細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞活性的能力[24-25]。 并且MDSC細(xì)胞通過特異性高表達(dá)Arg-1、iNOS 酶分別產(chǎn)生尿素、L-鳥氨酸和NO 來抑制T 細(xì)胞活性[26-27]。 肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2 家族蛋白(myocyte enhancer factor-2,MEF2)作為控制基因表達(dá)與表觀遺傳修飾的轉(zhuǎn)錄因子，其家族亞型在不同組織中的表達(dá)水平表現(xiàn)出一定的異質(zhì)性[28]。 其中，MEF2C 亞型在骨髓細(xì)胞中特異性表達(dá)并廣泛參與了骨髓祖細(xì)胞的增殖、分化與成熟，對(duì)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)有至關(guān)重要的作用[6，28-29]。 在一項(xiàng)對(duì)骨髓細(xì)胞分化及粒細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的研究中發(fā)現(xiàn)，MEF2C 是潛在的對(duì)MDSC 細(xì)胞分化增殖調(diào)控的靶點(diǎn)[6]。

在本課題組前期對(duì)臨床AIH 患者的證候研究中發(fā)現(xiàn)，患者求診時(shí)常以脾虛生濕、濕郁化熱之面色萎黃、乏力倦怠、舌苔黃厚膩有齒痕等表現(xiàn)為主，土壅木郁化熱而又見脅肋悶痛不適等，又或發(fā)黃疸等癥。 AIH 的病因病機(jī)可歸納為先天稟賦不足，或勞傷脾胃，乃至脾胃運(yùn)化失司，水谷生濕化熱，蘊(yùn)結(jié)成毒；中焦受氣取汁，變化而赤，是謂血，脾虛令中焦氣機(jī)失運(yùn)，則氣血生化不足，又肝體陰而用陽，若肝失陰血滋養(yǎng)則氣不涵養(yǎng)而化火灼津，反傷于肝而成AIH。 其中，肝郁脾虛，氣滯、濕熱與邪毒令本病虛實(shí)夾雜，纏綿難愈?？偨Y(jié)出本病之病位在肝，而根本在乎脾與腎，以脾腎虛為本，濕熱瘀邪為標(biāo)。 因此，以人參為核心立方，輔以疏肝祛邪，養(yǎng)護(hù)中土，健運(yùn)脾胃，以行散中焦?jié)褡?，肝氣無濕阻則與脾氣升降運(yùn)行，周身大氣一轉(zhuǎn)，正氣充盛則邪氣散而AIH 得愈。

人參大補(bǔ)肺脾腎元?dú)?，能充養(yǎng)正氣而祛邪外出，而人參皂苷是其中發(fā)揮補(bǔ)益元?dú)庾钪饕乃幮С煞?，目前已發(fā)現(xiàn)的皂苷類單體已多達(dá)30 余種[30]。 目前已有較多關(guān)于人參皂苷扶正祛邪的功效在免疫學(xué)方面的研究，如人參皂苷Rg3 可呈劑量依賴性激活I(lǐng)L-12 途徑誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞的成熟與下調(diào)CD4+T 細(xì)胞[31-32]，Rh2 可 通 過 增 強(qiáng)CD4+、CD8+T 細(xì) 胞 活 性 并誘導(dǎo)T 細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞周圍浸潤[33]，Rg3 可通過激活巨噬細(xì)胞吞噬活性，激活CD4+T 細(xì)胞活性，促進(jìn)IFN-γ、TNF-β、IL-2 等細(xì)胞因子增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[34-35]等。 人參皂苷不同單體在不同的疾病中?？杀憩F(xiàn)出不同的免疫調(diào)節(jié)能力[36]，總體而言這種對(duì)免疫雙向調(diào)節(jié)的能力都可歸納為中醫(yī)理論的扶正祛邪。正所謂“正氣內(nèi)存，邪不可干”，于宏觀而言，人參對(duì)機(jī)體的調(diào)補(bǔ)之功，乃補(bǔ)氣生津，安神益智；于微觀言，這種補(bǔ)攝之能不再局限于傳統(tǒng)的“補(bǔ)”，而在于“陰平陽秘，精神乃治”；免疫過強(qiáng)，則“陽強(qiáng)不能密，陰氣乃絕”，人參有選擇性地降低過高的免疫水平，提高過低的免疫水平，使機(jī)體免疫處于健康平和的狀態(tài)，則陰陽平和，相互協(xié)調(diào)，其人氣實(shí)而難生AIH。

有研究表明，人參皂苷對(duì)機(jī)體的調(diào)節(jié)活性與GC相似，大多是通過GR 實(shí)現(xiàn)的[37]，這或與人參皂苷擁有與GC 相似的甾體樣化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)[12]。自身免疫性疾病患者臨床一線用藥以地塞米松、潑尼松龍等GC為主。 有中醫(yī)學(xué)者認(rèn)為，糖皮質(zhì)激素之于人體，有補(bǔ)火助陽之功，少用可“少火生氣”，溫煦臟腑，運(yùn)行氣血，補(bǔ)元陽而散陰寒；峻用、久用則“壯火食氣”，煎灼津液，耗傷精髓[38-39]。 長期GC 用藥除產(chǎn)生一系列嚴(yán)重不良反應(yīng)外，還會(huì)降低GR 表達(dá)與活性，最終導(dǎo)致GC 耐受[40-41]。 這也與GC 的“少火生氣，壯火食氣”相似。 但研究指出，人參皂苷可通過上調(diào)GR 表達(dá)水平、增強(qiáng)GR 與GC 的結(jié)合活力、輔助GR 對(duì)下游通路的激活效應(yīng)等方式減輕由GC 帶來的不良反應(yīng)，并對(duì)GC 增效減毒[30]。 但目前尚未有研究表明人參皂苷也通過激活GR，對(duì)AIH 有相同的免疫調(diào)節(jié)作用。 因此，我們?cè)O(shè)立地塞米松為陽性對(duì)照，觀察人參皂苷對(duì)AIH 小鼠的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，人參皂苷可通過上調(diào)GR 的表達(dá)，增強(qiáng)Arg-1、iNOS 的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，促進(jìn)MDSC 與Treg 的表達(dá)，抑制Th17 細(xì)胞的數(shù)量，調(diào)整肝臟的免疫微環(huán)境。 這種人參皂苷對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)與糖皮質(zhì)激素相似，均可調(diào)節(jié)小鼠免疫微環(huán)境，緩解AIH 肝臟中T 效應(yīng)細(xì)胞帶來的肝臟損傷。 同時(shí)，在應(yīng)用人參皂苷或地塞米松后MEF2C的表達(dá)量均有所提升。 由此推測，人參皂苷對(duì)MDSC的激活作用或與其對(duì)MEF2C 的激活有關(guān)。 此外，在對(duì)外周血外泌體的miRNA 檢測中，本研究表明人參皂苷與地塞米松均對(duì)miRNA-223 表現(xiàn)出良好的抑制作用。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明人參皂苷對(duì)AIH 小鼠的保護(hù)作用或通過對(duì)miRNA-223 的抑制與對(duì)GR 與MEF2C 的激活實(shí)現(xiàn)，據(jù)此實(shí)現(xiàn)對(duì)MDSC 的擴(kuò)增與對(duì)肝臟免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)。

雖然在我們的實(shí)驗(yàn)中人參皂苷對(duì)AIH 中肝臟的保護(hù)作用略低于AIH+DEX，且應(yīng)用劑量遠(yuǎn)大于后者，但鑒于人參皂苷在一定劑量的應(yīng)用尚未有嚴(yán)重不良反應(yīng)報(bào)道，對(duì)比GC 長期、大劑量應(yīng)用帶來的嚴(yán)重不良反應(yīng)，人參皂苷或能成為GC 之后新的替代選擇。