陳 燕， 姜?jiǎng)佘?/p>

（武漢大學(xué)人民醫(yī)院口腔科，湖北 武漢 430000）

口腔鱗狀細(xì)胞癌（OSCC）早期發(fā)現(xiàn)的概率和診斷率較低[1]，且其易發(fā)生淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，致使患者預(yù)后不佳，5年生存率維持在50%左右[2]。有研究[3]指出，轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)是OSCC患者預(yù)后的主要影響因素。微小RNA（microRNA, miRNA）作為生物體內(nèi)廣泛存在且進(jìn)化上高度保守的短鏈RNA，已被發(fā)現(xiàn)參與了多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程[4]，其可通過調(diào)控OSCC中腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、上皮細(xì)胞及癌相關(guān)成纖維細(xì)胞等的生物學(xué)過程，從而在促進(jìn)或抑制OSCC的增殖、轉(zhuǎn)移及侵襲中發(fā)揮重要作用[5]。miR-378a作為一種miRNA，已被發(fā)現(xiàn)在腎細(xì)胞癌中起腫瘤抑制作用，并與患者的良好預(yù)后相關(guān)[6]。研究[7]表明，miR-378a可通過抑制有氧酵解關(guān)鍵酶干預(yù)食管癌細(xì)胞的能量代謝，從而加速細(xì)胞凋亡。同時(shí)，其與腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和遷移密切相關(guān)[8]。然而，關(guān)于miR-378a是否參與OSCC發(fā)生及病理進(jìn)展的研究則鮮有報(bào)道。鑒于此，本研究通過分析OSCC組織中miR-378a的表達(dá)水平，比較不同臨床指標(biāo)間其表達(dá)的差異，探討miR-378a對(duì)患者預(yù)后的影響，以期為OSCC早期診斷及治療提供新的靶點(diǎn)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集2015年3月—2018年3月在我院行擇期手術(shù)治療的OSCC患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前未接受過任何治療者；②術(shù)后確診為OSCC者；③臨床資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有急慢性炎癥，以及其他惡性腫瘤者；②心、肝、腎等重要臟器嚴(yán)重功能障礙者。共入選91例患者，其中，男性54例，女性37例，平均年齡（55.21±9.64）歲。術(shù)中取OSCC和距癌組織邊緣2 cm以上的癌旁組織，將其快速置于液氮中，于-80 ℃下冷藏。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測(cè)OSCC組織和癌旁組織中miR-378a表達(dá) 取OSCC和癌旁組織，將其剪碎、勻漿，使用TRIzol總RNA提取試劑盒（Invitrogen公司，美國）提取總RNA，并檢測(cè)純度。配制反轉(zhuǎn)錄體系，按反轉(zhuǎn)錄試劑盒（大連寶生物工程有限公司，中國）說明對(duì)RNA行反轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA，使用CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Bio-Rad公司，美國）按PCR試劑盒（大連寶生物工程有限公司，中國）說明對(duì)引物開展擴(kuò)增。引物序列：miR-378a上、下游引物序列分別為5'-GCGCACTGGACTTGGAGTC-3'和 5'-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3'；U6 上、下游引物序列分別為5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'和5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT -3'。反應(yīng)條件：94 ℃2 min，94 ℃ 30 s，62 ℃ 30 s，7 5 ℃ 30 s，共 36 個(gè)循環(huán)。使用2-△△Ct法[△△Ct=（實(shí)驗(yàn)組目的基因Ct值-實(shí)驗(yàn)組內(nèi)參Ct值）-（對(duì)照組目的基因Ct值-對(duì)照組內(nèi)參Ct值）]計(jì)算OSCC組織和癌旁組織中miR-378a的相對(duì)表達(dá)量[9]。

1.2.2 隨訪 患者于術(shù)后第1天開始隨訪，隨訪方式包括住院期間查房及院外電話、門診復(fù)查等，隨訪截至2021年3月31日，均隨訪滿3年，記錄患者總生存時(shí)間及死亡情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank檢驗(yàn)，多因素分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OSCC組織和癌旁組織中miR-378a的表達(dá)情況

miR-378a在OSCC組織和癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量分別為（0.27±0.10）和（1.03±0.11），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=49.265，P＜0.001）。

2.2 不同臨床指標(biāo)OSCC組織中miR-378a的表達(dá)

miR-378a的相對(duì)表達(dá)量在OSCC組織不同TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 1。

表1 不同臨床指標(biāo)OSCC組織中miR-378a相對(duì)表達(dá)量的比較（）Table 1 Comparison on the relative expression levels of miR-378a in OSCC tissues with different clinical indicators （）

表1 不同臨床指標(biāo)OSCC組織中miR-378a相對(duì)表達(dá)量的比較（）Table 1 Comparison on the relative expression levels of miR-378a in OSCC tissues with different clinical indicators （）

指標(biāo) 例數(shù) miR-378a相對(duì)表達(dá)量 t值 P值性別男性 54 0.25±0.10女性 37 0.29±0.10 1.504 0.136年齡/歲＞55 43 0.28±0.11≤55 48 0.26±0.10 1.042 0.300腫瘤位置舌42 0.28±0.10頰黏膜及其他 49 0.26±0.10 1.144 0.256吸煙史有47 0.28±0.11無44 0.26±0.09 0.957 0.341飲酒史有41 0.25±0.08無50 0.28±0.11 1.447 0.151

表1 （續(xù)）Table 1 (Continued)

2.3 OSCC組織中miR-378a的表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性

患者隨訪時(shí)間為8～36個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為36個(gè)月。以O(shè)SCC組織中miR-378a表達(dá)量的均值為界，分為低表達(dá)組（n=49）和高表達(dá)組（n=42）。結(jié)果顯示，高表達(dá)組平均生存時(shí)間和3年生存率分別為32.29個(gè)月和73.81%，高于低表達(dá)組的24.80個(gè)月和30.61%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=17.528，P＜0.001），見圖1。

圖1 OSCC組織中miR-378a的表達(dá)與患者預(yù)后相關(guān)性的Kaplan-Meier圖Figure 1 Kaplan-Meier plot of the correlation between the expression of miR-378a in OSCC tissues and patient prognosis

2.4 OSCC患者生存時(shí)間的影響因素

多因素分析結(jié)果（表2）顯示，TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及miR-378a表達(dá)是影響患者生存時(shí)間的風(fēng)險(xiǎn)因素（HR=2.801、0.435、2.383、0.428,P＜0.05）。

表2 影響OSCC患者生存時(shí)間的多因素分析Table 2 Multivariate analysis on the survival time of OSCC patients

3 討論

OSCC作為一種頭頸部高發(fā)的惡性腫瘤，嚴(yán)重影響了患者的生存質(zhì)量，雖然現(xiàn)有的診療手段不斷進(jìn)步，但患者總體預(yù)后依然較差[10-11]，易轉(zhuǎn)移、早期診斷率低仍然是導(dǎo)致患者死亡率不斷升高的主要原因[12]。因此，從分子水平積極尋找與OSCC發(fā)病相關(guān)的機(jī)制及敏感基因靶點(diǎn)，對(duì)患者早期診療及預(yù)后改善意義重大。miRNA作為近年來的研究熱點(diǎn)，已被發(fā)現(xiàn)參與了多種惡性腫瘤的發(fā)生過程[4]，且與腫瘤惡性進(jìn)展及患者預(yù)后密切相關(guān)[13]。miR-378a作為一種miRNA，參與了代謝性疾病的發(fā)生過程[14]，參與了動(dòng)脈粥樣硬化中巨噬細(xì)胞吞噬作用及分化[15]，可影響骨骼肌血管形成[16]。亦有研究[17]指出，miR-378a通過靶向MAPK1/GRB2能增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。同時(shí)，miR-378a通過靶向調(diào)控四跨膜蛋白17能抑制多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖和遷移[8]。本研究結(jié)果顯示，OSCC組織中的miR-378a表達(dá)量低于其在癌旁組織中，說明miR-378a可能參與了OSCC的發(fā)生過程，同時(shí)，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、低分化和發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的OSCC組織中，miR-378a的表達(dá)量顯著降低，進(jìn)一步說明，隨著OSCC惡性程度的增加，miR-378a的表達(dá)量降低，提示miR-378a可能發(fā)揮了抑癌基因的功能，參與了OSCC的進(jìn)展。

研究表明， miR-378a可作為肝細(xì)胞癌[18]和結(jié)直腸癌[19]患者預(yù)后判定的生物學(xué)標(biāo)志物。本研究結(jié)果提示，miR-378a的表達(dá)水平與OSCC患者生存時(shí)間和生存率相關(guān)，高表達(dá)組患者生存時(shí)間和3年生存率高于低表達(dá)組，miR-378a低表達(dá)患者的預(yù)后較差。本研究顯示，miR-378a的表達(dá)水平是影響患者生存時(shí)間的風(fēng)險(xiǎn)因素，進(jìn)一步提示了miR-378a的表達(dá)是影響OSCC患者預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)因素。

綜上所述，miR-378a在OSCC組織中呈低表達(dá)，且與預(yù)后相關(guān)，是患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素，其有望成為OSCC診療及預(yù)后評(píng)估的潛在靶點(diǎn)，但miR-378a的具體作用機(jī)制及可能涉及的信號(hào)通路有待進(jìn)一步明確。