譚真 孫建

【摘要】 目的：探討子宮頸癌病理分級與微血管密度（MVD）、Yes相關(guān)蛋白1（YAP1）的相關(guān)性。方法：選擇2019年3月-2022年6月臨沂市第三人民醫(yī)院收治的子宮頸癌患者53例為對象，常規(guī)采集病灶組織及癌旁組織（距離病灶≥3 cm）。根據(jù)子宮頸癌病理分級分為高分化組、中分化組和低分化組；采用免疫組織化學(xué)法測定不同組織中、不同病理分級下MVD、YAP1陽性率；采用Spearman相關(guān)系數(shù)法對子宮頸癌病理分級與MVD、YAP1陽性率進(jìn)行分析。結(jié)果：子宮頸癌病灶組織中MVD、YAP1陽性率均高于癌旁組織（P<0.05）；免疫組化染色結(jié)果顯示，子宮頸癌病灶組織YAP1表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核；而MVD表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈棕褐色、棕黃色，著色度較高；而癌旁組織中陽性染色細(xì)胞較少，MVD、YAP1著色程度較低；低分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組與中分化組（P<0.05）；中分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組（P<0.05）；Spearman相關(guān)系數(shù)法結(jié)果顯示，子宮頸癌患者病理分級與MVD、YAP1表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.692、-0.452）。結(jié)論：MVD、YAP1在子宮頸癌病灶組織中呈陽性高表達(dá)，其高表達(dá)水平與病理分級存在一定相關(guān)性，能為臨床診療提供新方法。

【關(guān)鍵詞】 微血管密度 Yes相關(guān)蛋白1 子宮頸癌 相關(guān)性 免疫組織化學(xué)法

Study on the Correlation between Pathological Grading， Microvessel Density and Yes Associated Protein 1 in Cervical Cancer/TAN Zhen， SUN Jian. //Medical Innovation of China， 2023， 20（11）： -115

[Abstract] Objective： To investigate the correlation between pathological grading of cervical cancer and microvessel density （MVD）， Yes associated protein 1 （YAP1）. Method： A total of 53 patients with cervical cancer who were admitted to Linyi Third People's Hospital from March 2019 to June 2022 were selected as the subjects， and the focus tissues and adjacent tissues （≥3 cm from the focus） were routinely collected. According to the pathological grading of cervical cancer， it was divided into high differentiation group， medium differentiation group and low differentiation group. The the positive rate of MVD and YAP1 in different tissues and different pathological grades were measured by immunohistochemistry. Spearman correlation coefficient method was used to analyze the correlation between pathological grade of cervical cancer and the positive rate of MVD and YAP1. Result： The positive rate of MVD and YAP1 in cervical cancer lesions were higher than those in adjacent tissues （P<0.05）. Immunohistochemical staining showed that YAP1 was expressed in the cytoplasm and nucleus of cervical cancer lesions; MVD was expressed in the cytoplasm， which was brown and brown yellow， with a high degree of staining. There were few positive staining cells in the adjacent tissues， and the staining degree of MVD and YAP1 was low. The positive rate of MVD and YAP1 in low differentiation group were higher than those in high differentiation group and middle differentiation group （P<0.05）. The positive rate of MVD and YAP1 in middle differentiation group were higher than those in high differentiation group （P<0.05）. Spearman correlation coefficient method showed that the pathological grade of cervical cancer patients was negatively correlated with expression of MVD and YAP1 （rs=-0.692， -0.452）. Conclusion： MVD and YAP1 are highly expressed in cervical cancer lesions， and their high expression level is related to pathological grading， which could provide a new method for clinical diagnosis and treatment.

[Key words] Microvessel density Yes associated protein 1 Cervical cancer Correlation Immunohistochemistry

First-author's address： Linyi Third People's Hospital， Shandong Province， Linyi 276023， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.11.027

子宮頸癌屬于臨床發(fā)病率較高的惡性腫瘤，其發(fā)病多與人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染有關(guān)，亦與多個(gè)性伴侶、過早開始性生活、免疫功能缺陷性疾病等有關(guān)[1]。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明：全球子宮頸癌發(fā)病率為每10萬人中13人患病，多數(shù)患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，隨著病程延長可引起接觸性出血、異常陰道流血等，成為我國女性死亡的重要原因[2]。微血管密度（MVD）能反映腫瘤組織中血管分布，在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用，其表達(dá)水平能評估患者預(yù)后，有望成為子宮頸癌治療新靶點(diǎn)[3-4]。Yes相關(guān)蛋白1（YAP1）屬于富脯氨酸磷蛋白的一種，在正常人體中表達(dá)水平較低或不表達(dá)，而在子宮頸癌患者中將會引起靶基因轉(zhuǎn)錄活性上升，能誘導(dǎo)腫瘤的形成[5]。但是，MVD與YAP1在子宮頸癌患者中的表達(dá)及與病理分級的關(guān)系研究較少[6]。因此，本研究以子宮頸癌患者為對象，探討子宮頸癌病理分級與微血管密度、Yes相關(guān)蛋白1的相關(guān)性，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性選擇2019年3月-2022年6月臨沂市第三人民醫(yī)院收治的子宮頸癌患者53例為對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合子宮頸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，經(jīng)病理組織檢查確診；（2）均完成子宮頸癌病灶組織及癌旁組織采集，并完成相關(guān)蛋白測定；（3）病情穩(wěn)定，能進(jìn)行溝通與交流。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）檢查前行放化療、生物免疫治療；（2）其他部位惡性腫瘤或復(fù)發(fā)病例或妊娠期與哺乳期。根據(jù)子宮頸癌病理分級分為高分化組21例、中分化組18例和低分化組14例。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 方法

1.2.1 儀器與設(shè)備 鼠抗人YAP1單克隆抗體，購自美國Abcam公司；MVD單克隆抗體，購自北京中杉生物技術(shù)有限公司；二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒，購自北京中杉生物技術(shù)有限公司；倒置顯微鏡，購自德國蔡司公司。

1.2.2 檢測方法 采用免疫組織化學(xué)法測定不同組織中、不同病理分級下MVD、YAP1陽性率；取子宮頸癌病灶組織與癌旁組織（距離病灶≥3 cm），常規(guī)制備石蠟組織切片，控制切片厚度為4 μm，經(jīng)石蠟脫水后水化，梯度酒精脫水，熱抗原修復(fù)，并采用濃度為3%過氧化氫連續(xù)完成10 min孵育，加入1︰100濃度MVD、YAP1多克隆抗體一抗，4 ℃下恒溫過夜，滴加過氧化物酶標(biāo)記的MVD、YAP1二抗（控制稀釋比例1︰2 000），連續(xù)完成60 min孵育后向反應(yīng)液中加入DBA染色液顯色，1 min蘇木素復(fù)染后，完成30 s梯度乙醇分化，1 min氨水返藍(lán)，并在顯微鏡染色下觀察并設(shè)定反應(yīng)時(shí)間。蘇木精2 min染色，梯度酒精脫水，中性樹膠封片，并在倒置顯微鏡下觀察不同標(biāo)本中MVD、YAP1表達(dá)情況[8-9]。

1.3 觀察指標(biāo)及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) （1）MVD、YAP1表達(dá)情況及陽性率。每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，并以MVD、YAP1中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。（2）子宮頸癌病理分級與微血管密度、Yes相關(guān)蛋白1陽性率相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 24.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料行字2檢驗(yàn)，采用率（%）表示，計(jì)量資料行F檢驗(yàn)，采用（x±s）表示，子宮頸癌不同病理分級患者M(jìn)VD、YAP1性質(zhì)的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)系數(shù)法分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較 高分化組21例，年齡28～73歲，平均（56.51±3.59）歲；體重指數(shù)（BMI）18～29 kg/m2，平均（22.14±2.42）kg/m2；腫瘤分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期5例，Ⅲ期6例；病理類型：鱗癌17例，腺癌4例。中分化組18例，年齡29～72歲，平均（57.89±3.62）歲；BMI 19～30 kg/m2，平均

（22.64±2.48）kg/m2；腫瘤分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期6例，Ⅲ期5例；病理類型：鱗癌11例，腺癌7例。低分化組14例，年齡27～74歲，平均（56.89±3.62）歲；BMI 17～32 kg/m2，平均（22.37±2.43）kg/m2；腫瘤分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期3例，Ⅲ期5例；病理類型：鱗癌11例，腺癌3例。三組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 子宮頸癌不同組織中MVD、YAP1陽性率比

較 子宮頸癌病灶組織中MVD、YAP1陽性率均高于癌旁組織（P<0.05）；免疫組化染色結(jié)果顯示：子宮頸癌病灶組織YAP1表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核；而MVD表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈棕褐色、棕黃色，著色度較高；而癌旁組織中陽性染色細(xì)胞較少，MVD、YAP1著色程度較低，見表1和圖1。

2.3 子宮頸癌不同病理分級下MVD、YAP1陽性率比較 低分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組與中分化組（P<0.05）；中分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組（P<0.05）。見表2。

2.4 子宮頸癌患者病理分級與MVD、YAP1表達(dá)情況相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)系數(shù)法結(jié)果顯示，子宮頸癌患者病理分級與MVD、YAP1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），見表3。

3 討論

腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是多階段、多步驟的復(fù)雜過程，包括：腫瘤細(xì)胞與其周圍間質(zhì)細(xì)胞黏附性改變，腫瘤微血管生成及癌細(xì)胞通過酶的降解[10-11]，對組織學(xué)屏障造成破壞，尤其是腫瘤微血管生成，能決定腫瘤轉(zhuǎn)移到靶器官或組織后是否繼續(xù)存活的關(guān)鍵因素[12-13]。Zhu等[14]研究表明：微血管新生能促進(jìn)子宮頸癌的侵襲與轉(zhuǎn)移，具有明顯的促進(jìn)作用，且與患者預(yù)后存在緊密的聯(lián)系。本研究中，子宮頸癌病灶組織中MVD、YAP1陽性率均高于癌旁組織（P<0.05）；免疫組化染色結(jié)果表明：子宮頸癌病灶組織YAP1表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核；而MVD表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈棕褐色、棕黃色，著色度較高；而癌旁組織中陽性染色細(xì)胞較少，MVD、YAP1著色程度較低，從本研究結(jié)果看出，MVD、YAP1在子宮頸癌病灶組織中呈高表達(dá)，且免疫組織染色下較為明顯，有望成為子宮頸癌治療新靶點(diǎn)。血管生成是指某些情況下，由于血管生長因子的作用，刺激原已存在于毛細(xì)血管和毛細(xì)血管后靜脈等微小血管內(nèi)皮細(xì)胞，并重新進(jìn)入細(xì)胞增殖周期，降解內(nèi)皮細(xì)胞的基底膜，并通過芽生長方式向周圍組織中形成毛細(xì)血管[15-16]。同時(shí)，腫瘤的生長、增大及腫瘤細(xì)胞數(shù)的增多，與腫瘤局部血管新生有關(guān)[17]。因此，子宮頸腫瘤微血管密度的測定，能反映腫瘤生物學(xué)行為特征，與臨床病理預(yù)后存在緊密的聯(lián)系[18]。

YAP1是近年來發(fā)現(xiàn)Hippo信號通路下游關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄共激活蛋白，在子宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，能促進(jìn)組織的再生、維持干細(xì)胞自我更新、修復(fù)等生物學(xué)功能[19]。賴炳佳等[20]結(jié)果表明：YAP1能直接參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡的調(diào)節(jié)與腫瘤的形成過程，在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)。本研究中，低分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組與中分化組（P<0.05）；中分化組MVD、YAP1陽性率均高于高分化組（P<0.05），從本研究結(jié)果看出，MVD、YAP1在子宮頸癌不同分級中陽性率存在明顯的差異性。分析原因：YAP1可能是一類致癌基因，能直接參與子宮頸癌的發(fā)生與進(jìn)展過程。同時(shí)，YAP1為Hippo通路中心信號分子，YAP1過表達(dá)時(shí)，該通路下游靶信號被激活，YAP1發(fā)生去磷酸化反應(yīng)、活性增加，細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移和聚集，與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合并促進(jìn)結(jié)締組織的生長，從而誘導(dǎo)子宮頸癌相關(guān)基因表達(dá)異常。本研究中，相關(guān)性分析結(jié)果表明：子宮頸癌患者病理分級與MVD、YAP1陽性率具有一定相關(guān)性（P<0.05），從本研究結(jié)果看出，子宮頸癌病理分級與MVD、YAP1存在緊密的聯(lián)系，加強(qiáng)患者M(jìn)VD、YAP1測定，能指導(dǎo)臨床診療。

綜上所述，MVD、YAP1在子宮頸癌病灶組織中呈陽性高表達(dá)，且與病理分級存在一定相關(guān)性，能為臨床診療提供新方法。

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（收稿日期：2022-11-02） （本文編輯：何玉勤）