趙棟皓,原 夢(mèng),馬凱騰,段 卓,祝一鑫,唐 芳,韓克光,霍乃蕊

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,太谷 030801)

鎘(cadmium,Cd)是一種污染來源廣泛且毒性很強(qiáng)的重金屬元素,環(huán)境鎘極易被植物吸收而進(jìn)入食物鏈,并且在動(dòng)物體內(nèi)有很強(qiáng)的蓄積能力[1],痕量鎘即可危害畜禽健康并降低生產(chǎn)性能,例如降低豬的采食量,影響胚胎發(fā)育,導(dǎo)致畸胎和死胎數(shù)增加[2];降低魚類的生長速度和繁殖率[3];降低蛋雞的產(chǎn)蛋率和蛋品質(zhì)[4]。FAO和WHO已將鎘確立為第三種先行檢測(cè)的食品污染物,鎘殘留超標(biāo)是造成我國食品不合格的一個(gè)重要因素,市售動(dòng)物性食品中,Cd超標(biāo)率最高的為畜禽腎(36.36%)和肉類(33.33%)[5]。鎘在生物體內(nèi)的半衰期長達(dá)30年,且遷移率高。肝作為鎘蓄積的一種主要靶器官[6],過量鎘離子可使肝產(chǎn)生強(qiáng)烈的脂質(zhì)過氧化反應(yīng),干擾凋亡基因的表達(dá)[7],抑制巰基酶活性,使消化系統(tǒng)受損,影響消化和代謝[8]。經(jīng)食物鏈進(jìn)入人體的鎘還會(huì)降低機(jī)體免疫力,引發(fā)骨質(zhì)疏松、腎小管功能障礙以及高血壓等一系列疾病[9]。Cd已被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)列為I類致癌物[10],聯(lián)合國環(huán)境規(guī)劃署也將鎘列為12種具有全球意義的危險(xiǎn)化學(xué)物之首。為了抑制和消除鎘在動(dòng)物體內(nèi)的蓄積,人們嘗試使用二巰基丙醇(BAL)、二乙基二硫代氨基甲酸(DDTC)和乙二胺四乙酸(EDTA)等重金屬螯合劑,但其安全性不足,例如EDTA會(huì)加重腎損傷,DDTC會(huì)使鎘在腦內(nèi)重新分布[11],因此,亟需尋找更加安全有效的鎘螯合劑。研究表明,膠原肽對(duì)鈣、鐵、鋅等金屬離子具有螯合作用[12-14],不僅安全性高,并且還表現(xiàn)出多種生物學(xué)活性,例如豬皮膠原肽可有效清除自由基[15],豬骨膠原肽可增強(qiáng)成骨細(xì)胞活性,改善松質(zhì)骨[16],牛骨膠原肽可改善免疫功能[17]。本研究中的羊骨膠原肽(sheep bone collagen peptide,SBCP)是酶解羊骨粉制備的小分子多肽,含90.78%分子量<1 000 u的短肽,含6.89%羥脯氨酸。課題組前期研究結(jié)果表明,羊骨膠原肽可與Ca2+螯合[18],促進(jìn)鈣的吸收,調(diào)節(jié)骨代謝平衡,改善骨質(zhì)疏松[19],并可提高動(dòng)物的免疫力[20]和抗氧化性能[21]。本研究擬探究SBCP在腸道和血液環(huán)境中對(duì)鎘的螯合作用,考察其對(duì)鎘蓄積的清除效果,同時(shí)探究SBCP對(duì)鎘致肝損傷的干預(yù)作用及對(duì)線粒體凋亡信號(hào)通路的影響,揭示其可能的作用機(jī)制,為動(dòng)物慢性鎘蓄積提供安全有效的防治新途徑,從而保障動(dòng)物健康和動(dòng)物性食品安全。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

SBCP購自內(nèi)蒙古錫盟肽好生物制品責(zé)任有限公司;氯化鎘(CdCl2)、溴化鉀(KBr)等常規(guī)試劑購自麥克林試劑有限公司;谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒購自南京建成生物工程研究所;IL-2、IL-8、TNF-α和IFN-γ檢測(cè)試劑盒及qRT-PCR相關(guān)試劑購自北京賽文創(chuàng)新生物科技有限公司。主要儀器有全自動(dòng)血液生化分析儀(SK9000,盛信康),傅里葉紅外光譜儀(FTIR-650,德國BRUKER),酶標(biāo)儀(SpectraMax M4,美國MolecularDevices),冷凍干燥機(jī)(GOID-SIM,美國SIM)等。

1.2 動(dòng)物分組及處理

海蘭褐雛雞(1日齡)由山西省晉中市康牧禽業(yè)提供,分籠飼養(yǎng)于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物研究中心[SYXK(晉)2021-0003],溫度維持在(27±2)℃,相對(duì)濕度保持在60%～65%,自由采食和飲水,適應(yīng)性飼喂1周后隨機(jī)分為對(duì)照組(Control)、模型組(Cd)、SBCP組和SBCP干預(yù)組(Cd+SBCP),每組10只。對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng),模型組飼喂添加140 mg·kg-1CdCl2的含鎘飼料,SBCP組每天灌胃3 g·kg-1的肽,Cd+SBCP組飼喂與Cd組相同的含鎘飼料并灌胃與SBCP組相同的等劑量肽,42日齡最后一次給藥結(jié)束后,停飼12 h,心采血,脫頸處死,收集肝組織樣品,每一份樣品中一部分固定液固定,一部分凍存于-80 ℃?zhèn)溆?。以上所有操作遵守山西農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)要求(IACCU審查號(hào):SXAU-EAW-2020SD0201)。

1.3 石蠟切片制備與觀察

肝組織經(jīng)4%多聚甲醛固定48 h后修剪成約3 mm3厚的組織塊,二甲苯浸漬透明后包埋于石蠟中,切片厚度5 μm,43 ℃去離子水中展片,44 ℃烤片,干燥后HE染色,封片觀察。

1.4 鎘含量的測(cè)定

分別剪取約0.3 g肝和胸肌組織于有10 mL HNO3的硝化管中,雙蒸水稀釋至50 mL后送至上海微譜化工技術(shù)服務(wù)有限公司使用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS)測(cè)定Cd含量,操作條件見表1。

表1 電感耦合等離子體質(zhì)譜儀操作條件Table 1 ICP-MS operating conditions

1.5 指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 肝組織抗氧化指標(biāo) 制備10%肝組織勻漿后按照試劑盒說明書測(cè)定T-SOD、GSH-Px活力以及MDA含量。

1.5.2 血清生化指標(biāo) 血液生化分析儀檢測(cè)血清總蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、白蛋白(ALB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)等肝功能相關(guān)指標(biāo)。

1.5.3 血清炎癥因子水平 按照試劑盒說明對(duì)雞血清中IL-2、IL-8、TNF-α、IFN-γ水平進(jìn)行測(cè)定。

1.6 qRT-PCR

Trizol提取雞肝組織總RNA,選擇OD260 nm/OD280 nm值為1.8～2.0的總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。對(duì)應(yīng)引物(表2)由上海生工生物工程有限公司合成。qRT-PCR擴(kuò)增體系:SYBR?Premix ExTaqTMⅡ(2×)5 μL,ROX Reference Dye Ⅱ(50×)0.2 μL,上下游引物(10 μmol·L-1)各0.3 μL,cDNA 1 μL,ddH2O補(bǔ)至10 μL。反應(yīng)條件:預(yù)變性和變性溫度為95 ℃,時(shí)間分別為10 min和15 s,退火(60 ℃,30 s),延伸(72 ℃,10 s),循環(huán)數(shù)為40。反應(yīng)結(jié)束后,采用2-ΔΔCt法,計(jì)算相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平。

表2 qRT-PCR引物序列Table 2 qRT-PCR primer sequences

1.7 肽鎘螯合物鑒定及穩(wěn)定性研究

1.7.1 肽鎘螯合物制備及螯合率測(cè)定 參照羊骨膠原肽鈣螯合物的制備流程[17],在雞腸道溫度條件下制備肽鎘螯合物,1.59 g SBCP溶解于10 mL人工無酶模擬腸液中,加入0.8 g CdCl2,40 ℃水浴螯合,加入8倍體積乙醇沉淀3 h,冷凍干燥后得到肽鎘螯合物粉末。取醇沉淀之后的反應(yīng)液5 mL,微濾后采用EDTA滴定法測(cè)定鎘含量[23],按式(1)計(jì)算Cd螯合率。

A=(CdT-CdF)/CdT×100%

(1)

式中:A為Cd螯合率;CdF表示未發(fā)生螯合反應(yīng)的游離鎘含量,mg;CdT表示5 mL反應(yīng)液中加入鎘的總質(zhì)量,mg。

1.7.2 螯合物鑒定 精確稱取2 mg羊骨膠原肽粉和經(jīng)冷凍干燥之后的肽鎘螯合產(chǎn)物,分別與KBr粉末在研缽中研磨混合,裝入模具壓片機(jī)內(nèi)壓制成片,傅里葉紅外光譜儀測(cè)試:掃描波數(shù)4 000～400 cm-1,掃描次數(shù)為32,分辨率為4 cm-1。

1.7.3 肽鎘螯合物穩(wěn)定性分析 將肽鎘螯合物凍干粉溶于去離子水,使其終濃度為2 mg·mL-1,分別于20、30、40、50、60、70 ℃保溫1 h,測(cè)定溶液中的游離鎘含量;用稀鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH,40 ℃恒溫加熱1 h,測(cè)定不同pH條件(pH2～8)下溶液中的游離鎘含量。肽鎘螯合物的穩(wěn)定性用鎘保留率來表示[24],式(2)。

B=(CdU-CdM)/CdM×100%

(2)

式中:B為Cd保留率;CdU表示螯合物中鎘總量,mg;CdM表示溶液中游離鎘的總質(zhì)量,mg。

1.8 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié) 果

2.1 雞生長性能變化

在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi),與對(duì)照組相比,Cd組雞精神沉郁,羽毛蓬亂,形體瘦小,多呈臥姿;SBCP組精神狀態(tài)最佳,形體最大;肽干預(yù)組精神狀態(tài)介于Cd組和SBCP組之間。如表3所示,SBCP組平均日采食量和日增重顯著高于對(duì)照組(P<0.05),說明SBCP具有促生長作用。與對(duì)照組相比,Cd組日采食量和日增重顯著下降(P<0.05),而肽干預(yù)組則顯著高于Cd組,并且與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。各組料重比SBCP組與對(duì)照組差異不顯著,Cd組顯著高于對(duì)照組,肽干預(yù)組與模型組雖差異不顯著(P>0.05),但呈下降趨勢(shì)。

表3 各試驗(yàn)組雞生長性能指標(biāo)Table 3 Performance indexes of chickens in each experimental group

2.2 雞肝組織和胸肌鎘含量變化

圖1中ICP-MS分析結(jié)果表明,對(duì)照組和SBCP組肝和胸肌組織中均未檢出鎘,Cd組中肝鎘含量達(dá)到412.57 μg·kg-1,胸肌鎘含量達(dá)到129.47 μg·kg-1,Cd攻毒組經(jīng)SBCP干預(yù)后,肝和胸肌鎘含量分別下降至216.06和49.68 μg·kg-1,顯著低于Cd組(P<0.05),且均低于中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)(GB 2762—2017)[25]中規(guī)定的鎘殘留限量0.5 mg·kg-1(肝)和0.1 mg·kg-1(肌肉)。

相同組織數(shù)據(jù),所標(biāo)字母相異表示差異顯著(P<0.05),所標(biāo)字母相同表示差異不顯著(P>0.05),下同Between the same tissues, different letters means significant difference between the treatments(P<0.05), same letter means not significant difference between treatments(P>0.05),the same as below圖1 各組雞肝和胸肌組織鎘含量Fig.1 Cadmium content in liver and pectoral muscle of chickens in each group

2.3 肝組織形態(tài)學(xué)變化

圖2中,對(duì)照組肝索排列規(guī)則,肝小葉形態(tài)完全,間質(zhì)無出血現(xiàn)象。SBCP組與對(duì)照組相比無明顯病變。Cd組肝細(xì)胞出現(xiàn)固縮壞死,顆粒變性現(xiàn)象嚴(yán)重,細(xì)胞間質(zhì)增寬且有淋巴細(xì)胞浸潤。與Cd組相比,Cd+SBCP組壞死細(xì)胞顯著減少,細(xì)胞間質(zhì)恢復(fù)到正常寬度,但仍有淋巴細(xì)胞浸潤和顆粒變性現(xiàn)象。

.核固縮壞死;△.顆粒變性;.淋巴細(xì)胞浸潤.Pyknosis and necrosis of the nucleus; △.Granular degeneration; .Infiltration of lymphocytes圖2 各組雞肝組織病理切片(100×和400×)Fig.2 Histopathological sections from different groups (100× and 400×)

2.4 肝抗氧化能力

MDA可直接體現(xiàn)體內(nèi)氧自由基和過氧化的水平[26],T-SOD和GSH-Px可有效清除體內(nèi)過量活性氧[27]。表4中的數(shù)據(jù)顯示,與對(duì)照組相比,Cd組肝組織的T-SOD、GSH-Px活力顯著下降(P<0.05),MDA含量則顯著增加(P<0.05),說明Cd中毒使肝的抗氧化能力顯著下降。SBCP組上述各指標(biāo)與對(duì)照組相比抗氧化酶活力和MDA水平雖然差異不顯著(P>0.05),但分別有上升和下降趨勢(shì),并且肽干預(yù)組(Cd+SBCP)中的T-SOD、GSH-Px活力顯著高于Cd組(P<0.05),且MDA含量顯著減少(P<0.05)。

表4 各試驗(yàn)組雞肝組織抗氧化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果Table 4 Results of antioxidant indices of tested chicken liver

2.5 肝功能相關(guān)血清生化指標(biāo)

血清AST和ALT活力是評(píng)價(jià)肝細(xì)胞完整性的2個(gè)常用參數(shù)[28],由圖3可見,Cd組血清AST、ALT活力顯著高于對(duì)照組(P<0.05),說明Cd組雞的肝細(xì)胞膜受損,導(dǎo)致這兩種轉(zhuǎn)氨酶進(jìn)入血液。TP和ALB是反映肝蛋白合成能力的常用指標(biāo),鎘中毒模型組(Cd組)中TP、ALB和GLB含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05),說明Cd蓄積使肝的蛋白合成能力顯著降低,白球比下降至1以下,說明肝損傷嚴(yán)重,與小鼠酒精性肝中毒一致[29]。SBCP干預(yù)后,Cd+SBCP組兩種轉(zhuǎn)氨酶活力顯著下降(P<0.05),TP、ALB和GLB含量顯著上升(P<0.05),白球比回復(fù)至1以上,表明SBCP可明顯改善Cd中毒雞只的肝損傷狀況。

圖3 各組雞肝功能相關(guān)血清生化指標(biāo)Fig.3 Serum liver-associated biochemical indices of different chicken groups

2.6 血清炎癥因子水平變化

由圖4可以看出,與對(duì)照組相比,Cd組血清中IL-2、IL-8、TNF-α、IFN-γ水平顯著上升(P<0.05),SBCP組與對(duì)照組差異不顯著。與Cd組相比,Cd+SBCP組各炎癥因子含量顯著下降(P<0.05)。

圖4 各組雞血清炎癥因子含量Fig.4 Serum inflammatory factor content of chickens from different groups

2.7 肝線粒體凋亡基因mRNA表達(dá)水平變化

細(xì)胞凋亡過程中有許多蛋白酶家族參與,其中可改變線粒體外膜通透性的bcl-2蛋白家族負(fù)責(zé)凋亡途徑第一步[30]。bax是一種與bcl-2同源但功能相反的蛋白質(zhì),bax同源二聚體有強(qiáng)大的促凋亡作用,而與bcl-2結(jié)合生成的異源二聚體卻可抑制凋亡。半胱天冬氨酸蛋白酶家族(caspases)中的caspase-3和caspase-9是參與線粒體凋亡途徑的主要蛋白。

圖5中,Cd組肝組織中的促凋亡基因cytC、caspase-3、caspase-9和bax的mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組,而抗凋亡基因bcl-2的mRNA表達(dá)水平以及bcl-2/bax的比值顯著低于對(duì)照組(P<0.05),說明Cd在肝的蓄積可促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡。SBCP組各基因表達(dá)水平與對(duì)照組相比無差異顯著性。與Cd組相比,Cd+SBCP組各促凋亡基因除caspase-3外表達(dá)水平顯著下降(P<0.05),凋亡抑制基因bcl-2的mRNA表達(dá)水平,以及bcl-2/bax比值顯著上升(P<0.05),說明SBCP可通過線粒體途徑抑制由鎘中毒所導(dǎo)致的肝細(xì)胞凋亡。

圖5 各組雞肝線粒體凋亡基因的表達(dá)水平Fig.5 Expression of mitochondrial apoptosis genes in liver of chickens from different groups

2.8 紅外光譜分析

圖6 羊骨膠原肽與肽鎘螯合物的紅外光譜圖Fig.6 Infrared spectra of sheep ossein polypeptide and its cadmium-chelated form

2.9 羊骨膠原肽對(duì)鎘的螯合率以及肽鎘螯合物穩(wěn)定性分析

由圖7可知,在人工模擬無酶腸液中,SBCP和Cd反應(yīng)60 min時(shí),螯合率達(dá)到峰值(47.46%),食物在雞的胃腸道停留時(shí)間為3～6 h,說明SBCP有足夠的時(shí)間與Cd在腸道進(jìn)行螯合,且血液pH(7.35)與腸道pH(7.5)接近,說明肽和鎘被吸收入血后,在血液中也可能發(fā)生螯合,由經(jīng)腎排出。在不同的溫度條件下,肽鎘螯合物的鎘保留率仍在80%左右,說明螯合物受溫度影響不大,在較寬溫度范圍內(nèi)穩(wěn)定,不同pH下的結(jié)果表明肽鎘螯合物在酸性條件下的穩(wěn)定性較差,在中性和偏堿性的環(huán)境下較穩(wěn)定。

3 討 論

動(dòng)物飼料鎘是我國畜禽鎘暴露的主要來源,鎘在動(dòng)物體內(nèi)具有很強(qiáng)的蓄積能力,通過抑制巰基酶活性對(duì)機(jī)體造成傷害,使包括肝在內(nèi)的消化系統(tǒng)受損,降低機(jī)體的免疫功能[7],干擾骨代謝和成骨相關(guān)基因的表達(dá),對(duì)骨組織造成損傷[32],SBCP不僅可以通過BMP-2信號(hào)通路正向調(diào)控骨代謝,提高骨密度并改善骨微觀結(jié)構(gòu)[33],本研究結(jié)果表明SBCP還對(duì)鎘造成的肝功能損傷、細(xì)胞完整性及組織結(jié)構(gòu)破壞也有修復(fù)作用,并且SBCP還可緩解鎘中毒對(duì)雞生長發(fā)育的抑制,增加日增重和飼料利用率。

鎘離子和鈣離子同為二價(jià)陽離子,并且半徑相近[34],紅外圖譜分析結(jié)果表明,肽鎘螯合物與肽鈣螯合物的螯合位點(diǎn)都以氨基端和羧基端居多[17]。螯合物穩(wěn)定性分析結(jié)果表明,經(jīng)螯合后的鎘在腸道和血液中不再以離子形式存在,而以SBCP-Cd螯合物形式穩(wěn)定存在,從而解除了游離鎘離子對(duì)機(jī)體巰基酶的抑制作用,進(jìn)而對(duì)鎘蓄積引發(fā)的肝組織損傷和蛋白合成能力減弱起到改善效果。SBCP干預(yù)后肝和肌肉中的鎘含量顯著下降,說明鎘經(jīng)螯合后降低了其在靶器官的蓄積能力,螯合形式的鎘更易被機(jī)體排出。本研究使用的SBCP是經(jīng)過風(fēng)味蛋白酶和堿性蛋白酶等復(fù)合酶在最優(yōu)化工藝條件下制備的分子量<1 000 u的小分子多肽混合物,在體內(nèi)即使是消化道內(nèi)被進(jìn)一步降解的概率極低,并且諸多研究表明肽在體內(nèi)比游離氨基酸更容易被腸道吸收進(jìn)入血液循環(huán),隨血流到達(dá)鎘蓄積部位后與鎘螯合形成產(chǎn)物,阻止了鎘與巰基酶的結(jié)合,減輕鎘致機(jī)體損傷。

鎘毒性作用的另一個(gè)重要機(jī)制是促進(jìn)羥自由基和超氧陰離子的產(chǎn)生,導(dǎo)致氧化還原失衡[35]。本研究表明鎘蓄積使肝MDA水平上升,抗氧化能力下降,產(chǎn)生的大量自由基造成氧化應(yīng)激,造成肝組織損傷。體內(nèi)外試驗(yàn)結(jié)果表明,羊骨膠原肽具有抗氧化能力[21],本研究再次證實(shí)SBCP對(duì)鎘中毒雞干預(yù)后可顯著提升其抗氧化能力,從而減輕了鎘對(duì)肝結(jié)構(gòu)和功能的損傷。

過量的氧化應(yīng)激會(huì)引發(fā)持續(xù)性的炎癥反應(yīng)[36],因此炎癥反應(yīng)也是鎘損傷的一個(gè)重要表現(xiàn),TNF-α、IL-2、IL-8、IFN-γ等這些促炎因子的過量產(chǎn)生,會(huì)引起肝微環(huán)境的改變,導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷甚至凋亡。SBCP干預(yù)可顯著降低Cd中毒雞體內(nèi)上述炎癥因子的表達(dá)水平,說明SBCP具有抗炎能力,課題組前期體外研究結(jié)果也表明,SBCP在炎癥初期具有促炎作用,炎癥后期具有消炎作用[19]。

鎘可以通過多種方式導(dǎo)致過量細(xì)胞凋亡,從而造成組織損傷[37]。細(xì)胞凋亡通常包含死亡受體途徑,線粒體途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑,鎘中毒時(shí)產(chǎn)生的大量自由基會(huì)破壞線粒體的膜結(jié)構(gòu),使大量的cyt C釋放到胞漿中,被釋放的cyt C首先激活caspases-3,活化后的caspases-3繼而活化caspases-9,最終激活線粒體凋亡途徑[38]。bcl-2家族中的促凋亡基因和抗凋亡基因相互作用調(diào)節(jié)凋亡的發(fā)生[39]。過量的促炎介質(zhì)也可通過激活半胱氨酸蛋白酶家族來觸發(fā)細(xì)胞凋亡,例如TNF-α可激活caspase-3,被激活的caspase-3會(huì)切割各種細(xì)胞底物從而觸發(fā)細(xì)胞凋亡。研究表明鎘攻毒后雞的cytC、caspase-3、caspase-9、bax等促凋亡基因表達(dá)水平顯著增加[40],與本研究結(jié)果一致,并且SBCP干預(yù)降低了上述促凋亡基因的mRNA表達(dá)水平,增加了抑凋亡基因bcl-2的mRNA表達(dá)水平,從而緩解了鎘中毒造成的肝細(xì)胞線粒體途徑凋亡過程。

4 結(jié) 論

羊骨膠原肽(SBCP)對(duì)鎘離子具有很好的螯合效果,SBCP干預(yù)可降低鎘在機(jī)體的蓄積能力,提高肝抗氧化能力和蛋白合成能力、減少血清炎癥因子產(chǎn)生,抑制肝細(xì)胞線粒體凋亡,改善肝組織微觀結(jié)構(gòu),該研究結(jié)果為安全有效的重金屬螯合劑研發(fā),畜禽肝保護(hù),減少動(dòng)物性食品中的重金屬殘留和提高食品安全性提供了可借鑒的方法。