谷 崢 王雅琪 崔志超 馬 杰 陳晶晶 常 猛

(唐山市人民醫(yī)院乳腺一科,河北省唐山市 063000)

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一。因乳腺癌具有異質(zhì)性,不同患者的治療效果往往差別較大,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,臨床上根據(jù)乳腺癌分子分型制訂的個體化新輔助化療方案在一定程度上改善了患者的治療效果,并提高了預(yù)后評估的準確率[1-2]。新輔助化療是目前局部晚期乳腺癌的標準治療方式,具有縮小腫瘤體積、增加手術(shù)機會、抑制腫瘤微轉(zhuǎn)移等作用[3]。研究顯示,接受新輔助化療的乳腺癌患者的病理完全緩解(pathological complete response,pCR)率僅為10%～30%[4]。因此,尋找能夠預(yù)測新輔助化療效果的指標對獲得更高的pCR率具有重要意義。膠原蛋白是細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的關(guān)鍵成分,同時也是多種信號通路的調(diào)節(jié)因子。Ⅺ型膠原蛋白α1鏈(collagen type Ⅺ alpha 1 chain,COL11A1)與腫瘤細胞的侵襲性、化學(xué)抗性及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),COL11A1有望成為預(yù)測乳腺癌患者復(fù)發(fā)的標志物[5]。本研究探討COL11A1表達情況與乳腺癌患者病情程度、新輔助化療效果及預(yù)后的關(guān)系,以期為乳腺癌患者個體化新輔助化療方案的選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年1月至2016年12月在唐山市人民醫(yī)院診治的135例乳腺癌患者作為研究對象,患者均為女性,年齡29～71(48.80±15.39)歲。納入標準:(1)在新輔助化療前對患者進行組織穿刺活檢,并經(jīng)組織病理學(xué)和免疫組化檢查證實為乳腺癌;(2)臨床分期(TNM分期)[6]為Ⅱ/Ⅲ期;(3)均按《NCCN乳腺癌篩查和診斷臨床實踐指南》[7]進行診治,并接受新輔助化療治療;(4)治療前資料如常規(guī)實驗檢查結(jié)果、影像學(xué)檢查結(jié)果、病理檢查結(jié)果等完整。排除標準:(1)出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移者;(2)存在心、肝、腎功能障礙者;(3)既往有腫瘤治療史者;(4)合并其他惡性腫瘤者[8]。所有患者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。本研究經(jīng)唐山市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 新輔助化療方法:所有患者均接受新輔助化療方案[9]治療,21 d為1個周期。其中,82例患者接受氟尿嘧啶+表柔比星+環(huán)磷酰胺序貫多西他賽方案治療,53例患者接受多西他賽+表柔比星+環(huán)磷酰胺方案治療,化療過程中給予患者其他對癥治療?；颊呓邮?～8個化療周期,中位化療周期為3個周期。所有患者均順利完成化療,符合手術(shù)治療指征[10],于化療結(jié)束后2～4周內(nèi)行乳腺癌根治性手術(shù)。

1.2.2 樣本采集:于患者進行新輔助化療前,在超聲引導(dǎo)下采用空心針活檢槍(Bard Peripheral Vascular,Inc.,型號:14 G)對乳腺癌患者進行乳腺腫塊穿刺術(shù)。取3～5條組織,將其置于10%中性福爾馬林固定液,用于免疫組化檢測[11]。

1.2.3 免疫組化檢測:用石蠟包埋上述組織標本后制備成4 μm厚的切片,脫蠟、水化后進行抗原修復(fù),用PBS沖洗3次,3 min/次,滴加COL11A1兔抗人單克隆抗體、雌激素受體(estrogen receptor,ER)兔抗人單克隆抗體、孕激素受體(progesterone receptor,PR)兔抗人單克隆抗體、人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)兔抗人單克隆抗體、增殖細胞核抗原Ki-67兔抗人單克隆抗體(Abcam公司,批號:ab270946、ab108398、ab32085、ab134182、ab16667;稀釋比例均為1 ∶200),4 ℃孵育過夜,滴加山羊抗兔IgG二抗(Abcam公司,批號:ab150080;稀釋比例為1 ∶500),37 ℃孵育30 min,經(jīng)DAB顯色、蘇木素復(fù)染、梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片后,置于光學(xué)顯微鏡(深圳市華顯光學(xué)儀器有限公司,型號:SMZ-0745-500U)下觀察。

1.2.4 免疫組化結(jié)果判定:根據(jù)陽性細胞率、染色強度進行免疫組化評分,免疫組化評分為上述兩項評分之和。其中,無陽性細胞、陽性細胞率<10%、陽性細胞率10%～50%、陽性細胞率51%～80%、陽性細胞率>80%分別記0分、1分、2分、3分、4分;無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記0分、1分、2分、3分。COL11A1主要表達于細胞核,免疫組化評分<3分為表達陰性,≥3分為表達陽性[12]。ER、PR表達于細胞核,陽性細胞率<10%為表達陰性,≥10%為表達陽性[13]。HER2表達于細胞膜,免疫組化評分≤1分為表達陰性,≥3分為表達陽性;當(dāng)評分為2分時,進行熒光原位雜交檢測,拷貝數(shù)擴增>2.2為表達陽性,<2.2則為表達陰性[14]。Ki-67表達于細胞核,陽性細胞率≤14%為表達陰性,>14%為表達陽性[15]。

1.2.5 療效評價標準:在患者進行手術(shù)前對化療效果進行評價。完全緩解指病灶完全消失;部分緩解指病灶直徑減少>50%;疾病穩(wěn)定:病灶直徑減少≤50%或增加≤25%;疾病進展:病灶直徑增加>25%或有新病灶出現(xiàn)[16]?？傆行?(完全緩解例數(shù)+部分緩解例數(shù))/總例數(shù)×100%。根據(jù)術(shù)后病理結(jié)果進行pCR評估,pCR的定義[17]為經(jīng)治療后原發(fā)腫瘤及腋窩淋巴結(jié)均無癌細胞殘留。

1.3 隨訪 首次手術(shù)治療后,通過電話、復(fù)診等方式對患者進行為期5年的隨訪。隨訪內(nèi)容:(1)是否繼續(xù)接受分子靶向治療、內(nèi)分泌治療等;(2)有無定期復(fù)查及當(dāng)前生存狀況;(3)如患者死亡,原因是否與乳腺癌相關(guān)。無復(fù)發(fā)生存期定義為首次手術(shù)治療至首次出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)、遠處轉(zhuǎn)移、死亡或隨訪結(jié)束的時間[11]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 24.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示,組間比較采用χ2檢驗;采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線,采用log-rank檢驗比較組間無復(fù)發(fā)生存率。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 新輔助化療前乳腺癌患者的COL11A1表達情況 135例乳腺癌患者中,COL11A1表達陽性92例,COL11A1表達陰性43例。見圖1。

圖1 新輔助化療前乳腺癌患者的COL11A1表達情況(免疫組化染色,×200)

2.2 COL11A1表達情況與乳腺癌患者分子分型的關(guān)系 COL11A1陽性患者的ER表達陽性率、HER2表達陽性率、Ki-67表達陽性率均高于COL11A1陰性患者(均P<0.05),而兩者的PR表達陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 COL11A1表達情況與乳腺癌患者分子分型的關(guān)系[n(%)]

2.3 COL11A1表達情況與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 COL11A1陽性患者的TNM Ⅲ期比例、腫瘤直徑>5 cm比例及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率均高于COL11A1陰性患者(均P<0.05),而兩者的年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.4 COL11A1表達情況與乳腺癌患者的新輔助化療總有效率和pCR率的關(guān)系 COL11A1陽性患者的新輔助化療總有效率和pCR率均低于COL11A1陰性患者(均P<0.05)。見表3。

表3 COL11A1表達情況與乳腺癌患者新輔助化療情況總有效率和pCR率的關(guān)系[n(%)]

2.5 COL11A1表達情況與乳腺癌患者無復(fù)發(fā)生存率的關(guān)系 135乳腺癌患者的總體無復(fù)發(fā)生存率為71.11%。COL11A1陽性患者總體無復(fù)發(fā)生存率為59.46%,低于COL11A1陰性患者的85.25%(χ2=10.919,P=0.001),見圖2。

圖2 不同COL11A1表達情況的乳腺癌患者無復(fù)發(fā)生存曲線的比較

3 討 論

乳腺癌是常見的女性惡性腫瘤之一,也是女性癌癥死亡的第四大原因[18]。近年來,乳腺癌的早期檢測和早期干預(yù)已極大地提高了患者的總生存率,但中晚期乳腺癌患者的預(yù)后仍欠理想[19]。ER、HER2及Ki-67的表達情況可決定乳腺癌的分子分型,且可作為制訂治療方案及評估預(yù)后的依據(jù),但乳腺癌具有高度異質(zhì)性,分子分型相同的患者的預(yù)后也不盡相同[20]。因此,尋找能夠評估乳腺癌患者治療效果及預(yù)后的新型標志物具有重要意義。

ECM在腫瘤的進展中發(fā)揮重要作用,膠原蛋白是ECM中含量最豐富的成分,不僅參與腫瘤進展過程,還是腫瘤細胞化學(xué)抗性的重要影響因素[21]。Ⅺ型膠原蛋白是一種較小的纖維狀膠原蛋白,其α1鏈即COL11A1在多種惡性腫瘤(如卵巢癌、乳腺癌、非小細胞肺癌、甲狀腺癌等)中表達上調(diào),與腫瘤的血管生成、侵襲性、耐藥性有關(guān)[22]。COL11A1在三陰性乳腺癌中參與促纖維增生反應(yīng),其高表達與惡性腫瘤的強侵襲性及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[23]。此外,在浸潤性乳腺癌中,COL11A1可能在已形成的轉(zhuǎn)移灶中呈高表達,這是因為正在經(jīng)歷上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的腫瘤性上皮細胞和具有高轉(zhuǎn)移能力的癌衍生細胞均有可能表達COL11A1[24]。研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌細胞的COL11A1 mRNA及蛋白表達均上調(diào),抑制其表達可以抑制乳腺癌細胞的增殖及促進其凋亡[25]。還有研究發(fā)現(xiàn),COL11A1的高表達與乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移有關(guān),可作為預(yù)測乳腺癌復(fù)發(fā)的標志物,檢測其表達水平可能有助于個體化新輔助化療方案的選擇[26]。本研究結(jié)果顯示,COL11A1陽性患者的TNMⅢ期比例、腫瘤直徑>5 cm比例、腋窩淋巴轉(zhuǎn)移率、ER表達陽性率、HER2表達陽性率、Ki-67表達陽性率均高于COL11A1陰性患者(均P<0.05)。TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與乳腺癌患者病情嚴重程度有關(guān),ER、HER2、Ki-67表達陽性則提示乳腺癌的侵襲性高,易復(fù)發(fā),預(yù)后差[19]。由此推測COL11A1可能通過影響ER、HER2、Ki-67表達,參與乳腺癌的進展,從而影響患者預(yù)后。

新輔助化療常用于治療乳腺癌局部晚期患者,新輔助化療后獲得pCR的患者的無病生存期及總生存期均優(yōu)于未獲得pCR的患者,因此預(yù)測新輔助化療的效果已成為臨床研究重點[25]。在本研究中,COL11A1陽性患者的新輔助化療總有效率和pCR率、總體無復(fù)發(fā)生存率均低于COL11A1陰性患者(均P<0.05),提示COL11A1陽性表達的乳腺癌患者新輔助化療的效果欠佳,預(yù)后更差。這說明COL11A1的表達情況與乳腺癌患者的新輔助化療效果及預(yù)后有關(guān),其有望成為評估乳腺癌患者新輔助化療效果及預(yù)后的指標。

綜上所述,COL11A1的表達情況與乳腺癌患者的病情程度、新輔助化療效果及預(yù)后均有關(guān),COL11A1陽性患者的病情更重,新輔助化療效果和預(yù)后更差。COL11A1有望成為乳腺癌患者新輔助化療效果及預(yù)后的預(yù)測指標。