李玉婷?楊放?劉濤?雷陽(yáng)?譚瑤琳

摘要：目的 對(duì)藿香正氣系列制劑的內(nèi)在質(zhì)量差異進(jìn)行評(píng)價(jià)，為其臨床應(yīng)用提供參考。方法 利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對(duì)接技術(shù)對(duì)藿香正氣系列制劑針對(duì)胃腸感染性腹瀉的活性成分進(jìn)行篩選，以中度值較大的活性成分漢黃芩素以及藿香正氣系列制劑中的指標(biāo)性成分和厚樸酚、厚樸酚等3種活性成分為度量指標(biāo)，采用HPLC法，在檢測(cè)波長(zhǎng)277? nm，體積流量1.0? mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量10 μL下，以乙腈：0.6%磷酸=45：55（V/V）為流動(dòng)相進(jìn)行檢測(cè)，采用體外抑菌試驗(yàn)對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果? ? 相同生藥量下，不同劑型的含量存在差異，本實(shí)驗(yàn)下藿香正氣水對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌有抑制作用。結(jié)論 藿香正氣系列制劑存在一定的內(nèi)在質(zhì)量差異，其說(shuō)明書(shū)中標(biāo)示功能主治完全一致的合理性有待進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞：藿香正氣系列制劑；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；分子對(duì)接；胃腸感染性腹瀉

中圖分類(lèi)號(hào)：R961.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Reevaluation of Huoxiang Zhengqi series preparations for gastrointestinal infectious diarrhea

Li Yu -ting1， Yang Fang2， Liu Tao1， Lei Yang1， and Tan Yao-lin3

（1? College of Food and Bioengineering， Chengdu University， Chengdu 610106; 2 Sichuan Provincial Key Laboratory of New Drug Pilot Test， Chengdu Tianhe Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Technology Conservation Co.， Ltd.， Chengdu 610106; 3 School of Pharmacy， Guangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanning 530200）

Abstract Objective The internal quality differences of Huoxiang Zhengqi series preparations were evaluated to provide a reference for clinical application. Methods The active components of Huoxiang Zhengqi series preparations for gastrointestinal infectious diarrhea were screened by network pharmacology and molecular docking technology. The active components of wogonin with moderate value， the index components of Huoxiang Zhengqi series preparations， magnolol， and honokiol were used as measurement indexes. HPLC method was used to detect the active components of Huoxiang Zhengqi series preparations under the conditions of the detection wavelength of 277 nm， the volume flow rate of 1.0 mL/min， column temperature of 30℃， and the injection volume of 10 μL. The mobile phase was acetonitrile ： 0.6 % phosphoric acid = 45 ： 55（V/V）. The results were verified by in vitro antibacterial test. Results? ? Under the same dosage， the content of different dosage forms was different. In this experiment， Huoxiang Zhengqi water had inhibitory effects on Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Conclusion There are some internal quality differences in Huoxiang Zhengqi series preparations， and the phenomenon of completely consistent functional indications in the instructions needs further study.

Key words? ? Huoxiang Zhengqi series preparations; Network pharmacology; Molecular docking; Gastrointestinal infectious diarrhea

胃腸感染性腹瀉主要是由于胃腸道被病毒、細(xì)菌、真菌等病原體感染而導(dǎo)致，臨床癥狀多表現(xiàn)為糞便異常、嘔吐、腹痛等癥狀，目前多以具有抑菌、抗病毒作用的中成藥進(jìn)行治療，其具有較好的療效；部分細(xì)菌、病毒會(huì)引起機(jī)體出現(xiàn)炎癥，因此還需要通過(guò)中成藥相應(yīng)的抗炎作用減輕炎癥[1]。藿香正氣處方中，以藿香化濕，以紫蘇、白芷解表，以蒼術(shù)、厚樸、大腹皮健脾燥濕，以茯苓、陳皮和胃清心，配伍后可使?jié)駵孟改c調(diào)和[2-3]。實(shí)驗(yàn)研究表明藿香正氣系列制劑在抗炎方面表現(xiàn)出了優(yōu)異的藥理活性，且對(duì)各種致病性真菌、細(xì)菌有抑制作用[4-6]。藿香正氣系列制劑是由藿香正氣散在現(xiàn)代制藥技術(shù)上演變而來(lái)，主要包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、水劑和口服液等近10種劑型，在臨床上普遍應(yīng)用于治療腸胃型感冒、急性胃腸炎等疾病，具有改善胃腸功能、有效促進(jìn)腸動(dòng)力、保護(hù)腸胃屏障功能和鎮(zhèn)靜的作用，在《中國(guó)藥典》2020版一部等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中，其所標(biāo)示的主治功能均為解表化濕，理氣和中；主要用于外感風(fēng)寒、內(nèi)傷濕滯或夏傷暑濕所致感冒[7-13]。不同劑型的藿香正氣制劑其處方雖然相同，但生產(chǎn)工藝參數(shù)甚至制備方法及工藝路線完全不同，如藿香正氣水醇提的藥材為蒼術(shù)、陳皮、厚樸、白芷等4味，提取工藝為滲漉法。并以40%～50%的乙醇作為成藥的溶媒，而藿香正氣口服液僅將厚樸一味藥材進(jìn)行醇提，提取工藝為回流法，且以水為成藥的溶媒，顯然，兩者由于制備工藝不同，其所含物質(zhì)基礎(chǔ)有異，因此臨床上治療效果可能有異，其標(biāo)示的功能主治完全一致的合理性有待再評(píng)價(jià)。

由于中成藥具有多成分、多靶點(diǎn)和多通路的特點(diǎn)，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接技術(shù)主要利用網(wǎng)絡(luò)對(duì)中成藥的多成分進(jìn)行分析并通過(guò)多種途徑對(duì)相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)節(jié)；同時(shí)組成多成分-多靶點(diǎn)-多途徑網(wǎng)絡(luò)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)以及分子對(duì)接技術(shù)主要利用分子生物學(xué)將中成藥中的有效成分與靶點(diǎn)基因相聯(lián)系，從而提高藥物療效，降低不良反應(yīng)，還可用其進(jìn)行老藥新用的研究。因此本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選藿香正氣系列制劑處方藥材中針對(duì)胃腸感染性腹瀉的抗炎、抑菌潛在活性成分，根據(jù)文獻(xiàn)及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)評(píng)價(jià)方法指南的要求[14]。本文利用分子對(duì)接技術(shù)對(duì)篩選出的活性成分進(jìn)行再驗(yàn)證，篩選得到漢黃芩素，并根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道將和厚樸酚及厚樸酚作為臨床上治療感染性腹瀉的指標(biāo)性成分，用以評(píng)價(jià)不同劑型的藿香正氣制劑在治療胃腸感染性腹瀉方面的物質(zhì)基礎(chǔ)差異，再以大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌為例，研究藿香正氣系列制劑的體外抑菌活性，對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證[15]，以期為其臨床使用提供參考。

1 儀器與試劑

PS-40型超聲波清洗器（深圳得康清洗設(shè)備有限公司）；DH系列電熱恒溫培養(yǎng)箱（西安禾普生物科技有限公司）；BS-6KH 型電子天平（上海友聲衡器公司）；FA2004電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司）；Ichrom5100高效液相色譜儀（大連依利特）。

厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)：wkq1012107質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、和厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)：wkq21012507質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、漢黃芩素對(duì)照品（批號(hào)：wkq20030204質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）等購(gòu)買(mǎi)自四川省維克奇生物科技有限公司；藿香正氣系列制劑收集情況見(jiàn)表1；甲醇（批號(hào)：2021012002）、磷酸（批號(hào)：201910001）、乙腈（批號(hào) 20210104）、氯化鈉（批號(hào)：2015042401）、瓊脂粉（批號(hào)：2020092701）等購(gòu)自成都市科隆化學(xué)品有限公司；蛋白胨（批號(hào)：20180928）購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限公司；牛肉膏（批號(hào)：20160303）購(gòu)自北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠、水為蒸餾水。

2 方法

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對(duì)接研究

2.1.1 藥物有效活性成分及靶標(biāo)篩選

本文通過(guò)TCMSP（http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站對(duì)藿香正氣系列制劑的10味中藥材進(jìn)行檢索，本文篩選滿(mǎn)足口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%及類(lèi)藥性（drug-likeness，DL）≥0.18的中藥成分；得到相應(yīng)的靶標(biāo)蛋白。借助 Uniprot（https：//www.uniprot.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)相關(guān)靶標(biāo)蛋白對(duì)應(yīng)的基因名簡(jiǎn)稱(chēng)，利用GeneCards（http：//www.genecards.org/）網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)炎癥（inflammatory）、抑菌（antibacterial）進(jìn)行檢索，得到疾病基因，利用Venny（http：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)，將藥物靶標(biāo)基因和疾病基因?qū)霐?shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行整合，得到相應(yīng)交集基因及韋恩圖。將整合后的交集基因?qū)隨TRING（http：//string-db.org/cgi/input.pl）網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行GO分析，設(shè)置物種選擇為“Homo sapiens”（人類(lèi)），并選擇最低蛋白相互作用閾值為“highest confidence”（最高置信度）0.9，默認(rèn)其余參數(shù)，得到PPI網(wǎng)絡(luò)，再將交集基因?qū)隓AVID（https：//david.ncifcrf.gov/home.jsp）網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)中，選擇“OFFICIAL GENE SYMBOL”和“Homo sapiens”，并清除所有默認(rèn)選項(xiàng)進(jìn)行KEGG富集分析。并用Prism軟件進(jìn)行GO分析柱狀圖的構(gòu)建，利用Omishare（http：//www.omicshare.com/tools/index.php/）網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)定閾值P＜0.05，選取前20個(gè)信號(hào)通路進(jìn)行高級(jí)氣泡可視化分析，得到KEGG分析高級(jí)氣泡圖。

將不重復(fù)的通路基因?qū)隨TRING（http：//string-db.org/cgi/input.pl）網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇網(wǎng)絡(luò)復(fù)雜程度為0.900進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，借助Cytoscape3.7.2軟件將PPI數(shù)據(jù)中的成分-靶標(biāo)文件和靶標(biāo)-通路文件導(dǎo)入進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析，將得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行可視化分析，得到成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)，利用Microsoft Excel軟件對(duì)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋽?shù)據(jù)進(jìn)行處理以得到各個(gè)節(jié)點(diǎn)的中心度值（degree），以中心度值的中位數(shù)11為節(jié)點(diǎn)從大到小篩選關(guān)鍵核心基因，大于中位數(shù)兩倍為關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，得出排名靠前的藥物活性成分。

2.1.2 關(guān)鍵化合物-靶點(diǎn)分子對(duì)接

利用PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.rcsb.org/）下載關(guān)鍵基因的蛋白受體，運(yùn)用Discovery Studio 2020軟件移除蛋白受體中的配體和水分子；從PubChem（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫(kù)中下載網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出的有效活性成分的2D結(jié)構(gòu)文件。利用Discovery Studio 2020軟件將蛋白受體與2D結(jié)構(gòu)結(jié)合，并顯示蛋白受體與配體相連的氫鍵得到優(yōu)化的2D結(jié)構(gòu)，利用PyRx軟件上傳已經(jīng)去掉水分子加上氫的蛋白文件，將其進(jìn)行格式轉(zhuǎn)化，再上傳2D結(jié)構(gòu)格式文件使其能量最小化后，進(jìn)行對(duì)接；借助PyMOL軟件導(dǎo)入2D結(jié)構(gòu)選擇顯示蛋白受體與化合物配體間的氫鍵，修改繪制成3D對(duì)接圖，最后利用Microsoft Office PowerPoint軟件進(jìn)行3D對(duì)接圖的調(diào)整。

2.2 含量測(cè)定方法

2.2.1 含量測(cè)定色譜條件

色譜柱為Supersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.6%磷酸水溶液（45：55）（V/V）為流動(dòng)相，進(jìn)樣量10 μL，體積流量為1.0 mL/min，在277 nm檢測(cè)波長(zhǎng)下測(cè)定，柱溫為30℃，理論塔板數(shù)以各定量成分峰計(jì)算均大于3000。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備

稱(chēng)取漢黃芩素、和厚樸酚以及厚樸酚對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用甲醇分別配制成漢黃芩素1.1558 μg/mL、和厚樸酚8.8 μg/mL、厚樸酚0.0111 mg/mL的對(duì)照品溶液，待用。

2.2.3 供試品溶液制備

（1）藿香正氣口服液供試品溶液的制備：精密量取藿香正氣口服液10 mL于25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超聲提?。?0℃、300 W、50 Hz）30 min，放冷，濾過(guò)，取濾液用 0.45 μm 微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

（2）藿香正氣水供試品溶液的制備：同“2.2.3（1）”。

（3）藿香正氣滴丸供試品溶液的制備：將藿香正氣滴丸研碎，取相同生藥量細(xì)粉，精密稱(chēng)定，置于具塞錐形瓶中，精密量取25 mL分析甲醇，稱(chēng)定重量，超聲提?。?0℃、300 W、50 Hz）30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用分析甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻；濾過(guò)，濾液用0.45 μm 微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

（4）藿香正氣顆粒、藿香正氣片劑供試品溶液的制備：將藿香正氣顆粒、片劑研碎，取相同生藥量細(xì)粉，同“2.2.3（3）”項(xiàng)下藿香正氣滴丸供試品溶液制備方法自“置于具塞錐形瓶……”起，同法操作。

（5）藿香正氣膠囊供試品溶液的制備：取相同生藥量藿香正氣膠囊內(nèi)容物，同“2.2.3（3）”項(xiàng)下藿香正氣滴丸供試品溶液制備方法自“置于具塞錐形瓶……”起，同法操作。

2.2.4 方法學(xué)考察

（1）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：精密移取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、藿香正氣水供試品溶液各10 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。含量測(cè)定結(jié)果表明，供試品溶液的出峰位置與對(duì)照品溶液的出峰位置的相對(duì)保留時(shí)間對(duì)應(yīng)一致，分離度均大于1.5。

（2）系統(tǒng)方法學(xué)考察：本文含量測(cè)定方法已經(jīng)方法學(xué)考察，儀器精密度試驗(yàn)、線性條件考察、樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)、供試品重復(fù)性試驗(yàn)及加樣回收試驗(yàn)均符合相關(guān)要求，限于篇幅，將另文發(fā)表。

2.2.5 樣品測(cè)定

“2.2.3”項(xiàng)下制備的供試品溶液按照“2.2.1”項(xiàng)下的高效液相含量測(cè)定色譜條件進(jìn)行測(cè)定。 相關(guān)高效液相含量測(cè)定色譜圖，見(jiàn)圖1～3。

2.3 抑菌藥效實(shí)驗(yàn)

2.3.1 固體培養(yǎng)基制備及菌懸液制備

稱(chēng)取牛肉膏1.2 g，蛋白胨4 g，NaCl 2 g，瓊脂粉8 g左右，加入400 mL純化水，在電熱套上邊攪拌邊加熱，使其完全溶解，在121℃高壓滅菌30 min后備用。在超凈工作臺(tái)無(wú)菌操作下，挑取適量大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌于固體培養(yǎng)基中在37℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24 h左右。待細(xì)菌培養(yǎng)好后，在超凈工作臺(tái)無(wú)菌條件下，挑取適量已培養(yǎng)好的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌于裝有適量無(wú)菌水的試管中與麥?zhǔn)媳葷峁軐?duì)比制成1×106～107? CFU/mL的菌液，振蕩搖勻后備用。

2.3.2 抑菌供試品溶液的制備

（1）藿香正氣口服液、藿香正氣水直接使用。

（2）藿香正氣滴丸供試品溶液的制備：將藿香正氣滴丸研碎，取相同生藥量細(xì)粉，精密稱(chēng)定，分別置于具塞錐形瓶中，精密量取10 mL純化水，超聲提?。?0℃、300 W、50 Hz）30 min，搖勻；濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

（3）藿香正氣顆粒、片劑供試品溶液的制備：將藿香正氣顆粒、片劑分別研碎，取相同生藥量細(xì)粉，同“2.3.2（2）”項(xiàng)下藿香正氣滴丸供試品溶液制備方法自“分別置于具塞錐形瓶……”起，同法操作。

（4）藿香正氣膠囊供試品溶液的制備：取相同生藥量藿香正氣膠囊內(nèi)容物，同“2.2.3（3）”項(xiàng)下藿香正氣滴丸供試品溶液制備方法自“分別置于具塞錐形瓶……”起，同法操作。

2.3.3 抑菌活性的測(cè)定

固體培養(yǎng)基高壓滅菌后，在超凈工作臺(tái)無(wú)菌條件下進(jìn)行倒平板操作，待固體培養(yǎng)基冷卻凝固后，精密量取1 mL已制備好的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌菌液于培養(yǎng)基表面涂布均勻，將牛津杯按照順序放置在固體培養(yǎng)基上，在牛津杯中加入80 μL的供試品溶液，采用0.0068 mg/mL阿莫西林溶液作陽(yáng)性對(duì)照，45%乙醇作為藿香正氣水的陰性對(duì)照、純化水作其他制劑陰性對(duì)照，確定其抑菌效果。

3 結(jié)果與分析

3.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果

3.1.1 藥物有效活性成分及靶標(biāo)篩選

通過(guò)TCMSP網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索組成藿香正氣系列制劑的10味中藥材，并設(shè)置口服生物利用度OB≥30%且類(lèi)藥性DL≥0.18篩選出6種中藥材的有效活性化合物成分。繼續(xù)借助Uniprot網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到130個(gè)靶標(biāo)簡(jiǎn)稱(chēng)，合并相同靶標(biāo)簡(jiǎn)稱(chēng)得到117個(gè)不同成分靶標(biāo)。通過(guò)GeneCards（https：//www.genecards.org/）網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)炎癥（inflammatory）、抑菌（antibacterial）兩個(gè)方面的疾病基因，并進(jìn)行整合得到共539個(gè)疾病基因相關(guān)靶點(diǎn)。通過(guò)Venny網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)，將117個(gè)成分靶點(diǎn)與539個(gè)疾病基因靶點(diǎn)相整合得到藿香正氣系列制劑對(duì)炎癥、抑菌的潛在作用靶點(diǎn)39個(gè)，如圖4所示。

經(jīng)KEGG分析得圖5～7中顯示富集的主要條目有細(xì)胞過(guò)程的陽(yáng)性調(diào)節(jié)（positive regulation of cellular process），細(xì)胞對(duì)化學(xué)刺激的相應(yīng)（cellular response to chemical stimulus）；在細(xì)胞組成中作用的靶點(diǎn)主要在細(xì)胞質(zhì)（cytoplasmic part），細(xì)胞器的管腔（intracellular organelle lumen）等區(qū)域。KEGG分析篩選得到203條信號(hào)通路，選擇P值較小的前20個(gè)信號(hào)通路進(jìn)行高級(jí)氣泡可視化分析，得到KEGG分析高級(jí)氣泡圖，見(jiàn)圖8。圖中相關(guān)靶點(diǎn)主要富集在癌癥通路（pathways in cancer）、乙型肝炎（hepatitis B）、腫瘤信號(hào)通路（TNF signaling pathway）等相關(guān)的信號(hào)通路上。

通過(guò)STRING網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)有效活性成分的基因與交集基因整合得到通路-基因的PPI網(wǎng)絡(luò)。借助Cytoscape3.7.2軟件對(duì)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋽?shù)據(jù)進(jìn)行可視化分析，得到成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)如圖9以及網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)。以網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)中心度值（degree）的中位數(shù)11為節(jié)點(diǎn)從大到小篩選關(guān)鍵核心基因，大于中位數(shù)為重要節(jié)點(diǎn)，大于中位數(shù)兩倍為關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，得到Degree排名為漢黃芩素（MOL000173）為關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)、表兒茶素（MOL000073）及β-谷甾醇（MOL000358）為重要節(jié)點(diǎn)。

3.1.3 分子對(duì)接結(jié)果

當(dāng)配體與受體結(jié)合的構(gòu)象穩(wěn)定時(shí)能量越低時(shí)，配體與受體自發(fā)結(jié)合的阻力越小，發(fā)生的作用可能性越大。分子對(duì)接3D結(jié)構(gòu)圖顯示，將藿香正氣系列制劑通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出的活性成分漢黃芩素（wogonin2）、表兒茶素（ent-Epicatechin）、β-谷甾醇（beta-sitosterol）與關(guān)鍵靶標(biāo)基因進(jìn)行分子對(duì)接，關(guān)鍵化合物與關(guān)鍵蛋白對(duì)接的結(jié)合親和力均在數(shù)值-10以下，見(jiàn)表2；其中3D分子對(duì)接圖，見(jiàn)圖10。據(jù)圖可知，藿香正氣系列制劑針對(duì)胃腸感染性腹瀉抑菌、抗炎的治療效果最佳的有效活性成分為漢黃芩素。3.2 含量測(cè)定結(jié)果?根據(jù)篩選結(jié)果及相關(guān)文獻(xiàn)，選擇漢黃芩素、和厚樸酚及厚樸酚作為指標(biāo)，對(duì)不同劑型的藿香正氣制劑進(jìn)行評(píng)價(jià)，并在相同生藥量下，推測(cè)不同劑型的藿香正氣制劑針對(duì)胃腸感染性腹瀉的臨床使用效果，在生藥量相同的情況下不同劑型不同廠家不同批次間的含量測(cè)定結(jié)果，如表3及圖11所示。結(jié)果表明，片劑、膠囊劑、滴丸與藿香正氣口服液均呈極顯著差異（P<0.01）；水劑、顆粒劑與藿香正氣口服液也有明顯差異；相同廠家相同劑型不同批次間含量也存在差異。

3.3 藿香正氣系列制劑對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的抑菌作用

在大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的平板中加入供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液及陽(yáng)性對(duì)照品溶液，觀察藿香正氣系列制劑的抑菌作用，并測(cè)量其抑菌圈面積大?。棵髢蓚€(gè)平行樣品）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藿香正氣水對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用，其他制劑對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌均未見(jiàn)明顯抑菌作用；不同廠家生產(chǎn)的藿香正氣水對(duì)不同菌種的抑制作用不同，且相同廠家不同批次間的抑菌作用也存在差異，結(jié)果見(jiàn)表4及圖12～17。

4 討論

藿香正氣系列制劑在臨床上普遍應(yīng)用于治療腸胃型感冒、胃腸感染性腹瀉、急性胃腸炎等消化系統(tǒng)的疾病以及呼吸內(nèi)科、皮膚科、兒科疾病，在《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第四版）》至試行第八版均將藿香正氣系列制劑作為新型冠狀病毒醫(yī)學(xué)觀察臨床表現(xiàn)為乏力伴有腸胃不適患者的推薦用藥。本研究及相關(guān)文獻(xiàn)表明，藿香正氣系列制劑其物質(zhì)基礎(chǔ)、成分含量、制備工藝不同；且相關(guān)文獻(xiàn)表明系列制劑的適應(yīng)癥有所不同[16-22]；因此說(shuō)明書(shū)中標(biāo)治的主治功能完全一致的合理性還有待評(píng)價(jià)。

本研究主要利用了系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出藿香正氣系列制劑針對(duì)胃腸感染性腹瀉對(duì)炎癥、抑菌作用的活性成分，分析結(jié)果的靶點(diǎn)主要是漢黃芩素（MOL000173）、表兒茶素（MOL000073）、β-谷甾醇（MOL000358）；然而利用分子對(duì)接技術(shù)對(duì)3種活性成分進(jìn)行與關(guān)鍵靶標(biāo)基因進(jìn)行3D分子對(duì)接，結(jié)果表明僅有漢黃芩素對(duì)治療胃腸感染性腹瀉的抗炎、抑菌作用有效；相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)將厚樸酚、和厚樸酚以及橙皮苷作為制劑的指標(biāo)性成分，但由于漢黃芩素和橙皮苷均為黃酮類(lèi)化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，均具有抗炎抑菌等藥理作用[23-24]。因此本文僅選用漢黃芩素、和厚樸酚及厚樸酚作為度量治療感染性腹瀉抗炎、抑菌的理論指標(biāo)，并輔以抑菌作用實(shí)驗(yàn)對(duì)含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

本文研究結(jié)果表明在基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)以及分子對(duì)接技術(shù)研究的基礎(chǔ)上，不同藿香正氣系列制劑具有不同的物質(zhì)究基礎(chǔ)；在指標(biāo)性成分的測(cè)定基礎(chǔ)上，不同劑型、不同廠家、不同批次的藿香正氣系列制劑間3種活性成分存在差異。部分文獻(xiàn)表明漢黃芩素因其本身所帶有的酚羥基較多且在溶液中不穩(wěn)定， 采用乙醇可使?jié)h黃芩素充分溶出，和厚樸酚及厚樸酚在乙醇濃度為40%～60%之間時(shí)的厚樸總酚得率較大；而藿香正氣水多味藥材采用乙醇浸提，且以40%～50%的乙醇為溶媒[25]；含量測(cè)定結(jié)果中也表明藿香正氣水中3種成分度量指標(biāo)較其他劑型數(shù)值更大，抑菌藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)條件下藿香正氣系列制劑中只有藿香正氣水對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出明顯抑制作用，其他制劑均未表現(xiàn)出明顯抑菌作用，與含量測(cè)定結(jié)果有一定關(guān)聯(lián)性。本研究于一定程度上揭示藿香正氣系列制劑說(shuō)明書(shū)上標(biāo)示主治功能相同的現(xiàn)象可能不合理，研究結(jié)果為藿香正氣系列制劑在臨床上針對(duì)不同病癥的用藥選擇提供參考。

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