高 藝，郭彥輝，余 蕊，韓 爽，郝光恩，謝永興，張瀟月，楊玉艾，孫永科，張 恒，3

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650210；2.山東信得科技股份有限公司，山東青島 266104；3.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西楊凌 712100）

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）是一種有囊膜的正鏈RNA病毒，根據(jù)基因組和抗原多樣性可將其分為兩種基因型，即歐洲型（PRRSV-1）和北美型（PRRSV-2）[1]。我國(guó)自1996年分離到PRRSV以來(lái)，報(bào)道的流行毒株大多屬于PRRSV-2型，包括經(jīng)典型、高致病性型（HP-PRRSV）以及NADC30-like和NADC34-like型[2]。PRRSV引起的豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）俗稱“藍(lán)耳病”，是一種高度免疫抑制性疾病[3]，會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物致命性或持續(xù)性感染[4]，其臨床癥狀取決于動(dòng)物的生長(zhǎng)階段、免疫狀態(tài)、繼發(fā)或合并感染的病原體以及環(huán)境條件和管理水平等[5]，主要表現(xiàn)母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)弱仔等繁殖障礙，以及仔豬、育肥豬呼吸系統(tǒng)紊亂和生長(zhǎng)遲緩等癥狀，是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的高度接觸性傳染病[4]。目前，混合感染已成為畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)的普遍現(xiàn)象。PRRSV是生豬養(yǎng)殖場(chǎng)流行的主要病原體之一[6]，可引起機(jī)體的高度免疫抑制，因此易與副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）[7]、豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）[8]等細(xì)菌發(fā)生混合或繼發(fā)感染。

HPS是一種革蘭氏陰性、非溶血性、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD）依賴型細(xì)菌，是一種條件致病菌，在特定情況下（如應(yīng)激和免疫抑制），可引發(fā)以纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎為主要特征的格拉瑟?。℅lasser's disease）[9]，引起的豬群發(fā)病率和死亡率較高，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)損失。目前HPS至少已確定15種血清型，其中在我國(guó)流行最普遍的是血清型4和5，其次是血清型13、14和12[10]。

SS是有莢膜的革蘭氏陽(yáng)性球菌，目前共有35個(gè)血清型（1～34、1/2型），最常見(jiàn)的為2型[11]。SS也是一種條件致病菌，常存在于豬上呼吸道，但它可穿透黏膜屏障進(jìn)入血液、關(guān)節(jié)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)而致病，引起菌血癥、心內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎、肺炎和猝死等[12]。此外，SS是一種人獸共患病病原體，能夠引起鏈球菌腦膜炎綜合征和中毒性休克綜合征，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致死亡[13]。

2022年11 月，某存欄2 000頭母豬的大型規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)，在使用PRRSV活疫苗（CH-1R株）免疫后，飼養(yǎng)的母豬及40～50日齡仔豬突發(fā)疫病，癥狀主要表現(xiàn)為高熱、精神沉郁、呼吸困難、食欲減退或停食，發(fā)病率約為15%，病死率約為8%。為確定該豬場(chǎng)的發(fā)病原因，以便制定科學(xué)防治方案，對(duì)該豬場(chǎng)采集的血清及肺臟進(jìn)行病毒抗體和抗原檢測(cè)、細(xì)菌分離鑒定及分型，對(duì)分離菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以期為豬場(chǎng)PRRSV與其他病原的混合感染防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 病料來(lái)源

某規(guī)模化豬場(chǎng)疑似患病的母豬和40～50日齡仔豬。

1.2 主要試劑、疫苗及藥物

PRRSV ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、PCV2 ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)于BioCheck公司；CSFV ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)于IDEXX公司；病毒核酸提取試劑盒，購(gòu)于AXYGEN公司；Evo M-MLV一步法RT-PCR試劑盒，購(gòu)于艾科瑞生物科技有限公司；DL 2000/5000 DNA Marker，購(gòu)于Takara公司；胰蛋白胨大豆瓊脂（trypticase soy agar，TSA）、胰蛋白胨大豆肉湯（trypticase soy broth，TSB）、LB瓊脂，購(gòu)于青島海博生物技術(shù)有限公司；藥敏紙片，購(gòu)于杭州微生物試劑有限公司；SS-1、2、7、9型分型標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清參考品，購(gòu)于中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；新生牛血清，購(gòu)于杭州天杭生物科技股份有限公司；NAD，購(gòu)于生工生物（上海）股份有限公司；無(wú)菌脫纖維羊血，購(gòu)于南京全隆生物技術(shù)有限公司；HP-PRRSV GDr180株活疫苗（信藍(lán)寧）、PRRSV CH-1a株滅活疫苗（信藍(lán)凈），為北京信得威特科技有限公司產(chǎn)品；注射用頭孢噻呋鈉，為江西省騰龍生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。

1.3 儀器設(shè)備

T100 PCR儀，美國(guó)Bio-Rad公司產(chǎn)品；電泳儀，北京六一生物科技有限公司產(chǎn)品；Tanon 3500BR凝膠成像系統(tǒng)，上海天能公司產(chǎn)品；恒溫培養(yǎng)箱，北京五洲東方科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀，賽默飛世爾科技公司產(chǎn)品。

1.4 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)HP-PRRSV和NADC30-like毒株NSP2高變區(qū)的鑒別診斷引物[14]，PCV2[15]和CSFV[16]檢測(cè)引物（表1），HPS 16S rRNA[17]、SSgdh基因[18]特異性鑒定引物（表2），HPS 1～15型PCR分型引物[19]（表3）。所有引物序列，均由生工生物（上海）股份有限公司合成。

表1 病毒檢測(cè)引物序列

表2 HPS和SS鑒定引物序列

表3 HPS 1～15型PCR分型引物序列

1.5 病豬臨床癥狀及病理剖檢觀察

觀察病豬整體狀態(tài)、精神狀態(tài)和飲食狀態(tài)，并對(duì)病死豬進(jìn)行臨床剖檢，觀察各組織臟器的病理變化。

1.6 病毒抗體檢測(cè)

隨機(jī)采集母豬和40～50日齡仔豬的血清樣品共75份，分別按照PRRSV、PCV2、CSFV抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)，進(jìn)行病毒抗體檢測(cè)。根據(jù)各試劑盒說(shuō)明書(shū)，使用酶標(biāo)儀在合適波長(zhǎng)處讀取試驗(yàn)結(jié)果，并進(jìn)行試驗(yàn)有效性判定，計(jì)算并分析試驗(yàn)結(jié)果的陽(yáng)性率、S/P或阻斷率平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和離散度。

1.7 病毒核酸檢測(cè)

隨機(jī)采集母豬和40～50日齡仔豬的血清樣品共25份，以及病死豬肺臟樣品4份（進(jìn)行研磨處理），按照病毒核酸提取試劑盒說(shuō)明書(shū)要求，提取樣品中的病毒核酸，分別采用PRRSVNSP2高變區(qū)鑒別診斷引物以及CSFV和PCV2檢測(cè)引物，進(jìn)行病毒核酸檢測(cè)，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并觀察結(jié)果，陽(yáng)性樣品送生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行序列測(cè)定。

1.8 PRRSV NSP2基因測(cè)序及遺傳進(jìn)化分析

將測(cè)序序列通過(guò)BLAST與NCBI上國(guó)內(nèi)外PRRSV參考毒株的NSP2基因高變區(qū)序列進(jìn)行比對(duì)分析，用MEGA 7.0軟件中的Neighbor-Joining法，構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)并分析各毒株的遺傳進(jìn)化關(guān)系。

1.9 細(xì)菌分離及PCR鑒定

無(wú)菌條件下取100 μL肺臟研磨液接種于TSA平板培養(yǎng)基（含28.125 μg/μL NAD和100 mL/L新生牛血清）和血瓊脂平板培養(yǎng)基（含100 mL/L無(wú)菌脫纖維羊血），用玻璃珠涂板法進(jìn)行涂布，于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～36 h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)；挑取培養(yǎng)基上疑似HPS和SS形態(tài)特征的單個(gè)菌落，進(jìn)一步接種TSA平板培養(yǎng)基和血瓊脂平板培養(yǎng)基進(jìn)行純化，同時(shí)用HPS 16S rRNA和SSgdh基因特異性鑒定引物對(duì)疑似菌落進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并設(shè)立陰性對(duì)照；將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并觀察結(jié)果。

1.10 HPS分型鑒定

將鑒定為HPS陽(yáng)性的單個(gè)菌落接種于TSB液體培養(yǎng)基（含28.125 μg/μL NAD和100 mL/L新生牛血清），37 ℃振蕩培養(yǎng)18 h；取1 mL菌液12 000 r/min離心2 min，棄上清；將沉淀用PBS洗滌2次，用100 μL PBS振蕩混勻，100 ℃水浴10 min，12 000 r/min離心2 min，取上清液作為DNA模板，用HPS 1～15型PCR分型引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照；將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并觀察結(jié)果。

1.11 SS分型鑒定

將鑒定為SS陽(yáng)性的單個(gè)菌落接種TSB 液體培養(yǎng)基（含100 mL/L新生牛血清），37 ℃振蕩培養(yǎng)18 h，8 000 r/min離心10 min，棄上清；將沉淀用PBS洗滌2次，制成5×108CFU/mL的細(xì)菌懸液；取20 μL菌液與20 μL SS-1、2、7、9型標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清參考品，在玻片上充分混勻，5 min內(nèi)觀察有無(wú)凝集反應(yīng)。

1.12 細(xì)菌藥敏試驗(yàn)

用紙片擴(kuò)散法測(cè)定HPS和SS分離菌株的耐藥性。取100 μL HPS和SS培養(yǎng)液，分別涂布含28.125 μg/μL NAD + 100 mL/L新生牛血清和只含100 mL/L新生牛血清的TSA平板培養(yǎng)基上，選取新霉素、多西環(huán)素、青霉素、大觀霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、阿莫西林、頭孢曲松等24種常用抗生素為試驗(yàn)藥物，將各藥敏片均勻貼附于平板培養(yǎng)基表面，于37 ℃下培養(yǎng)16～24 h，觀察并測(cè)定藥敏片抑菌圈直徑，耐藥性判斷標(biāo)準(zhǔn)參考藥敏紙片說(shuō)明書(shū)。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀及剖檢觀察

病豬臨床表現(xiàn)為高燒不退、精神萎靡、食欲不振、流涎、呼吸困難，有時(shí)腹式呼吸，不愿行走或行走緩慢，耳朵及四肢等末梢器官表面發(fā)紺，呈暗紫色，體表皮膚出現(xiàn)明顯的藍(lán)紫色斑塊（圖1-A、B）。剖檢發(fā)現(xiàn)：病豬胸腔及心包有大量積液，心臟表面有纖維素性滲出物，淋巴結(jié)腫大；肺臟間質(zhì)增寬，外觀呈鮮紅色，肺臟表面可見(jiàn)暗紅色斑塊狀淤血及鮮紅色出血塊（圖1-C）。

圖1 患病豬臨床癥狀及肺臟病變

2.2 PRRSV、PCV2及CSFV抗體檢測(cè)

病毒抗體檢測(cè)結(jié)果（表4）顯示：PRRSV、PCV2、CSFV抗體陽(yáng)性率分別為60.0%（45/75）、98.67%（74/75）、97.33%（73/75），離散度分別為98.08%、20.98%、17.07%。結(jié)果表明，該豬場(chǎng)目前處于PCV2和CSFV抗體水平高、PRRSV抗體水平低的狀態(tài)。

表4 PRRSV、PCV2、CSFV的抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 病毒PCR檢測(cè)

用HP-PRRSV和NADC30-like毒株NSP2高變區(qū)鑒定引物進(jìn)行的PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示：25份血清樣品中，有9份擴(kuò)增出984 bp的條帶（圖2），與預(yù)期大小相符，血清陽(yáng)性率為36.0%（9/25）；4份肺臟樣品中，均有擴(kuò)增條帶，其中肺臟2和肺臟1、3、4的擴(kuò)增條帶大小不同，分別為681 bp和984 bp，與預(yù)期大小相符（圖3）；血清及肺臟樣品中，PCV2和CSFV均為陰性。

圖2 血清PRRSV RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

圖3 肺臟PRRSV RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

2.4 PRRSV NSP2基因遺傳進(jìn)化分析

將測(cè)序結(jié)果進(jìn)行BLAST比對(duì)分析的結(jié)果（圖4）顯示：2號(hào)肺臟樣品（命名為AH1）PRRSVNSP2基因序列與GenBank中的NADC30-like毒株有90.7%～93.7%的同源性，其余樣品（命名為AH2）的PRRSVNSP2基因序列與GenBank中JXA1-like毒株有98.8%～99.8%的同源性。

根據(jù)PRRSVNSP2基因序列構(gòu)建的進(jìn)化樹(shù)（圖5）顯示：PRRSV分為PRRSV-1型和PRRSV-2型，其中PRRSV-2型包括NADC30-like（Lineage 1）、QYYZ-like（Lineage 3）、VR2332-like（Lineage 5）和JXA1-like（Lineage 8）。AH1與我國(guó)流行的HeN1401、SX1-1607等NADC30-like毒株處于同一分支，同屬于Lineage 1；AH2與JSYZ1909-16、rJXA1-R等JXA1-like毒株處于同一分支，同屬于Lineage 8。

圖5 PRRSV NSP2基因遺傳進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果

2.5 細(xì)菌分離培養(yǎng)

將肺臟組織研磨液分別涂布于TSA平板培養(yǎng)基和血瓊脂平板培養(yǎng)基，24 h后發(fā)現(xiàn)：TSA平板上有圓形、邊緣整齊、表面光滑、灰白色、半透明、針尖大小菌落（圖6），符合HPS形態(tài)特征；血瓊脂培養(yǎng)基上有呈圓形、半透明、灰白色、表面光滑、邊緣整齊且有溶血環(huán)的菌落（圖7），符合SS形態(tài)特征。

圖6 TSA平板培養(yǎng)基上菌落形態(tài)

圖7 血瓊脂平板培養(yǎng)基上菌落形態(tài)

2.6 細(xì)菌PCR鑒定

用HPS 16S rRNA和SSgdh基因特異性鑒定引物，對(duì)平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的疑似菌落進(jìn)行PCR鑒定。HPS 16S rRNA PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，4份肺臟樣品均擴(kuò)增出821 bp目的片段（圖8），與預(yù)期大小相符；SSgdh基因PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，4份肺臟樣品均擴(kuò)增出688 bp目的片段（圖9），與預(yù)期大小相符。

圖8 HPS 16S rRNA PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

圖9 SS gdh基因PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

2.7 HPS分型

用HPS-1～15型PCR分型引物，確定分離純化HPS菌株的血清型。結(jié)果（圖10）顯示：經(jīng)HPS-5/12、12型引物分別擴(kuò)增出大小為560 bp、508 bp的條帶，與預(yù)期大小條帶相符，其余血清型均未擴(kuò)增出相應(yīng)條帶。結(jié)果表明，本次分離純化的HPS菌株血清型為12型。

圖10 HPS 1～15型PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

2.8 豬鏈球菌分型

采用玻片凝集法和SS-1、2、7、9型標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清參考品，確定分離純化SS菌株的血清型。結(jié)果（圖11）顯示，分離菌株與SS-9型標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清產(chǎn)生明顯的凝集現(xiàn)象，與SS-1、2、7型標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清均未見(jiàn)凝集現(xiàn)象。結(jié)果表明，本次分離純化的SS菌株血清型為SS-9型。

圖11 SS玻片凝集試驗(yàn)結(jié)果

2.9 藥敏試驗(yàn)

本次分離的HPS菌株對(duì)多西環(huán)素、青霉素、大觀霉素、恩諾沙星、頭孢曲松、頭孢噻呋、頭孢氨芐、丁胺卡那、甲氧芐啶、頭孢拉定、頭孢唑林敏感，對(duì)新霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、阿莫西林、頭孢噻肟-棒酸、諾氟沙星、氧氟沙星、鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、卡那霉素、復(fù)方新諾明、氨芐西林耐藥（表5）；SS分離菌株對(duì)新霉素、多西環(huán)素、青霉素、大觀霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、阿莫西林、頭孢曲松、頭孢噻呋、頭孢噻肟-棒酸、頭孢氨芐、丁胺卡那、頭孢拉定、頭孢唑林、諾氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林敏感，對(duì)卡那霉素中介，對(duì)甲氧芐啶、鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、復(fù)方新諾明耐藥（表6）。

表5 HPS分離菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果 單位：mm

表6 SS分離菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果 單位：mm

3 臨床干預(yù)治療

基于本試驗(yàn)疾病診斷及細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)豬場(chǎng)采取以下治療及防控措施：將發(fā)病豬及時(shí)隔離、消毒，淘汰無(wú)治療價(jià)值病豬，防止豬只交叉感染；加強(qiáng)通風(fēng)、消毒，降低豬場(chǎng)環(huán)境病毒載量。對(duì)發(fā)病豬每天肌內(nèi)注射1次頭孢噻呋鈉5 mg/kg，連續(xù)注射2～3 d；在飼料和飲水中，添加“黃芪多糖”和“電解多維”，以減輕豬群臨床癥狀和排毒，治療豬群細(xì)菌性疾病，提高動(dòng)物機(jī)體免疫能力。藥物治療7 d后，先普免HP-PRRSV活疫苗（GDr180株）1頭份/頭，間隔21 d普免1次，21 d后再普免PRRSV滅活疫苗（CH-1a株）2 mL/頭，在普免前先小群試用，觀察2 d無(wú)不良反應(yīng)后再擴(kuò)大免疫。通過(guò)采取以上綜合防控措施，該豬場(chǎng)豬群PRRSV抗體陽(yáng)性率由60.0%（45/75）上升至100%（75/75），離散度由98.08%降至22.87%，HPS和SS抗原檢測(cè)全部轉(zhuǎn)為陰性，豬場(chǎng)逐漸恢復(fù)穩(wěn)定狀態(tài)，母豬及仔豬群精神狀態(tài)良好，無(wú)咳喘等呼吸道問(wèn)題發(fā)生，豬場(chǎng)病情得到有效控制。

4 討論

目前，HP-PRRSV和NADC30-like是我國(guó)主要流行毒株，兩者的混合感染在豬呼吸道疾病綜合征發(fā)病豬中較為常見(jiàn)[20]。NADC30-like毒株雖不像HP-PRRSV毒株具有高致病性，但NADC30-like毒株的高度重組以及與其他病原體的合并感染，增加了PRRSV的突變率[21]，易導(dǎo)致新毒株出現(xiàn)，給PRRS防控帶來(lái)較大困難。Kumar等[22]研究表明，受PRRSV感染的動(dòng)物機(jī)體可通過(guò)不同的機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)菌繼發(fā)感染，例如破壞上皮屏障，參與調(diào)節(jié)細(xì)菌粘附受體表達(dá)，以及改變宿主免疫反應(yīng)。Li等[7-8]研究發(fā)現(xiàn)，PRRSV毒株的高重組率和廣泛傳播，加劇了它與某些細(xì)菌混合和繼發(fā)感染情況，如SS和HPS。此外，在SS發(fā)病機(jī)制研究[23]中發(fā)現(xiàn)：PRRSV與SS合并感染時(shí)，PRRSV會(huì)抑制細(xì)胞發(fā)揮免疫功能，影響它們清除SS的能力，導(dǎo)致SS在組織中更廣泛傳播；并且SS的繼發(fā)感染會(huì)增強(qiáng)PRRSV感染介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，引發(fā)動(dòng)物機(jī)體更嚴(yán)重的臨床癥狀[24]。PRRSV的持續(xù)演變使其致病機(jī)制的研究變得費(fèi)力，它與其他豬病原體合并感染的診斷與治療也變得更加困難。因此，養(yǎng)殖場(chǎng)在進(jìn)行PRRS防控時(shí)，應(yīng)借助病原學(xué)、血清學(xué)檢測(cè)手段，以及病原基因測(cè)序技術(shù)和藥敏試驗(yàn)，制定“一場(chǎng)一策”的免疫程序[25]；防止濫用抗菌藥，避免耐藥性的產(chǎn)生和無(wú)效用藥；采取疫苗免疫和藥物壓制的方案精準(zhǔn)防控疾病。

根據(jù)該豬場(chǎng)的發(fā)病情況、病豬臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，綜合判斷該豬場(chǎng)是由于PRRSV抗體離散度較大，且流行的HP-PRRSV與NADC30-like毒株與免疫的CH-1R毒株不匹配，引起豬群發(fā)病導(dǎo)致感染豬免疫抑制，繼而感染HPS和SS。目前，我國(guó)主要采取疫苗免疫的方式預(yù)防和控制PRRS[26]。臨床上使用的商業(yè)化PRRSV經(jīng)典毒株活疫苗僅針對(duì)同源毒株提供完全有效的保護(hù)，對(duì)HPPRRSV、NADC30-like毒株交叉保護(hù)有限[27-28]。HP-PRRSV活疫苗包括JXA1-R、HuN4-F112、TJM-F92和GDr180株[26]，其中GDr180株活疫苗對(duì)PRRSV陽(yáng)性活躍場(chǎng)的緊急免疫能有效控制疫情，在對(duì)抗HP-PRRSV毒株時(shí)效果顯著，同時(shí)在面對(duì)NADC30-like和GM2等新流行毒株感染時(shí)，也能提供較好的免疫保護(hù)[29]。段振華[30]等在PRRS防控中發(fā)現(xiàn)，PRRSV滅活疫苗能有效控制NADC30-like毒株感染。因此，本研究制定了活疫苗加滅活苗的綜合免疫方案，利用PRRSV GDr180株活疫苗激活機(jī)體的細(xì)胞免疫與體液免疫，同時(shí)使用PRRSV CH-1a株滅活疫苗進(jìn)行加強(qiáng)免疫，進(jìn)一步提高機(jī)體的體液免疫水平，快速提供免疫保護(hù)。根據(jù)本研究的細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果，HPS和SS均對(duì)頭孢類藥物敏感，如頭孢曲松、頭孢噻呋等，其中頭孢噻呋鈉被廣泛用于豬場(chǎng)疾病的預(yù)防和治療，具有長(zhǎng)效、安全性高的優(yōu)點(diǎn)，在臨床上可有效預(yù)防和治療由HPS和SS引起的豬呼吸道疾病，以及治療SS引起的敗血癥、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎或多發(fā)性漿膜炎[31]。

5 結(jié)論

本研究對(duì)某規(guī)?；i場(chǎng)發(fā)生疫病的豬進(jìn)行臨床癥狀和病理解剖觀察，采集血清和肺臟進(jìn)行PRRSV、PCV2、CSFV抗體和抗原檢測(cè)，以及細(xì)菌分離鑒定和分型，確定該豬場(chǎng)疫情由HP-PRRSV和NADC30-like PRRSV毒株以及HPS-12型、SS-9型混合感染所致。頭孢類藥物對(duì)本次分離的HPS和SS菌株較為敏感。通過(guò)采取隔離、消毒等生物安全措施，PRRSV活苗和滅活苗的綜合免疫，使用HPS和SS敏感藥物進(jìn)行治療，病情得到有效控制。本研究為規(guī)?；i場(chǎng)發(fā)生PRRSV與其他病原混合感染的鑒別診斷及精準(zhǔn)防控提供了成功經(jīng)驗(yàn)。