孟小玉,柴婷婷

陜西省銅川市人民醫(yī)院外科,陜西銅川 727100

甲狀腺乳頭狀癌為臨床常見(jiàn)內(nèi)分泌系統(tǒng)的惡性腫瘤之一,占甲狀腺癌的84%,是最常見(jiàn)的組織病理學(xué)類型。在我國(guó)所有惡性腫瘤中,甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病率居于第7位,而在女性中,該病發(fā)病率居于第4位,且發(fā)病率隨著女性年齡的增加而逐漸升高[1]。甲狀腺乳頭狀癌患者雖預(yù)后良好,但仍有大量患者出現(xiàn)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā),導(dǎo)致不良結(jié)局,因此準(zhǔn)確的術(shù)前診斷對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的臨床治療具有重要意義[2]。甲狀腺功能指標(biāo)為判斷甲狀腺疾病的重要指標(biāo)。當(dāng)發(fā)生甲狀腺癌時(shí),多種甲狀腺功能指標(biāo)出現(xiàn)異常[3]。N-myc下游調(diào)控基因(NDRG)3是NDRG家族重要成員,參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化等多種細(xì)胞活動(dòng),已被證實(shí)在胃癌、卵巢癌、前列腺癌等多種癌癥中呈現(xiàn)異常表達(dá),近年來(lái)其在癌變過(guò)程中的作用逐漸受到關(guān)注[4-5],然而NDRG3在甲狀腺乳頭狀癌中的作用卻鮮有報(bào)道。此外對(duì)于甲狀腺乳頭狀癌的診斷,單一指標(biāo)檢測(cè)靈敏度較低。因此,本研究以本院進(jìn)行甲狀腺切除術(shù)的115例甲狀腺乳頭狀癌患者為研究對(duì)象,檢測(cè)患者血清NDRG3及甲狀腺功能指標(biāo)的變化,并對(duì)以上指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷甲狀腺乳頭狀癌的價(jià)值進(jìn)行探討,以期為臨床早期診斷、治療該疾病提供相關(guān)參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2021年5月至2022年5月本院收治的115例甲狀腺乳頭狀癌患者作為甲狀腺癌組。(1)納入標(biāo)準(zhǔn):①均符合關(guān)于甲狀腺乳頭狀癌的診斷及治療指南[6],且經(jīng)病理學(xué)檢查確診;②首次確診并接受治療,既往無(wú)相關(guān)疾病治療史;③未出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;④留取甲狀腺乳頭狀癌病灶組織前未經(jīng)放療、化療。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他頭部、頸部惡性腫瘤;②既往有頭部、頸部放療、化療史;③對(duì)研究配合度較低;④存在肝、腎、心臟功能明顯異常。115例甲狀腺乳頭狀癌患者中男40例,女75例;年齡45～90歲,平均(53.28±6.82)歲;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移75例;TNM分期Ⅰ期12例,Ⅱ期9例,Ⅲ期65例,Ⅳ期29例。選取同期在本院進(jìn)行診治的甲狀腺良性結(jié)節(jié)患者115例作為良性對(duì)照組,其中男46例,女69例;年齡46～90歲,平均(54.25±7.62)歲。兩組性別、年齡分布比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?；颊呒凹覍賹?duì)本研究知情同意,并簽訂知情同意書,本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 所有研究對(duì)象均禁飲、禁食8 h,于次日抽取晨起空腹肘靜脈血5 mL,在室溫下以4 500 r/min的轉(zhuǎn)速離心,分離上層血清,將上層血清置于-80 ℃的冰箱中保存待測(cè)。采用化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)甲狀腺功能指標(biāo),包括甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TpoAb)、甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)、促甲狀腺激素(TSH)、游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)水平,并計(jì)算FT4/FT3比值。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)患者血清NDRG3水平。

收集甲狀腺乳頭狀癌患者術(shù)后病理活檢組織及甲狀腺良性結(jié)節(jié)患者病理活檢組織,采用免疫組化法檢測(cè)NDRG3表達(dá)情況。4%甲醛固定、洗滌、脫水、透明、浸漬包埋,制備石蠟切片。兔抗人NDRG3一級(jí)抗體(Abam)的稀釋比為1∶200。使用已知的陽(yáng)性膜作為陽(yáng)性對(duì)照,使用磷酸鹽緩沖液代替第一抗體作為陰性對(duì)照。根據(jù)NDRG3陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)估分析結(jié)果。根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分,無(wú)著色記為0分(-),淡黃色記為1分(+),棕黃色記為2分(++),棕褐色記為3分(+++)。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分,0～<11%記為1分,11%～<51%記為2分,51%～<81%記為3分,81%～100%記為4分。將染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分相乘得出最終評(píng)分結(jié)果,<4分為低表達(dá),而≥4分為高表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清NDRG3及甲狀腺功能指標(biāo)水平比較 甲狀腺癌組血清TpoAb、TgAb、TSH、FT4/FT3水平均明顯高于良性對(duì)照組,NDRG3、FT3水平明顯低于良性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組FT4水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清NDRG3及甲狀腺功能指標(biāo)水平比較

2.2免疫組化法檢測(cè)NDRG3表達(dá)結(jié)果 NDRG3在甲狀腺乳頭狀癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中,陽(yáng)性表達(dá)率為36.52%(42/115),明顯低于甲狀腺良性結(jié)節(jié)中的陽(yáng)性表達(dá)率73.91%(85/115),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=32.511,P<0.001)。見(jiàn)圖1。

A為甲狀腺乳頭狀癌組織中NDRG3表達(dá);B為甲狀腺良性結(jié)節(jié)組織中NDRG3表達(dá)。

2.3多因素Logistic回歸分析甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生的影響因素 以是否發(fā)生甲狀腺乳頭狀癌為因變量,將血清NDRG3及甲狀腺功能指標(biāo)作為自變量,根據(jù)中位值進(jìn)行賦值,賦值情況見(jiàn)表2,多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示血清TSH≥2.58 mIU/L、FT4/FT3≥3.32為甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),血清NDRG3≥432.89 pg/mg、FT3≥4.47 pmol/L為甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生的獨(dú)立保護(hù)因素(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2 各變量賦值情況

表3 多因素Logistic回歸分析甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生的影響因素

2.4血清NDRG3與甲狀腺功能指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的診斷效能 繪制ROC曲線,血清NDRG3、TSH、FT3、FT4/FT3單獨(dú)檢測(cè)診斷甲狀腺乳頭狀癌的曲線下面積(AUC)分別為0.838、0.766、0.692、0.713,通過(guò)對(duì)Logistic的模型方程進(jìn)行變換得到聯(lián)合預(yù)測(cè)因子的公式,即Y聯(lián)合= -1.759×XNDRG3+0.510×XTSH-0.221×XFT3+0.029×XFT4/FT3。聯(lián)合預(yù)測(cè)因子診斷甲狀腺乳頭狀癌的AUC為0.906,4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的AUC大于單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。見(jiàn)表4、圖2。

表4 血清NDRG3與甲狀腺功能指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的診斷效能

圖2 血清NDRG3及甲狀腺功能指標(biāo)診斷甲狀腺乳頭狀癌的ROC曲線

2.5不同臨床特征甲狀腺乳頭狀癌患者NDRG3水平比較 存在甲狀腺外延伸、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的甲狀腺乳頭狀癌患者NDRG3水平明顯低于不存在甲狀腺外延伸、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期Ⅰ～Ⅱ期的狀腺乳頭狀癌患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 不同臨床特征甲狀腺乳頭狀癌患者NDRG3水平比較

3 討 論

甲狀腺癌是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌癌,已成為全球發(fā)病率增長(zhǎng)最快的癌癥。甲狀腺乳頭狀癌是最常見(jiàn)的病理類型,占甲狀腺癌的80%～90%[7-8]。大多數(shù)甲狀腺乳頭狀癌的惡性程度較低,被認(rèn)為是一種進(jìn)展緩慢、預(yù)后良好的癌癥。然而,30%～80%的患者會(huì)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,研究表明,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與疾病復(fù)發(fā)密切相關(guān)[9]。當(dāng)患者術(shù)后發(fā)生中央淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí),往往需要二次手術(shù),不僅增加了手術(shù)難度,還增加了喉返神經(jīng)損傷、甲狀旁腺功能下降等并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。因此,早期診斷甲狀腺乳頭狀癌、及時(shí)治療對(duì)有效改善患者預(yù)后具有重要作用。

NDRG3在細(xì)胞增殖、分化和其他生物學(xué)功能中發(fā)揮重要作用。NDRG3在睪丸、卵巢、前列腺、脊髓和原始胸腺中高表達(dá),其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在腦中表達(dá)最高,其次是心臟和腎。NDRG3存在于生精上皮的外層,可能在精子產(chǎn)生過(guò)程中發(fā)揮作用[10]。近年來(lái),NDRG3在癌變過(guò)程中的復(fù)雜作用引起了人們的關(guān)注。已有研究發(fā)現(xiàn)NDRG3能夠在缺氧條件下激活RAF-ERK通路,通過(guò)乳酸的積累加速腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[11]。NDRG3通過(guò)調(diào)節(jié)雄性生殖細(xì)胞中的ERK信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)減數(shù)分裂雙鏈DNA斷裂修復(fù)。此外,NDRG3還可上調(diào)血管生成趨化因子(CXCL1、CXCL3 和 CXCL5)的表達(dá)水平,增加血管生成因子的表達(dá),從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展[12-13]。本研究結(jié)果顯示,在甲狀腺乳頭狀癌患者血清及組織中NDRG3明顯低于甲狀腺良性結(jié)節(jié)患者,且發(fā)現(xiàn)NDRG3水平與甲狀腺乳頭狀癌患者甲狀腺外延伸、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān),NDRG3診斷甲狀腺乳頭狀癌的AUC為0.838,本研究結(jié)果顯示TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的甲狀腺乳頭狀癌患者NDRG3水平明顯低于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期的狀腺乳頭狀癌患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但有研究發(fā)現(xiàn)NDRG3的表達(dá)增加,與浸潤(rùn)性乳腺癌患者的浸潤(rùn)性生物學(xué)表型和預(yù)后不良有關(guān)[14]。本研究推測(cè)癌組織中NDRG3的降低或增加可能與細(xì)胞內(nèi)缺氧程度有關(guān),如果細(xì)胞持續(xù)缺氧,乳酸積累,NDRG3被誘導(dǎo)與乳酸結(jié)合增加,則其水平明顯降低;反之,如果細(xì)胞內(nèi)沒(méi)有缺氧,則NDRG3不會(huì)被病理誘導(dǎo),可以正常表達(dá)。

甲狀腺功能障礙是女性的一種流行病學(xué)相關(guān)疾病,嚴(yán)重的甲狀腺功能障礙可能與下丘腦-垂體-卵巢軸和生殖器官的直接和間接相互作用導(dǎo)致月經(jīng)失調(diào)和不孕有關(guān)。本研究通過(guò)分析發(fā)現(xiàn),與甲狀腺良性結(jié)節(jié)患者比較,甲狀腺癌患者TpoAb、TgAb、TSH、FT4/FT3水平均明顯升高,FT3水平明顯降低,認(rèn)為甲狀腺功能指標(biāo)在甲狀腺疾病早期篩查中具有一定臨床應(yīng)用價(jià)值。既往研究顯示,高胰島素血癥和較高的TpoAb水平可能是甲狀腺乳頭狀癌患者發(fā)病的危險(xiǎn)因素[15]。TgAb由甲狀腺的濾泡細(xì)胞產(chǎn)生并分泌到卵泡的頂端腔中,據(jù)報(bào)道,健康狀況下,甲狀腺會(huì)釋放少量TgAb,而在病理?xiàng)l件下,甲狀腺濾泡中的甲狀腺球蛋白溢入血液,刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體,造成血液中TgAb水平明顯升高[16]。TSH是一種二聚糖蛋白,為下丘腦-垂體-甲狀腺軸的重要參與者。既往研究發(fā)現(xiàn),較高的TSH水平可能刺激甲狀腺癌細(xì)胞的增殖及TgAb的產(chǎn)生[17]。據(jù)報(bào)道,相較于未接受抑制劑量的甲狀腺激素治療患者,接受抑制劑量的甲狀腺激素治療的患者大多數(shù)處于甲狀腺癌低風(fēng)險(xiǎn)[18]。另外,在乳腺癌的研究中證實(shí),低FT3水平可能與腫瘤侵襲密切相關(guān),其可能與細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶及其相互作用有關(guān),而FT4/FT3水平的升高可能提示患者病情發(fā)生惡化[19]。以上研究均表明甲狀腺功能指標(biāo)對(duì)評(píng)估甲狀腺乳頭狀癌具有重要作用。此外,本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),血清NDRG3與甲狀腺功能指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷甲狀腺乳頭狀癌的靈敏度和特異度均升高,表明血清NDRG3與甲狀腺功能指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌具有較高的診斷效能,優(yōu)于單一指標(biāo)檢測(cè)的診斷效能。

綜上所述,甲狀腺乳頭狀癌患者血清NDRG3與甲狀腺功能指標(biāo)呈現(xiàn)異常表達(dá),各項(xiàng)指標(biāo)可能參與了腫瘤的起源或進(jìn)展,聯(lián)合檢測(cè)血清NDRG3與甲狀腺功能指標(biāo)水平可以作為診斷甲狀腺乳頭狀癌的可靠手段。