屈艷艷 韓秋峪 孫亞薇 董蘇薇

重度子癇前期(sever preeclampsia,SPE)是妊娠期特有的疾病,其主要的臨床表現(xiàn)系妊娠20周后出現(xiàn)血壓升高,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致多臟器功能受到損害,是全球范圍內(nèi)造成圍生期母兒死亡的主要原因之一[1, 2]。目前,SPE的發(fā)病機(jī)制尚不能明確?，F(xiàn)階段普遍認(rèn)為,胎盤發(fā)育異?？赡苁荢PE發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[3]。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(never growth factor, NGF)首先作為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子被發(fā)現(xiàn),另有研究發(fā)現(xiàn)其還具有誘導(dǎo)血管生成作用[4]。合胞素1(Syncytin-1)是一種膜融合蛋白,具有介導(dǎo)識(shí)別、與宿主細(xì)胞受體結(jié)合的功能,可介導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、分化、融合[5]。胚胎在子宮內(nèi)膜層著床后一部分合體滋養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育形成胎盤,胎盤在發(fā)育過(guò)程中伴隨著絨毛及血管的發(fā)育,在妊娠過(guò)程中如果其發(fā)育異常可能影響母兒健康。本研究旨在探討SPE孕婦和正常妊娠孕婦血清及胎盤組織中NGF、Syncytin-1的表達(dá)水平及其臨床意義,以期為SPE的診療提供新的思路。

對(duì)象與方法

1.研究對(duì)象:選取2021年12月～2022年6月于徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院住院行子宮下段剖宮產(chǎn)手術(shù)分娩的重度子癇前期60例作為研究對(duì)象,參照人民衛(wèi)生出版社第9版《婦產(chǎn)科學(xué)》的SPE診斷標(biāo)準(zhǔn),將研究對(duì)象分為早發(fā)型重度子癇前期(early-onset severe preeclampsia, ESPE)30例(早發(fā)組)、晚發(fā)型重度子癇前期(late-onset severe preeclampsia, LSPE)30例(晚發(fā)組)[6]。隨機(jī)抽取同期因瘢痕子宮行剖宮產(chǎn)分娩的孕婦30例作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn):①分娩方式均為子宮下段剖宮產(chǎn)分娩的單胎妊娠,對(duì)照組孕婦系胎位不正、瘢痕子宮,此次行剖宮產(chǎn)終止妊娠者;②無(wú)慢性高血壓、腎病、癲癇、糖尿病等內(nèi)科病史;③無(wú)自身免疫相關(guān)疾病;④此次妊娠為自然受孕;⑤愿意配合進(jìn)行此次研究者。排除標(biāo)準(zhǔn):①高血壓及其他心腦血管疾病;②雙胞胎、多胞胎等多種特殊的妊娠;③合并有肝臟疾病、腎臟疾病、遺傳性疾病、感染性疾病、血液系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病;④接觸有毒化學(xué)物質(zhì)、放射線或服用致畸藥物。本研究均征求研究對(duì)象本人書面同意并經(jīng)徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理學(xué)審批號(hào):XYFY2022-KL163-01)。

2.樣本采集與保存:抽取入院時(shí)入組孕婦空腹肘靜脈血5ml,使血液在室溫狀態(tài)下自然凝固30min,以3021×g離心10min取上清液,排除溶血、污染等情況,留取標(biāo)本皆需清澈透明。保存在-80℃冰箱內(nèi)冷凍。待剖宮產(chǎn)分娩時(shí)胎盤娩出后立即取母體面中央?yún)^(qū)域的胎盤組織約1.0cm×1.0cm×1.0cm大小,避開(kāi)梗死、鈣化及出血區(qū)域,然后使用0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行充分沖洗,盡量將血漬洗凈,再用無(wú)菌紙吸干胎盤表面水分,固定于10%甲醛溶液中,常規(guī)進(jìn)行石蠟包埋切片。

3.實(shí)驗(yàn)方法:采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒(徐州在夕生物科技有限公司)測(cè)定NGF、Syncytin-1在血清中的濃度。采用NGF抗體試劑盒(武漢賽維爾生物科技有限公司)、Syncytin-1抗體試劑盒(美國(guó)Novus Biologicals公司)分別對(duì)胎盤組織中的NGF、Syncytin-1進(jìn)行免疫組化(immunohistochemistry,IHC)染色檢測(cè)。ELISA、IHC染色均嚴(yán)格按照各試劑盒說(shuō)明書使用。

結(jié) 果

1. 一般資料比較:3組孕婦的年齡、體重指數(shù)(body mass index,BMI)、孕次及產(chǎn)次比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);將每組產(chǎn)婦在分娩時(shí)的孕周進(jìn)行比較,早發(fā)組、晚發(fā)組分娩孕周早于對(duì)照組,早發(fā)組早于晚發(fā)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),詳見(jiàn)表1。

表1 3組孕婦一般資料比較

2.血清中NGF、Syncytin-1表達(dá)水平:孕婦血清中NGF、Syncytin-1的表達(dá)水平在早發(fā)組和晚發(fā)組均降低,與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);且早發(fā)組孕婦血清中NGF、Syncytin-1的表達(dá)水平低于晚發(fā)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),詳見(jiàn)表2。

表2 3組孕婦血清中NGF、Syncytin-1表達(dá)水平比較

3.胎盤組織中NGF、Syncytin-1表達(dá)水平:3組孕婦胎盤組織中均有NGF、Syncytin-1表達(dá),NGF主要集中在胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi),可見(jiàn)到黃色或棕黃色顆粒(圖1)。Syncytin-1主要表達(dá)于合體滋養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜,可見(jiàn)有黃色或棕黃色顆粒(圖2)。采用Image-pro-plus 6.0軟件對(duì)IHC圖片進(jìn)行定量分析,結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,胎盤組織中NGF、Syncytin-1在早發(fā)組及晚發(fā)組中的表達(dá)水平降低,且早發(fā)組NGF、Syncytin-1的表達(dá)水平低于晚發(fā)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),詳見(jiàn)表3。

圖1 NGF在胎盤組織中的表達(dá)(DAB染色,×200)A.對(duì)照組;B.晚發(fā)組;C.早發(fā)組

圖2 Syncytin-1在胎盤組織中的表達(dá)(DAB染色,×200)A.對(duì)照組;B.晚發(fā)組;C.早發(fā)組

表3 3組孕婦胎盤組織中NGF、Syncytin-1表達(dá)水平比較

4.血清及胎盤組織中NGF、Syncytin-1表達(dá)的相關(guān)性:NGF與Syncytin-1進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示,血清中NGF的表達(dá)與Syncytin-1呈正相關(guān)(r=0.814,P<0.001),胎盤組織中NGF的表達(dá)與Syncytin-1呈正相關(guān)(r=0.574,P<0.001),另外血清中NGF與胎盤組織中NGF、Syncytin-1呈正相關(guān)(r=0.492、0.839,P<0.001),血清中Syncytin-1與胎盤組織中NGF、Syncytin-1呈正相關(guān)(r分別為0.421、0.799,P<0.001),詳見(jiàn)表4。

表4 血清及胎盤組織中NGF、Syncytin-1的相關(guān)性分析

5.血清及胎盤組織中NGF、Syncytin-1與孕周的相關(guān)性分析:3組孕婦孕周比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),為進(jìn)一步排除由于孕周不同造成NGF、Syncytin-1表達(dá)的差異,將3組孕婦血清及胎盤組織的NGF、Syncytin-1的表達(dá)分別與孕周進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,3組孕婦NGF和Syncytin-1的表達(dá)與孕周無(wú)相關(guān)性(P>0.05),詳見(jiàn)表5。

討 論

SPE作為產(chǎn)科嚴(yán)重且常見(jiàn)的并發(fā)癥,嚴(yán)重影響母兒生命健康,使剖宮產(chǎn)率及早產(chǎn)兒發(fā)生率升高。子癇前期(preeclampsia,PE)病因尚不明確,被普遍認(rèn)可的是患者存在子宮蛻膜生理性血管重鑄障礙,使胎盤絨毛及血管發(fā)育不良,出現(xiàn)胎盤缺血、缺氧,引起全身廣泛的小血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,小動(dòng)脈痙攣,導(dǎo)致全身多器官、多系統(tǒng)功能受到損害。雖然對(duì)本病的具體病因尚未明確,但根據(jù)既往研究發(fā)現(xiàn),患有PE的孕婦胎盤的滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力下降,造成 “胎盤淺著床”;另外子宮螺旋動(dòng)脈重鑄不足,血管重鑄僅發(fā)生在蛻膜層,血管阻力增大,胎盤灌注減少[7]。

在妊娠過(guò)程中,血管生成及發(fā)育異?？蓪?dǎo)致胎盤發(fā)育受損使子宮胎盤血流減少、缺氧,引起一些列復(fù)雜的反應(yīng),導(dǎo)致妊娠期孕婦血壓升高等一系列臨床癥狀。NGF是最早發(fā)現(xiàn)的一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,它是作為促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞存活、發(fā)育及生長(zhǎng)的多功能營(yíng)養(yǎng)因子而受到關(guān)注,如今它在神經(jīng)系統(tǒng)以外的調(diào)節(jié)作用也受到了人們的普遍關(guān)注[8]。研究證實(shí),NGF可以使人真皮層微血管內(nèi)皮細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移和增殖,另外還可動(dòng)員內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cell, EPC)分化成內(nèi)皮細(xì)胞,促進(jìn)形成完整的血管內(nèi)皮[9]。研究顯示,NGF mRNA在妊娠早期以及妊娠晚期的滋養(yǎng)細(xì)胞、羊膜絨毛膜和母體蛻膜上表達(dá),且NGF在胎兒-母體界面的最佳表達(dá)已被認(rèn)為對(duì)于維持健康的妊娠至關(guān)重要[10]。Ma等[11]研究表明,NGF在PE中的表達(dá)明顯低于正常孕婦。本研究結(jié)果顯示,SPE患者血清及胎盤組織中NGF的表達(dá)均低于正常對(duì)照組,且早發(fā)組低于晚發(fā)組。由此,考慮SPE患者可能與NGF表達(dá)下降使胎盤血管發(fā)育受阻有關(guān),造成子宮胎盤缺血、缺氧,損傷血管內(nèi)皮,使全身小血管痙攣,引起患者血壓升高。

Syncytin-1是人類一種內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄缺陷病毒W(wǎng)(HERV-W)編碼的包膜蛋白,經(jīng)過(guò)人類漫長(zhǎng)進(jìn)化已經(jīng)成為人類胎盤形態(tài)發(fā)生所必需的基因[12]。Syncytin-1是一種膜融合蛋白,具有促進(jìn)細(xì)胞融合作用,在胎盤組織中促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為合體滋養(yǎng)細(xì)胞[13]。除此之外,Syncytin-1在肌肉組織促進(jìn)成肌細(xì)胞融合為肌管,最終形成肌纖維[14];在癌組織促進(jìn)癌細(xì)胞和宿主正常細(xì)胞相融合[15]。有研究證實(shí),Syncytin-1在胎盤組織中有特異表達(dá),能調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入、分化,在胎盤發(fā)育、滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)的過(guò)程中起重要作用[16]。有研究發(fā)現(xiàn),PE患者Syncytin-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平較正常孕婦明顯降低[17]?？准t芳等[18]研究顯示,Syncytin-1在SPE中的表達(dá)水平明顯下降。本研究結(jié)果顯示,Syncytin-1在SPE患者血清及胎盤組織中表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組,且早發(fā)組低于晚發(fā)組,提示其表達(dá)水平下降使胎盤絨毛發(fā)育不良,滋養(yǎng)細(xì)胞分化異常,導(dǎo)致其浸潤(rùn)能力降低,導(dǎo)致PE的發(fā)生。

本研究中3組孕婦的年齡、BMI、孕次、產(chǎn)次比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。另外根據(jù)3組孕婦血清及胎盤組織中NGF和Syncytin-1的表達(dá)與孕周的相關(guān)性分析得出,兩者的表達(dá)與孕周無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。ELISA法檢測(cè)結(jié)果顯示,正常孕婦血清中NGF及Syncytin-1表達(dá)水平較SPE患者高,LSPE患者血清中的表達(dá)水平高于ESPE患者(P<0.001);IHC法檢測(cè)結(jié)果顯示,NGF、Syncytin-1在正常孕婦胎盤組織中表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性,SPE患者的表達(dá)水平較正常孕婦降低,采用Image-pro-plus 6.0軟件對(duì)IHC圖片進(jìn)行定量分析,結(jié)果顯示,NGF、Syncytin-1在正常孕婦、LSPE及ESPE孕婦母體胎盤中的表達(dá)水平依次降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。

本研究發(fā)現(xiàn),NGF的降低可能與胎盤發(fā)育過(guò)程中子宮螺旋動(dòng)脈發(fā)育不良有關(guān),使其重鑄不足,導(dǎo)致的胎盤缺血、缺氧,促進(jìn)了疾病的發(fā)展;Syncytin-1的表達(dá)水平降低可能使胎盤發(fā)育的過(guò)程中細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞融合成合體滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生異常,合體滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力下降,造成胎盤淺著床,導(dǎo)致了疾病的進(jìn)展。另外血清及胎盤組織中NGF表達(dá)與Syncytin-1表達(dá)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果呈正相關(guān),兩者可能協(xié)同參與SPE的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述,NGF、Syncytin-1在正常孕婦、LSPE及ESPE孕婦母體血清及胎盤中的表達(dá)水平依次降低,提示NGF和Syncytin-1可能通過(guò)影響胎盤血管及絨毛的發(fā)育,作為發(fā)病機(jī)制之一參與SPE的發(fā)生、發(fā)展。在今后的研究中,筆者會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量,并結(jié)合圍生期母嬰并發(fā)癥及疾病嚴(yán)重程度進(jìn)行深入研究。