曾威?姜雯雯?馬丹丹?陳曉燕?榮小娟?馬兆霞

摘要：目的 以三苯胺取代鄰菲啰啉衍生物為主配體，合成了兩種新型的抗菌釕配合物[Ru（phen）2PMA]（PF6）2（Ru-1）和[Ru（dmphen）2PMA]（PF6）2（Ru-2）。方法 通過1H NMR、13C NMR和HRMS對兩個化合物的結(jié)構進行了表征，并通過最低抑菌濃度，生長曲線，時間殺傷曲線，生物膜形成實驗，耐藥測試，溶血毒素分泌實驗以及棋盤聯(lián)用實驗研究了化合物的抗菌活性；通過DAPI/PI染色實驗以及蛋白質(zhì)泄露實驗研究了化合物的抗菌機制；最后通過大蠟螟幼蟲研究了化合物的毒性。結(jié)果 兩個化合物在體外對金黃色葡萄球菌均具有顯著抗菌活性（MIC=0.0078～0.0156 mg/mL ），0.031 mg/mL的Ru-2能在10 min殺滅超過99.0%的細菌。在亞抑菌濃度下，Ru-2不僅能有效抑制細菌生物膜的形成和溶血毒素的分泌，還能顯著提升8種臨床常用抗生素對金黃色葡萄球菌的敏感性（FICI＜0.5）。抑菌機制研究結(jié)果表明，化合物Ru-2能破壞細菌細胞壁的完整性。此外，毒性研究也表明Ru-2具有良好的生物相容性；結(jié)論 具有膜破壞機制的金屬釕配合物在抗金黃色葡萄球菌感染方面具有潛在的應用前景。

關鍵詞：釕配合物；三苯胺衍生物；抗菌機制；抗菌活性

中圖分類號：R916文獻標志碼：A

Synthesis and antibacterial activities of ruthenium complexes with triphenylamine derivative ligands

Zeng Wei， Jiang Wenwen， Ma Dandan， Chen Xiaoyan， Rong Xiaojuan， and Ma Zhaoxia

（School of Medicine， Jiangxi University of Technology， Nanchang 330011）

Abstract Objective Two antibacterial ruthenium complexes bearing triphenylamine derivative： [Ru（phen）2PMA]（PF6）2（Ru-1） and[Ru（dmphen）2PMA]（PF6）2（Ru-2） were synthesized. Methods Two complexes were characterized by 1H NMR， 13C NMR， and HRMS. The antibacterial activity of these two compounds in vitro were studied via the minimum inhibitory concentration（MIC）， the bacterial growth curve， the time killing assay， the biofilm formation assay， the drug resistance develop assay， and the hemolytic toxin and checkboard assay. Results Two compounds have strong antibacterial activity against Staphylococcus aureus（S. aureus） in vitro（0.0078～0.0156 mg/mL）. Complex Ru-2 could kill 99.0% bacteria in 10 minutes. In addition， the formation of biofilm and the secretion of hemolytic toxin of bacteria were significantly inhibited by Ru-2 at the subinhibitory concentration. More importantly， Ru-2 showed synergistic effects with eight traditional antibiotics. Further studies on its antibacterial mechanism showed that Ru-2 destroyed bacterial cell membrane. At last， toxicity study also indicated that Ru-2 has good biocompatibility. Conclusion Ruthenium complexes with membrane-disruptive activity is a potential antibacterial strategy to combating S. aureus.

Key words Ruthenium complexes; Triphenylamine derivatives; Antibacterial mechanism; Antibacterial activity

病原性細菌感染是威脅人類生命健康的全球公共安全衛(wèi)生問題之一，其中金黃色葡萄球菌感染致死率超過80%[1-2]。更糟糕的是，由于抗生素的濫用導致了多重耐藥細菌的出現(xiàn)[3-5]。據(jù)預測，到2050年全球每年因耐藥性細菌感染而導致的死亡人數(shù)將達到1000萬人[6-7]。然而，全球大部分制藥公司已經(jīng)中止了新型抗菌藥物的研發(fā)工作[8]。文獻報道表明，近20年來僅開發(fā)并上市了6類新型抗生素[9-10]。因此，亟需開發(fā)出新型抗菌藥物來應對抗菌藥物危機。

近年來，金屬化合物類抗菌劑因其具有較強的抗多重耐藥菌活性而受到廣泛關注[11-15]。其中，金屬釕配合物是常見的金屬類抗菌化合物之一[16-18]。研究表明釕配合物能不可逆地抑制金屬-β-內(nèi)酰胺酶，從而有效恢復碳青霉烯類耐藥菌對現(xiàn)有抗菌藥物的敏感性[19]。此外，具有不同官能團修飾的釕配合物不僅對金黃色葡萄球菌具有良好的抗菌活性，而且還能增強現(xiàn)有抗生素對金黃色葡萄球菌抗菌活性[20-21]。研究表明具備三苯胺官能團的衍生物具有較好的聚集誘導發(fā)光特性，能高效殺滅各類病原菌。三苯胺基團在提升化合物的抑菌活性方面具有重要作用[22-23]。

本文設計并合成了4-（二對甲苯胺基）-1H-咪唑[4，5-f][1，10]鄰菲啰啉（PMA）為主配體的抗菌釕配合物：[Ru（phen）2PMA]（PF6）2（Ru-1）和[Ru（dmphen）2PMA]（PF6）2（Ru-2）（圖1），采用核磁共振氫譜、碳譜以及高分辨質(zhì)譜對化合物結(jié)構進行了表征。通過最低抑菌濃度，生長曲線，時間殺傷曲線，生物膜形成實驗，耐藥誘導實驗，溶血毒素實驗以及棋盤聯(lián)用實驗研究了目標化合物的體外抗菌活性；通過DAPI/PI雙染色實驗以及蛋白質(zhì)泄露實驗研究了化合物的抑菌機制，最后通過大蠟榠毒性實驗研究目標化合物生物毒性。

1 實驗部分

1.1 實驗藥品與試劑以及儀器

乙二醇、氧化鋁、乙腈、冰乙酸、醋酸銨、1，10-鄰菲啰啉、2，9-二甲基-1，10-菲啰啉、4-（二對甲苯胺基）苯甲醛、二甲苯、乙醇、六氟磷酸鉀、二甲基亞砜（化學純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；胰蛋白胨培養(yǎng)基、瓊脂、氧氟沙星、頭孢氨芐、氨芐西林鈉、多黏菌素B、四環(huán)素、阿奇霉素、氯霉素、克林霉素、DAPI染色液、PI染色液、脫纖維兔血、結(jié)晶紫和胎牛血清白蛋白（上海生工生物工程股份有限公司）。

AM-400型超導核磁共振儀（德國Bruker公司）；LCMS-IT-TOF型高分辨率質(zhì)譜儀（美國Thermo公司）；DM2500 LED熒光顯微鏡（德國Leica公司）。

1.2 化合物的合成

1.2.1 配體4-（二對甲苯胺基）-1H-咪唑[4，5-f][1，10]鄰菲啰啉（PMA）的合成

在100 mL圓底燒瓶中加入1，10-鄰菲啰啉-5，6-二酮（215.2 mg， 1.0 mmol），4-（二對甲苯胺基）苯甲醛（301.11 mg， 1.0 mmol），乙酸銨（3855.4 mg， 50.0 mmol）和40 mL冰醋酸，攪拌回流3 h。待反應液冷卻至室溫后，加80 mL水稀釋，用氨水調(diào)pH至中性，然后去除溶劑得淡黃色沉淀。粗產(chǎn)品烘干后用無水乙醇重結(jié)晶得到332.4 mg純品，產(chǎn)率為66%。1H NMR（400 MHz， CDCl3） δ：8.82（s， 4H）， 8.08（d， J=8.1 Hz， 2H）， 7.39（s， 2H）， 7.05～6.84（m， 10H）， 2.25（s， 6H）；HRMS（ESI） m/z： calcd for C33H26N5[M+H]+， 492.2188; found 492.2185。

1.2.2 配合物[Ru（phen）2PMA]（PF6）2（Ru-1）的合成

在10 mL反應管中加入PMA（50.0 mg， 0.1 mmol），[Ru（phen）2Cl2]·2H2O（59.0 mg， 0.1 mmol）和5 mL乙二醇，氮氣保護下150 ℃反應8 h， 待反應液冷卻室溫，加20 mL水稀釋后繼續(xù)添加六氟磷酸鉀（1840.0 mg， 10 mmol）得到紅色沉淀。粗品經(jīng)中性氧化鋁柱以乙腈/甲苯（V/V=1/2）為洗脫劑分離純化。洗脫液經(jīng)減壓蒸餾得到61.9 mg紅色粉末Ru-1，產(chǎn)率：65%。

1H NMR（400 MHz， DMSO-d6） δ： 14.12（s， 1H）， 9.04（s， 2H）， 8.77（d， J=8.0 Hz， 4H）， 8.39（s， 4H）， 8.10（dd， J=19.5， 6.4 Hz， 6H）， 8.00（s， 2H）， 7.84～7.70（m， 6H）， 7.19（d， J=7.9 Hz， 4H）， 7.05（t， J=8.5 Hz， 6H）， 2.31（s， 6H）. 13C NMR（100 MHz， DMSO-d6） δ： 153.10～152.17（m）， 150.06（d， J=30.7 Hz）， 149.52（s）， 147.15（d， J=8.4 Hz）， 145.40（s）， 144.92（s）， 143.91（s）， 136.82（d， J=19.2 Hz）， 133.46（s）， 130.31（d， J=14.8 Hz）， 127.81（d， J=32.0 Hz）， 127.65～127.37（m）， 127.12（s）， 126.24（s）， 125.56（d， J=54.5 Hz）， 125.26～124.99（m）， 120.09（s）， 20.39（s）， 18.46（s）. HRMS（ESI） m/z： calcd for C57H41N9Ru[M-2PF6]2+， 476.6264; found 476.6277[24]。

1.2.3 配合物[Ru（dmphen）2PMA]（PF6）2（Ru-2）的合成

配合物Ru-2的合成方法與Ru-1的合成方法一致，僅將合成原料Ru（phen）2Cl2·2H2O替換為Ru（dmphen）2Cl2·2H2O。得到62.6 mg的Ru-2，產(chǎn)率：62%。1H NMR（400 MHz， DMSO-d6） δ： 8.90（d， J=8.3 Hz， 2H）， 8.82（d， J=8.3 Hz， 2H）， 8.44～8.39（m， 3H）， 8.23（d， J=8.8 Hz， 2H）， 8.03（d， J=8.5 Hz， 2H）， 7.96（d， J=8.6 Hz， 2H）， 7.46（s， 2H）， 7.41～7.30（m， 4H）， 7.17（d， J=7.9 Hz， 5H）， 7.01（d， J=8.2 Hz， 6H）， 2.29（s， 6H）. 13C NMR（100 MHz， DMSO-d6） δ： 168.41（s）， 166.82（s）， 150.70（s）， 149.84（s）， 149.37（s）， 149.22～148.41（m）， 148.31（s）， 147.06（d， J=252.5 Hz）， 149.22～138.59（m）， 144.26（dd， J=562.0， 426.2 Hz）， 149.22～134.06（m）， 149.22～131.11（m）， 149.22～130.63（m）， 129.96（s）， 128.15（s）， 127.86（d， J=13.9 Hz）， 127.51（s）， 126.92（s）， 125.71（d， J=16.8 Hz）， 125.36（s）， 120.50（s）， 20.86（s）. HRMS（ESI） m/z： calcd for C61H49N9Ru[M-2PF6]2+， 504.6577; found 504.6591。

1.3 抑菌活性測試

1.3.1 最低抑菌濃度與生長曲線的測定

S. aureus菌株購自中國食品藥品檢定研究院。過夜培養(yǎng)的細菌用新鮮培養(yǎng)基稀釋1000倍后得到細菌懸浮液，隨后將200 ?L菌液和50 ?L不同濃度藥液加入96孔板中，在37 ℃培養(yǎng)箱中孵育20 h后檢測細菌的生長情況。此外，將含有不同濃度藥物的5 mL菌液放入37 ℃搖床中220 r/min震蕩培養(yǎng)，每隔30 min測定一次菌液的A600進而繪制細菌的生長曲線。

1.3.2 時間殺傷動力學

對數(shù)期生長的金黃色葡萄球菌用新鮮培養(yǎng)基稀釋1000倍得到細菌懸液。加入受試配合物后在37℃下孵育，在不同時間點取100 μL樣液涂布于TSB瓊脂平板上，以測定活菌數(shù)量。最后，通過活細菌數(shù)量繪制了時間-殺傷曲線。

1.3.3 溶血實驗

配合物Ru-2與金黃色葡萄球菌在37℃下孵育18 h后，離心收集上清液；將50 ?L兔血細胞和150 ?L的細菌上清液添加到1 mL PBS緩沖液中，然后在37 ℃下繼續(xù)孵育30 min。離心沉淀紅細胞，取200 ?L上清液于96孔板中，通過測定540 nm處的吸光度值評估溶血活性。

1.3.4 生物膜形成的檢測

過夜培養(yǎng)的金黃色葡萄球菌用新鮮培養(yǎng)基稀釋1000倍后加入Ru-2，取2 mL細菌混懸液加入到24孔板中。37 ℃下培養(yǎng)48 h后，去除浮游細菌后用PBS清洗3次。將24孔板在室溫下干燥過夜，然后用0.1%結(jié)晶紫溶液染色30 min，去除結(jié)晶紫溶液，用PBS再次洗滌平板3次，晾干。隨后，用冰乙酸溶解附著在生物膜上的結(jié)晶紫，并測量595 nm處的吸光度。

1.3.5 棋盤聯(lián)用實驗

金黃色葡萄球菌培養(yǎng)過夜后用新鮮TSB稀釋1000倍，然后將200 ?L稀釋的細菌懸液、25 ?L不同濃度的Ru-2和25 ?L不同濃度的抗生素混合在96孔板中，并在37 ℃下進一步培養(yǎng)20 h后檢測藥物MIC值的變化。使用GraphPad軟件繪制細菌生長熱圖和等值線圖。

1.3.6 耐藥實驗研究

從0.5×MIC培養(yǎng)孔中取10 ?L的細菌懸浮液加入新鮮TSB培養(yǎng)基中，然后在37 ℃下再培養(yǎng)6 h。由此產(chǎn)生的細菌被再次用于檢測藥物的MIC值。重復20次并記錄MIC值的變化。

1.3.7 大蠟螟幼蟲毒性實驗

注射藥物前，注射部位用乙醇消毒，隨后用微量注射器注射5 ?L不同劑量的藥物進入大蠟螟幼蟲體內(nèi)（n=10），然后連續(xù)7 d記錄大蠟螟幼蟲的存活率。

1.3.8 細菌染色實驗

離心收集對數(shù)期生長的細菌，然后用PBS洗滌并稀釋至A600=0.3。然后向細菌懸浮液中添加Ru-2（1×MIC）后在37 ℃下培養(yǎng)2 h。離心去除上清液后用PBS洗滌細菌3次，最終懸浮在500 μL PBS中。隨后添加20 μL DiSC3（5）（30 μmol/L），在黑暗條件下培養(yǎng)1 h。對于DAPI和PI染色實驗，先添加20 μL DAPI（10 μg/mL），在黑暗條件下培養(yǎng)15 min后，向同一試管中添加20 μL PI（15 μg/mL），并在黑暗條件下培養(yǎng)15 min。然后離心除去上清液， 用500 μL PBS重新懸浮后取20 μL樣品懸浮在玻片上，并在熒光細胞成像儀下觀察。

1.3.9 細菌膜完整性研究

金黃色葡萄球菌懸浮液（A600=0.3）在配合物存在下37 ℃下培養(yǎng)2 h，然后用0.22 μm微孔濾膜過濾細菌懸浮液以獲取上清液。隨后測量上清液在260 nm處的吸光度，以測定DNA的泄漏量。

2 結(jié)果與討論

2.1 體外抗菌活性

本文以4-（二對甲苯胺基）-1H-咪唑[4，5-f][1，10]鄰菲啰啉為主配體合成了兩個釕配物，化合物的純度和結(jié)構經(jīng)高分辨率質(zhì)譜（HRMS）、核磁共振氫譜和碳譜進行了表征。首先，我們測定了兩個釕配合物對金黃色葡萄球菌的最小抑制濃度（MIC）。結(jié)果如表1所示，兩個釕配合物均具有顯著的抗菌活性（MIC：0.0078～0.0156 mg/mL），其中化合物Ru-2的抑菌濃度明顯低于Ru-1。此外，兩種配合物的抗菌活性呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性。在最低抑菌濃度的化合物存在時，未檢測到細菌的生長（圖2）。

2.2 殺傷曲線的測定

本文通過時間殺傷動力學實驗進一步研究了兩種配合物（Ru-1、Ru-2）的快速殺菌活性。結(jié)果如圖3所示，配合物Ru-2在8×MIC條件下僅需要半小時就能殺死≥99.9%的金黃色葡萄球菌。而在相同條件下，配合物Ru-1殺死≥99.9%的細菌需要2 h。這一結(jié)果表明兩個化合物均具有快速殺菌活性，而Ru-2的殺菌活性較強。

2.3 抑制生物膜的形成

細菌生物膜是由細菌聚集形成的黏性結(jié)構，可以保護細菌細胞免受外部影響，并有效抵抗抗生素的作用[25]，臨床上80%左右的惡性感染與細菌形成生物膜有關[26]。為此，本文進一步研究了化合物Ru-2抑制生物膜的能力。結(jié)果如圖4所示，當加入亞抑菌濃度的Ru-2之后，細菌生物膜的形成量明顯減少。0.25×MIC的Ru-2使生物膜的形成量減少了38.4%，而0.5×MIC的Ru-2使生物膜的形成量減少了77.6%，0.75×MIC的Ru-2使生物膜的形成量減少了89.9%。這一結(jié)果表明Ru-2在亞抑菌濃度下可以顯著抑制細菌生物膜的形成。

2.4 細菌對Ru-2耐藥性的探究

細菌生物膜的形成在細菌對藥物產(chǎn)生耐藥性方面起著重要的作用，由于化合物Ru-2在亞抑菌濃度下能有效抑制細菌生物膜的形成，因此本文進一步研究了細菌是否容易對化合物Ru-2產(chǎn)生耐藥性。金黃色葡萄球菌在化合物Ru-2（0.5×MIC）存在條件下連續(xù)誘導20代后檢測化合物抑菌能力的變化情況，并以臨床常用的藥物氨芐西林鈉作為對照。結(jié)果如圖5所示，連續(xù)作用20代后的Ru-2的MIC僅增加4倍。在相同條件下，氨芐西林鈉的MIC值增加了512倍。這一結(jié)果表明細菌不容易對Ru-2產(chǎn)生耐藥性。

2.5 抑制溶血毒素的分泌

研究表明，金黃色葡萄球菌的致病性取決于大量毒力因子的分泌[27]。其中，α-溶血酶素是金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的重要毒力因子之一[28]。為了進一步評價化合物Ru-2是否能抑制細菌毒素的分泌，本文使用兔紅細胞溶血實驗研究了金黃色葡萄球菌與Ru-2孵育后α-溶血素的分泌量。與0.25×MIC或0.5×MIC的Ru-2孵育后，金黃色葡萄球菌的α-溶血素分泌量與空白相比顯著減少，其中0.25×MIC的配合物存在時下降40.8%，0.5×MIC的配合物存在時下降82.2%，以上結(jié)果表明Ru-2能在亞抑菌濃度下能夠抑制細菌溶血毒素的產(chǎn)生（圖6）。

2.6 Ru-2與常用抗生素的聯(lián)用活性

兩種或兩種以上藥物的聯(lián)合應用是有效治療耐性細菌感染的有效手段之一[29-30]。為了評估釕配合物Ru-2是否可以用作抗生素佐劑使用，本文采用棋盤格法研究了Ru-2與常用抗生素的協(xié)同作用。在此我們共測試了6種不同類別的常用抗生素，包括β-內(nèi)酰胺類抗生素頭孢氨芐和氨芐西林鈉、喹諾酮類抗生素氧氟沙星、氯霉素、克林霉素、四環(huán)素、萬古霉素、阿奇霉素以及多黏菌素B?；衔颮u-2與抗生素的聯(lián)用效果可通過抑菌濃度指數(shù)（FICI）進行判斷，當FICI>2時，說明Ru-2與抗生素表現(xiàn)出拮抗作用；當FICI≤0.5時，表明Ru-2與抗生素具有聯(lián)合作用。實驗結(jié)果如圖7所示，Ru-2與氧氟沙星（FICI=0.375）、頭孢氨芐（FICI=0.375）、氨芐西林鈉（FICI=0.375）、多黏菌素B（FICI=0.25）、四環(huán)素（FICI=0.5）、阿奇霉素（FICI=0.375）、氯霉素（FICI=0.375）、克林霉素（FICI=0.375）等均具有聯(lián)用效果。這一結(jié)果表明Ru-2與喹諾酮類、β-內(nèi)酰胺類、糖肽類、大環(huán)類酯、氯霉素、林可霉素類抗生素具有協(xié)同作用，有作為抗菌佐劑應用的潛力。

2.7 抗菌機制的探究

在本研究中，將三苯胺基團引入到釕配合物上的目的之一是增加化合物對細菌膜的破壞能力。為此，本文采用了一系列實驗來探究Ru-2與細菌膜之間的相互作用。首先，用熒光染料4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）和碘化丙啶（PI）探究了Ru-2對膜完整性的影響。DAPI能進入到細胞內(nèi)與DNA的結(jié)合，發(fā)出藍光[31-32]，而PI只能透過細胞膜破壞的細菌，進而與DNA結(jié)合產(chǎn)生紅色熒光。實驗結(jié)果表明用Ru-2（1×MIC）孵育2 h，PI染色后金黃色葡萄球菌出現(xiàn)紅色熒光，DAPI染色后出現(xiàn)藍色熒光（圖8）。而對照組未產(chǎn)生任何紅色熒光，這一結(jié)果表明Ru-2能有效破壞細菌細胞膜的完整性。

為了進一步檢測細菌膜的破損情況，本文通過鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）來直接監(jiān)測β-D-半乳糖苷酶從細菌破損后的膜泄露出來的情況。β-半乳糖苷酶是一種能特異性催化鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）轉(zhuǎn)化生成黃色鄰硝基酚的細菌胞內(nèi)酶，當細菌膜破損后泄露出來的酶可以通過鄰硝基酚的生成量來檢測，而鄰硝基酚在415 nm處有最大吸收。實驗結(jié)果顯示，在化合物Ru-2作用下細菌培養(yǎng)液在415 nm處的吸收顯著上升，提示鄰硝基酚的大量生成。這說明β-D-半乳糖苷酶已經(jīng)從細菌體內(nèi)泄露出來。有趣的是，萬古霉素處理與PBS處理組并沒有檢測到明顯的β-D-半乳糖苷酶泄露（圖9）。

本文還通過檢測細胞內(nèi)核酸的泄漏來監(jiān)測細菌膜的破壞程度。實驗結(jié)果顯示，在4×MIC的濃度條件下，萬古霉素處理組并沒有觀察到有明顯的核酸從細胞中滲漏出來，這表明萬古霉素不是通過破壞膜的完整性來殺死細菌。相反，僅用1×MIC的化合物Ru-2孵育后，觀察到了金黃色葡萄球菌內(nèi)部的核酸從細胞內(nèi)明顯地滲漏出來（圖10）。以上這些結(jié)果都表明，化合物Ru-2能通過破壞細菌細胞膜的完整性來有效地殺死金黃色葡萄球菌。

2.8 化合物Ru-2的毒性研究

本文進一步通過大蠟榠蟲的存活率對Ru-2的毒性進行了評價。這種昆蟲被廣泛用于毒性篩選，因為它的生理和免疫系統(tǒng)與哺乳動物極為相似[30]。實驗結(jié)果如圖11所示，化合物Ru-2（128～512 mg/kg）處理后的大蠟榠蟲的存活率幾乎與PBS處理組相同，且與臨床常用的抗生素氨芐西林無明顯差異。這一結(jié)果表明，化合物Ru-2具有高生物相容性和低毒性。

3 結(jié)論

本文設計并合成了具有膜破壞機制的兩個抗菌釕配合物：[Ru（phen）2PMA]（PF6）2（Ru-1）和[Ru（dmphen）2PMA]（PF6）2（Ru-2）。其中，活性好的化合物Ru-2不僅可以快速殺死細菌，而且細菌不易對其產(chǎn)生耐藥性?？咕鷻C理研究表明，化合物Ru-2能有效破壞細菌膜的完整性。此外，在亞抑菌濃度下Ru-2能有效抑制金黃色葡萄球菌的生物膜形成以及溶血毒素分泌。更重要的是Ru-2與臨床上8種常用抗生素具有聯(lián)用效果，能有效增強其抗菌活性。另外，Ru-2具有高生物相容性和低毒性?？傊芯拷Y(jié)果表明Ru-2不僅具有良好的體外抗菌效果，而且具有作為抗生素佐劑的潛力。本次研究結(jié)果為以后開發(fā)新型抗菌劑提供了一定基礎與思路。

參 考 文 獻

Nannini E， Murrary B E， Arias C A. Resistance or decreased susceptibility to glycopeptides， daptomycin， and linezolid in methicillin-resistant Staphylococcus aureus[J]. Curr Opin Pharmacol， 2010， 10（5）： 516-521.

Asgeirsson H， Thalme A， Weiland O. Staphylococcus aureus bacteraemia and endocarditis-epidemiology and outcome： A review[J]. Infect Dis， 2018， 50（3）： 175-195.

Song M， Liu Y， Huang X， et al. A broad-spectrum antibiotic adjuvant reverses multidrug-resistant Gram-negative pathogens[J]. Nat Microbiol， 2020， 5（8）： 1040-1050.

De Oliveira D M P， Kidd B M， Harris P N A， et al. Antimicrobial resistance in ESKAPE pathogens[J]. Microbiol Rev， 2020， 33（3）： e00181-e00230.

Laxminarayan R， Boeckel T V， Frost I， et al. The lancet infectious diseases commission on antimicrobial resistance： 6 years later[J]. Lancet Infect Dis， 2020， 20（4）： e51-e60.

Abouelhassan Y， Grarrison A T， Yang H， et al. Recent progress in natural-product-inspired programs aimed to address antibiotic resistance and tolerance[J]. J Med Chem， 2019， 62（17）： 7618-7642.

Piddock L J V. Reflecting on the final report of the ONeill review on antimicrobial resistance[J]. Lancet Infect Dis， 2016， 16（7）： 767-768.

martin Ⅱ J K， Sheehan J P， Bratton B P， et al. A dual-mechanism antibiotic kills Gram-negative bacteria and avoids drug resistance[J]. Cell， 2020， 181， 1-15.

Butler M S， Blaskovich M A， Cooper M A. Antibiotics in the clinical pipeline at the end of 2015[J]. J Ant（Tokyo）， 2017， 70（1）： 3-24.

Martin J K， Sheehan J P， Bratton B P， et al. A dual-mechanism antibiotic kills Gram-negative bacteria and avoids drug resistance[J]. Cell， 2020， 181（7）： 1-15.

Liang J， Sun D J， Yang Y Y， et al. Discovery of metal-based complexes as promising antimicrobial agents[J]. Eur J Med Chem， 2021， 224（1）： 113696.

Evans A， Kavanagh K A， Evaluation of metal-based antimicrobial compounds for the treatment of bacterial pathogens[J]. J Med Microbiol， 2021， 70（5）： 1363.

Scarim C B， Farias R L， Netto A V G， et al. Recent advances in drug discovery against Mycobacterium tuberculosis： Metal-based complexes[J]. Eur J Med Chem， 2021， 214： 113166.

Harbut M B， Vilchèze C， Luo X Z， et al. Auranofin exerts broad-spectrum bactericidal activities by targeting thiol-redox homeostasis[J]. Proc Natl Acad Sci USA， 2015， 112（14）： 4453-4458.

Usman M， Husain F M， Khan R A， et al. Organometallic ruthenium（η6-p-cymene） complexes interfering with quorum sensing and biofilm formation： An anti-infective approach to combat multidrug-resistance in bacteria[J]. New J Chem， 2021， 45（4）： 2184-2199.

Varney A M， Smitten K L， Thomas J A， et al. Transcriptomic analysis of the activity and mechanism of action of a ruthenium（II）-based antimicrobial that induces minimal evolution of pathogen resistance[J]. ACS Pharmacol Transl Sci， 2021， 4（1）： 168-178.

Singh A， Barman P. Recent advances in schi Base ruthenium metal complexes： Synthesis and applications[J]. Top Curr Chem， 2021， 379： 29.

Lei X L， Qiu L， Lan M， et al. Antibacterial photodynamic peptides for staphylococcal skin infection[J]. Biomater Sci， 2020， 8（23）： 6695-6702.

Chen C， Yang K W. Ruthenium complexes as prospective inhibitors of metallo-β-lactamases to reverse carbapenem resistance[J]. Dalton Trans， 2020， 49（40）： 14099-14105.

Liao X W， Jiang G J， Wang J T， et al. Two ruthenium polypyridyl complexes functionalized with thiophen： synthesis and antibacterial activity against Staphylococcus aureus[J]. New J Chem， 2020， 44（40）： 17215-17221.

Liao X W， Liu L H， Tan Y H， et al. Synthesis of ruthenium complexes functionalized with ben-zothiophene and their antibacterial activity against Staphylococcus aureus[J]. Dalton Trans， 2021， 50（16）： 5607-5616.

Brunel F， Lautard C， Garzino F， et al. Antibacterial activities of fluorescent nano assembled triphenylamine phosphonium ionic liquids[J]. Bioorg Med Chem Lett， 2016， 26（15）： 3770-3773.

Li T T， Wu Y， Cai W T， et al. Vision defense： Efficient antibacterial aiegens induced early immune response for bacterial endophthalmitis[J]. Adv Sci， 2022， 9（25）： e2202485.

Wen J W， Xia M， Cai P T， et al. Induction and monitoring of DNA phase separation in living cells by a light-switching ruthenium complex[J]. J Am Chem Soc， 2021， 143： 11370-11381.

Conti L， Mengoni A， Giacomazzo G E， et al. Exploring the potential of highly charged Ru（II）- and heteronuclear Ru（II）/ Cu（II）-polypyridyl complexes as antimicrobial agents[J]. J Inorg Biochem 2021， 220（26）： 111467.

Steinhuber A， Landmann R， Goerke C， et al. Bioluminescence imaging to study the promoter activity of hla of Staphylococcus aureus in vitro and in vivo[J]. Int J Med Microbiol， 2008， 298（7-8）： 599-605.

Teng Z H， Shi D X， Liu H Y， et al. Lysionotin attenuates Staphylococcus aureus pathogenicity by inhibiting α-toxin expression[J]. Appl Microbiol Biotechnol， 2017， 101（17）： 6697-6703.

Berti A D， Hirsch E B. Tolerance to antibiotics affects response[J]. Science， 2020， 367（6474）： 141-143.

Ding X， Yang C， Moreira W， et al. A macromolecule reversing antibiotic resistance phenotype and repurposing drugs as potent antibiotics[J]. Adv Sci， 2020， 7（17）： 2198-3844.

Brochado A R， Telzerow A， Bobonis J， et al. Species-specific activity of antibacterial drug combinations[J]. Nature， 2018， 559： 259-263.

Guo Y， Hou E， Wen T Y， et al. Development of membrane-active honokiol/magnolol amphiphiles as potent antibacterial agents against methicillin-resistant Staphylococcus aureus（MRSA）[J]. J Med Chem， 2021， 64（17）： 12903-12916.

Sun H， Huang S Y， Jeyakkumar P， et al. Natural berberine-derived azolyl ethanols as new structural antibacterial agents against drug-resistant Escherichia coli[J]. J Med Chem， 2022， 65（1）： 436-459.

收稿日期：2022-11-16

基金項目：江西省教育廳科技項目（No. GJJ202015， No. GJJ202016）；江西省衛(wèi)健委科技計劃項目（No. 202211352）；江西科技學院自然科學基金項目（No. ZR2002）

作者簡介：曾威，男，生于1987年，碩士，講師，主要研究方向為抗菌活性物質(zhì)的設計與篩選，E-mail： 675926906@qq.com