周雅芳,張堅(jiān)杯

注射用環(huán)磷腺苷葡胺是環(huán)磷腺苷與葡甲胺按摩爾比1∶1配制的鹽,其主要成分為環(huán)磷腺苷,是一種非洋地黃類強(qiáng)心劑,臨床常用于治療心力衰竭、心肌炎、病竇綜合征、冠心病及心肌病,也可用于心律失常等心血管疾病的輔助治療。根據(jù)藥品說明書,注射用環(huán)磷腺苷葡胺的溶媒為5%葡萄糖注射液200～500 ml,部分醫(yī)院常選用0.9%氯化鈉注射液作為溶媒[1-2]。注射用環(huán)磷腺苷葡胺超說明書選用0.9%氯化鈉注射液稀釋是否安全、有效尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道。本文參照《國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)》[3]《中華人民共和國藥典：2020年版二部》[4]中有關(guān)測定方法測定注射用環(huán)磷腺苷葡胺在5%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液溶媒中的含量和雜質(zhì)變化,并測定藥品在上述2種溶媒中不溶性微粒和pH值,比較注射用環(huán)磷腺苷葡胺與5%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液配伍的穩(wěn)定性,以期為注射用環(huán)磷腺苷葡胺溶媒的選擇提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀,色譜柱為WatersXBridgeC18(250 mm×4.6 mm,5 μm);XP205型電子分析天平;FE20型PH計(jì);APSS-2000不溶性微粒儀。試劑：乙腈(色譜純),磷酸二氫鉀(分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)),四丁基溴化銨(分析純),磷酸(分析純),環(huán)磷腺苷對(duì)照品(中國藥品生物制品鑒定所,生產(chǎn)批號(hào)：140709-201606),注射用環(huán)磷腺苷葡胺(無錫凱夫制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn),生產(chǎn)批號(hào)：20061093),0.9%氯化鈉注射液500 ml(安徽雙鶴藥業(yè)生產(chǎn),生產(chǎn)批號(hào)：21032101V),5%葡萄糖注射液500 ml(安徽雙鶴藥業(yè)生產(chǎn),生產(chǎn)批號(hào)：21011610V),水為純化水。

1.2 HPLC法

1.2.1 色譜條件：色譜柱為WatersXBridgeC18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相：pH 4.3磷酸二氫鉀緩沖液(取磷酸二氫鉀6.8 g、四丁基溴化銨3.2 g加水溶解并稀釋至1 000 ml,混勻,用磷酸調(diào)pH值至4.3),乙腈為85∶15(V/V),流速為1.0 ml/min,檢測波長為258 nm,柱溫為40 ℃,進(jìn)樣量20 μl。

1.2.2 溶液的制備

1.2.2.1 對(duì)照品溶液：精密稱取環(huán)磷腺苷對(duì)照品適量,用純化水配制成0.1 mg/ml的含量對(duì)照品溶液。

1.2.2.2 供試品溶液：精密稱取2份注射用環(huán)磷腺苷葡胺16 mg(含環(huán)磷腺苷10 mg),分別置入100 ml容量瓶中,分別加入0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液適量溶解,再用相應(yīng)的溶媒定容至刻度,搖勻即得供試品溶液。

1.2.2.3 雜質(zhì)溶液：精密稱取2份注射用環(huán)磷腺苷葡胺30 mg,分別置入50 ml容量瓶中,分別加入0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液適量溶解,再用相應(yīng)的溶媒定容至刻度,搖勻,即得雜質(zhì)供試品溶液。分別移取上述2種溶液各1 ml,分別置入2個(gè)100 ml容量瓶中,加水稀釋定容至刻度,搖勻,即得雜質(zhì)自身對(duì)照溶液。將供試品溶液在常溫下放置0、2、4、6、12、24 h,在檢測條件下進(jìn)樣,考察雜質(zhì)含量是否增加或出現(xiàn)新的雜質(zhì),同時(shí)考查在低溫(2～8 ℃)和高溫(35 ℃)下放置4、24 h雜質(zhì)變化。

1.2.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性溶液：精密稱取環(huán)磷腺苷對(duì)照品10 mg,加純化水5 ml溶解,加1 mol/L的鹽酸溶液1 ml,水浴加熱30 min后冷卻,用氫氧化鈉將溶液酸堿度調(diào)節(jié)至中性,用水稀釋制成0.2 mg/ml的溶液,即為系統(tǒng)適應(yīng)性溶液。

1.3 方法學(xué)驗(yàn)證

1.3.1 專屬性試驗(yàn)：取空白溶液(流動(dòng)相)、對(duì)照品溶液、供試品溶液按色譜條件分別進(jìn)樣,記錄色譜圖,供試品溶液與對(duì)照品溶液的主峰保留時(shí)間一致,空白溶液對(duì)環(huán)磷腺苷峰無干擾,峰形對(duì)稱性好,見圖1。

注：A為空白溶液,B為對(duì)照品溶液

1.3.2 雜質(zhì)系統(tǒng)適應(yīng)性：配制1份系統(tǒng)適應(yīng)性溶液,在色譜條件下,進(jìn)空白溶液(稀釋劑)1及以上針、系統(tǒng)適應(yīng)性溶液1針,主峰理論塔板數(shù)約為5 800,拖尾因子約為1.1。

1.3.3 雜質(zhì)線性關(guān)系：配制環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別約為定量限(LOQ)及2.5、4.0、5.0、6.0、7.5 μg/ml(相當(dāng)于雜質(zhì)限度的LOQ、50%、80%、100%、120%、150%),在方法描述的檢測條件下,每個(gè)溶液依次平行進(jìn)樣2針,可知環(huán)磷腺苷濃度在0.25～7.49 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

1.3.4 雜質(zhì)重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)樣品,按樣品測定方法配制6份雜質(zhì)供試品溶液,按照樣品測定項(xiàng)下的方法測定環(huán)磷腺苷的雜質(zhì),得出雜質(zhì)均<檢出限(0.08 μg/ml)。

1.3.5 雜質(zhì)準(zhǔn)確度(回收率)：在方法描述的檢測條件下,3份雜質(zhì)供試品溶液依次平行進(jìn)樣3針,測出雜質(zhì)平均回收率為99.41%(RSD=0.41%)。

1.3.6 含量準(zhǔn)確度(回收率)：精密稱取3份注射用環(huán)磷腺苷葡胺8 mg,分別置入100 ml容量瓶內(nèi),再分別精密稱取環(huán)磷腺苷對(duì)照品3、5、7 mg至容量瓶中,用純化水溶解并稀釋至刻度,搖勻。在檢測條件下,3份溶液依次平行進(jìn)樣3針,測出含量平均回收率為99.74%(RSD=0.50%)。

2 結(jié) 果

2.1 注射用環(huán)磷腺苷葡胺在不同溶媒中含量變化 供試品溶液在常溫下放置0、2、4、6、12、24 h,在檢測條件下進(jìn)樣,可見注射用環(huán)磷腺苷葡胺含量在0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液中24 h內(nèi)無明顯變化,且樣品含量在低溫(2～8 ℃)、高溫(35 ℃)下在0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液中放置0、4、24 h無明顯變化,見表1～2。

表1 常溫下放置0、2、4、6、12、24 h不同溶媒樣品含量變化

表2 低溫(2～8 ℃)、高溫(35 ℃)下放置0、4、24 h不同溶媒樣品含量變化

2.2 不同溶媒中雜質(zhì)變化 在常溫下放置0、2、4、6、12、24 h及低溫、高溫下放置4、24 h均未檢出雜質(zhì),表明環(huán)磷腺苷在0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液中均穩(wěn)定,部分雜質(zhì)色譜圖見圖2。

注：A為空白溶液,B為環(huán)磷腺苷在常溫下0.9%氯化鈉溶液中放置24 h,C為環(huán)磷腺苷在常溫下5%葡萄糖注射液中放置24 h,D為環(huán)磷腺苷在高溫下0.9%氯化鈉溶液中放置24 h,E為環(huán)磷腺苷在高溫下5%葡萄糖注射液中放置24 h

2.3 不同溶媒中不溶性微粒和pH值 分別取室溫下放置0、2、4、6、12、24 h的溶液適量,采用光阻法[4]測定各樣品溶液中不溶性微粒,可見隨著放置時(shí)間的延長,每1 ml含≥2 μm、≥5 μm、≥10 μm的微粒數(shù)略有增加,每1 ml含≥25 μm的微粒數(shù)幾乎無變化,見表3。且每1 ml含有≥10 μm和≥25 μm的微粒數(shù)均符合《中華人民共和國藥典：2020年版二部》[4]規(guī)定。

表3 室溫下不同放置時(shí)間樣品不溶性微粒和pH值變化

3 討 論

注射用環(huán)磷腺苷葡胺是環(huán)磷腺苷與葡甲胺按照摩爾比1∶1的鹽,葡甲胺為助溶劑,其主要成分為環(huán)磷腺苷,且葡甲胺在反相色譜柱上基本不保留[5],《國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)》[3]通過HPLC法測定環(huán)磷腺苷含量,再根據(jù)環(huán)磷腺苷與環(huán)磷腺苷葡胺的分子量換算環(huán)磷腺苷葡胺的含量,但劉永成等[5]認(rèn)為這種含量測定方法不合理,環(huán)磷腺苷和葡甲胺應(yīng)分別測定。尹菁等[6]研究表明,實(shí)際樣品中環(huán)磷腺苷與葡甲胺的量并非完全是等摩爾關(guān)系,少數(shù)企業(yè)的產(chǎn)品中葡甲胺含量超出處方量的90%～110%,因此有必要增加葡甲胺含量的檢查,控制其含量范圍?？紤]到國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)是官方標(biāo)準(zhǔn),故本研究參考《國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)》[3]《中華人民共和國藥典：2020年版二部》[4]測定方法檢測環(huán)磷腺苷葡胺的含量和雜質(zhì)。環(huán)磷腺苷葡胺中環(huán)磷腺苷與葡甲胺的摩爾比為1∶1,環(huán)磷腺苷與環(huán)磷腺苷葡胺的分子量比值為0.627 8,故環(huán)磷腺苷與環(huán)磷腺苷葡胺的轉(zhuǎn)換比為0.627 8[7]。

《中華人民共和國藥典：2020年版四部》[8]規(guī)定,標(biāo)示裝量為100 ml或100 ml以上的靜脈用注射液除另有規(guī)定外,每1 ml中含10 μm及以上的微粒數(shù)不得過25粒,含25 μm及以上的微粒數(shù)不得過3粒;標(biāo)示裝量為100 ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料藥除另有規(guī)定外,每個(gè)供試品容器中含10 μm及以上的微粒數(shù)不得過6 000粒,含25 μm及以上的微粒數(shù)不得過600粒。本研究結(jié)果顯示,隨著放置時(shí)間的延長,每1 ml含≥2 μm、≥5 μm、≥10 μm的微粒數(shù)略有增加,每1 ml含≥25 μm的微粒數(shù)幾乎無變化,且每1 ml含有≥10 μm和≥25 μm的微粒數(shù)均符合《中華人民共和國藥典：2020年版四部》[8]規(guī)定。

本研究結(jié)果顯示,注射用環(huán)磷腺苷葡胺分別在0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液常溫條件下放置2、4、6、12、24 h和低溫、高溫條件下放置4、24 h的含量均無明顯變化,并未檢出雜質(zhì),且在上述2種不同溶媒中pH值無明顯變化,不溶性微粒也符合《中華人民共和國藥典：2020年版二部》[4]規(guī)定,表明注射用環(huán)磷腺苷葡胺在0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液中均穩(wěn)定。趙雯雯等[9]研究表明,異甘草酸鎂200 mg與注射用環(huán)磷腺苷葡胺180 mg配伍溶于250 ml的5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液、轉(zhuǎn)化糖注射液,24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好,推斷出注射用環(huán)磷腺苷葡胺在0.9%氯化鈉注射液中是穩(wěn)定的,本研究結(jié)果與之一致。

綜上所述,注射用環(huán)磷腺苷葡胺超說明書使用0.9%氯化鈉注射液稀釋是安全、有效的,但由于藥品說明書具有法律效力,超說明書用藥存在法律風(fēng)險(xiǎn),因此在使用0.9%氯化鈉注射液時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎。

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