陳光遠，邊毓堯，王秀艷

摘要 目的：探討長鏈非編碼RNA核旁斑組裝轉(zhuǎn)錄本1（lncRNA NEAT1）在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導的血管內(nèi)皮細胞損傷中的分子機制和功能。方法：收集健康人和動脈粥樣硬化（AS）病人血液標本并通過實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）檢測血清中l(wèi)ncRNA NEAT1、微小RNA-424-5p（miR-424-5p）和ETS域蛋白4（ELK4）mRNA表達水平。體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC），qRT-PCR和蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測細胞中l(wèi)ncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4表達情況；細胞計數(shù)試劑盒（CCK-8）法和膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）法檢測HUVEC細胞增殖活力和凋亡情況；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定HUVEC中乳酸脫氫酶（LDH）釋放量、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素（IL）-1β含量、脂蛋白磷脂酶A2（Lp-PLA2）和C反應蛋白（CRP）水平；采用雙熒光素酶報告基因測定lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4之間的靶向相互作用。進行動物實驗以評估lncRNA NEAT1在體內(nèi)AS進展中的作用。結(jié)果：lncRNA NEAT1在AS病人血清和ox-LDL誘導的HUVEC中顯著上調(diào)（P＜0.05）。lncRNA NEAT1的沉默可削弱ox-LDL引發(fā)的細胞毒性，降低Lp-PLA2和CRP水平，并減少ApoE-/-小鼠的脂質(zhì)異常分泌（P＜0.05）。miR-424-5p是lncRNA NEAT1在調(diào)節(jié)ox-LDL誘導的HUVEC損傷中的功能介質(zhì)，ELK4是miR-424-5p的直接靶標（P＜0.05）。miR-424-5p的抑制或ELK4的過表達逆轉(zhuǎn)了lncRNA NEAT1沉默對ox-LDL誘導的HUVEC細胞損傷的影響（P＜0.05）。結(jié)論：沉默lncRNA NEAT1可通過調(diào)控miR-424-5p/ELK4軸保護HUVEC免受ox-LDL觸發(fā)的細胞毒性，降低Lp-PLA2和CRP水平。

關(guān)鍵詞動脈粥樣硬化；長鏈非編碼RNA核旁斑組裝轉(zhuǎn)錄本1，lncRNA NEAT1；氧化型低密度脂蛋白；微小RNA-424-5p；ETS域蛋白4；實驗研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.04.012

Effect of lncRNA NEAT1 on ox-LDL-induced Vascular Endothelial Cell Injury， Lp-PLA2 and CRP Levels by Regulating miR-424-5p/ELK4 Axis

CHEN Guangyuan， BIAN Yuyao， WANG Xiuyan

Inner Mongolia People′s Hospital， Hohhot 010017， Inner Mongolia， China

Corresponding AuthorBIAN Yuyao， E-mail： 55029360@qq.com

AbstractObjective：To investigate the molecular mechanism and function of long non-coding RNA nuclear paraspeckle assembly transcript 1（lncRNA NEAT1） in oxidative low-density lipoprotein（ox-LDL）-induced vascular endothelial cell injury.Methods：Blood samples of healthy people and atherosclerosis（AS） patients were collected and serum lncRNA NEAT1，micrornA-424-5p（miR-424-5p） and ETS domain protein 4（ELK4） mRNA expression levels were detected by real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction（qRT-PCR）.Human umbilical vein endothelial cells（HUVEC） were cultured in vitro，and the expressions of lncRNA NEAT1，miR-424-5p and ELK4 were detected by qRT-PCR and Western Blot.Cell counting kit（CCK-8） and Annexin V-FITC/PI method were used to detect the proliferation and apoptosis of HUVEC cells.Lactate dehydrogenase（LDH） release，tumor necrosis factor-α（TNF-α） and interleukin-1β contents，lipoprotein phospholipase A2（Lp-PLA2） and C-reactive protein（CRP） levels in HUVEC were determined by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.Targeting interactions between lncRNA NEAT1，miR-424-5p and ELK4 were determined by dual luciferase reporter genes.Animal experiments were performed to evaluate the role of lncRNA NEAT1 in the progression of AS in vivo.Results：lncRNA NEAT1 was significantly up-regulated in AS patients' serum and ox-LDL-induced HUVECs（P＜0.05）.Silencing of lncRNA NEAT1 attenuated ox-LDL-induced cytotoxicity，reduced Lp-PLA2 and CRP levels，and reduced abnormal lipid secretion in ApoE-/- mice（P＜0.05）.miR-424-5p mediated lncRNA NEAT1 in regulating ox-LDL-induced HUVEC injury，and ELK4 was the direct target of miR-424-5p（P＜0.05）.Inhibition of miR-424-5p or overexpression of ELK4 reversed the effect of lncRNA NEAT1 silencing on ox-LDL-induced HUVEC cell damage（P＜0.05）.Conclusion：Silencing lncRNA NEAT1 protects HUVEC from ox-LDL-triggered cytotoxicity and reduces Lp-PLA2 and CRP levels，in part by regulating the miR-424-5p/ELK4 axis.

Keywordsatherosclerosis; long non-coding RNA nuclear paraspeckle assembly transcript 1， lncRNA NEAT1; oxidative low-density lipoprotein; microRNA-424-5p; ETS-domain protein 4; experimental study

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是一種慢性炎癥性疾?。?］。內(nèi)皮細胞功能障礙在AS的進展中起重要作用［2］。氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL）通過多種機制促進AS的發(fā)生和發(fā)展，包括誘導內(nèi)皮細胞功能障礙［3］。因此，了解ox-LDL如何驅(qū)動內(nèi)皮細胞損傷對于開發(fā)抑制AS進展的有效方法至關(guān)重要。因此，本研究選擇ox-LDL誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）作為AS細胞模型研究AS的調(diào)節(jié)機制。

長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是AS和其他復雜疾病的主要調(diào)節(jié)劑，其可調(diào)節(jié)炎癥反應、脂質(zhì)代謝等多方面功能［4］，如下調(diào)lncRNA微小染色體維持蛋白3相關(guān)蛋白反義鏈1（MCM3AP-AS1）可明顯抑制AS的發(fā)展［5］。lncRNA核旁斑組裝轉(zhuǎn)錄本1（nuclear paraspeckle assembly transcript 1，lncRNA NEAT1）已被證實是細胞分化和生長中的關(guān)鍵基因［6］。研究顯示，lncRNA NEAT1與ox-LDL介導的內(nèi)皮細胞AS進展有關(guān)［7］。盡管部分lncRNA NEAT1調(diào)控網(wǎng)絡已在AS發(fā)病機制中得到強調(diào)，如lncRNA NEAT1/微小RNA-30c-5p/轉(zhuǎn)錄因子7網(wǎng)絡［8］，但目前對lncRNA NEAT1的分子基礎(chǔ)的理解仍然有限。miRNA通過沉默靶基因成為AS發(fā)病機制中的重要調(diào)節(jié)因子［9］。微小RNA-424-5p（microRNA-424-5p，miR-424-5p）是AS中低表達的miRNA，研究顯示，miR-424-5p在AS動物模型中發(fā)揮潛在的抗AS活性［10］。當通過生物信息學分析來識別lncRNA NEAT1的分子基礎(chǔ)時，在lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ETS域蛋白4（ETS-domain protein4，ELK4）之間發(fā)現(xiàn)了結(jié)合序列?；谝陨显?，本研究探討lncRNA/miRNA/mRNA調(diào)控網(wǎng)絡在ox-LDL觸發(fā)的HUVEC損傷中的作用。

1材料與方法

1.1血清樣本

采集于內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院體檢中心進行檢查的30名健康人和30例AS病人的血液樣本。靜置過夜后提取血清，儲存于－20 ℃用于提取總RNA。兩組受試者的基線資料（性別、年齡等）比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本研究獲得內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會批準，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2細胞與主要試劑

HUVEC（PCS-100-013）購自美國ATCC公司，ox-LDL（jk-002b）購自上海經(jīng)科公司；TRIzol（9108-1）、SYBR Green I試劑盒（RR091A）均購自日本Takara公司；FastQuant RT試劑（KR106-02）購自北京天根公司；lncRNA NEAT1的si-RNA（si-lncRNA NEAT1）及其陰性對照（si-NC）、miR-424-5p抑制劑（in-miR-424-5p）與ELK4過表達（oe-ELK4）以及miR-424-5p模擬物（miR-424-5p）與其陰性對照（miR-NC）均購自廣東Ribobio公司；Lipofectamine 3000（L3000-015）購自美國Invitrogen公司；RIPA緩沖液（89900）和增強化學發(fā)光法（ECL）檢測試劑盒（32109）均購自美國Pierce公司；一抗ELK4（ab86002）和β-actin（ab8227）購自英國Abcam公司；pMIRGLO熒光素酶載體（E1330）、雙熒光素酶檢測試劑盒（E2610）均購自美國Promega公司；細胞計數(shù)試劑盒（CCK-8）（CK04）購自日本同仁公司；膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）試劑盒（70-APCC101）購自杭州MultiSciences公司；乳酸脫氫酶（LDH）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（EK-H11454）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA試劑盒（EK-H12145）和白細胞介素（IL）-1β ELISA試劑盒（EK-H10327）均購自上海EK-Bioscience公司；脂蛋白磷脂酶A2（Lp-PLA2）ELISA試劑盒（HAS-54960）購自深圳海思安生物技術(shù)公司；C反應蛋白（CRP）ELISA試劑盒（SHR10172）購自南京賽泓瑞生物公司；含有l(wèi)ncRNA NEAT1的shRNA（sh-lncRNA NEAT1）或亂序shRNA（sh-RNA）的慢病毒構(gòu)建體購自上海Genomeditech公司；三酰甘油（TG）試劑盒（F001-1-1）、總膽固醇（TC）試劑盒（F002-1-1）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒（A113-2-1）均購自南京建成生物工程研究所。

1.3方法

1.3.1細胞培養(yǎng)與ox-LDL處理

在37 ℃和5% CO2環(huán)境下，HUVEC在含有10%胎牛血清和1%抗生素的PRMI-1640培養(yǎng)基中生長。同時，將購買的ox-LDL稀釋至不同的濃度梯度，將HUVEC與0、25、50、100 μg/mL的ox-LDL［11］孵育24 h，在不同時間點（0、12、24和48 h）以50 μg/mL濃度孵育，使用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）測定評估HUVEC中l(wèi)ncRNA NEAT1表達水平。

1.3.2細胞轉(zhuǎn)染

HUVEC細胞分為Control組（不做處理）、ox-LDL組（ox-LDL處理）、si-NC組（轉(zhuǎn)染si-NC后ox-LDL處理）、si-lncRNA NEAT1組（轉(zhuǎn)染si-lncRNA NEAT1后ox-LDL處理）、si-lncRNA NEAT1＋in-miR-424-5p組（轉(zhuǎn)染si-lncRNA NEAT1和in-miR-424-5p后ox-LDL處理）和si-lncRNA NEAT1＋oe-ELK4組（轉(zhuǎn)染si-lncRNA NEAT1和oe-ELK4后ox-LDL處理）。使用Lipofectamine 3000試劑瞬時轉(zhuǎn)染對應組HUVEC，24 h后用100 mg/mL的ox-LDL處理24 h，收集細胞用于后續(xù)實驗。qRT-PCR和蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測轉(zhuǎn)染效率。

1.3.3qRT-PCR反應

使用TRIzol從血清樣品或細胞中獲取總RNA，通過FastQuant RT試劑轉(zhuǎn)錄形成cDNA，在ABI 7500熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）系統(tǒng)（美國Applied Biosystems）上使用SYBR Green進行qRT-PCR反應。所有的數(shù)據(jù)均標準化為U6或GAPDH。目的基因的相對表達量采用2－ΔΔCt法計算。qRT-PCR的主要引物序列如下：lncRNA NEAT1正向為5′-TGTCCCTCGGCTATGTCAGA，lncRNA NEAT1反向為5′-GAGGGGACGTGTTTCCTGAG-3′；miR-424-5p正向為5′-GCGGCCAGCAGCAATTCATG-3′，miR-424-5p反向為5′-CAGCCACAAAAGAGCACAAT-3′；ELK4正向為5′-GGGTTAGAACTGGCACCCAC-3′， ELK4反向為5′-GCTGGACTTAGGGGAGCAAC-3′；U6正向為5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′，U6反向為 5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′；GAPDH正向為5′-TGACCACAGTCCATGCCATCAC-3′，GAPDH反向為5′-GCCTGCTTCACCACCTTCTTGA-3′。

1.3.4Western Blot檢測

將按照1.3.3方法培養(yǎng)的各組HUVEC通過RIPA緩沖液裂解提取總蛋白。蛋白質(zhì)定量變性后通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離并將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜（PVDF）上。在4 ℃下，添加一抗ELK4和β-actin（1∶1 000）過夜孵育，然后加入二抗。最后，通過ECL檢測試劑盒檢測信號。

1.3.5CCK-8檢測

收集按照1.3.3方法培養(yǎng)的HUVEC，向每孔中加入10 mL CCK-8試劑并于37 ℃下孵育4 h進行細胞活力測定。使用酶標儀檢測光密度值。細胞活力與450 nm處的光密度值成正比。

1.3.6Annexin V/PI雙染法

收集按照1.3.3方法培養(yǎng)的HUVEC，通過用5 mL FITC標記的Annexin V和2 mL PI雙染法進行細胞凋亡測定。使用FACScan流式細胞儀（英國BD Biosciences）對凋亡率進行分析。

1.3.7ELISA檢測

收集按照1.3.3方法培養(yǎng)的HUVEC上清液，根據(jù)供應商的方案使用對應的試劑盒分析收集細胞培養(yǎng)上清液中LDH釋放量、TNF-α和IL-1β含量、Lp-PLA2和CRP水平。最后檢測405 nm處的吸光度，并根據(jù)標準曲線方程進行計算。

1.3.8雙熒光素酶報告基因檢測

通過StarBase預測lncRNA NEAT1和miR-424-5p的結(jié)合位點，使用TargetScan搜索miR-424-5p的潛在靶標ELK4。構(gòu)建野生型或突變型lncRNA NEAT1（WT-lncRNA NEAT1或MT-lncRNA NEAT1）和ELK4-3′-UTR（WT-ELK4或MT-ELK4）片段，并將其插入到pMIRGLO熒光素酶載體中。使用Lipofectamine 3000將上述質(zhì)粒與miR-424-5p或miR-NC共轉(zhuǎn)染至ox-LDL處理的HUVEC。然后，通過雙熒光素酶檢測試劑盒檢測熒光素酶活性。

1.3.9動物實驗

用pMD2.G和psPAX2將慢病毒構(gòu)建體（sh-lncRNA NEAT1或sh-RNA）單獨轉(zhuǎn)染到293T細胞中以產(chǎn)生病毒顆粒。用無菌過濾器純化含病毒的懸浮液，并儲存于－80 ℃以進行進一步實驗。雄性8周齡ApoE-/-小鼠18只和野生型C57BL/6J小鼠6只購自北京Vital River公司，許可證號SCXK（京）2021-0011。所有小鼠均飼養(yǎng)在無特定病原體的生物醫(yī)學研究所飼養(yǎng)動物所設置的環(huán)境中。ApoE-/-小鼠喂食高脂肪飲食（15.8%脂肪和1.25%膽固醇），野生型C57BL/6J小鼠喂食正常食物。在第6周，ApoE-/-小鼠被隨機分為Control組、sh-NC組和sh-lncRNA NEAT1組，每組6只。sh-NC組和sh-lncRNA NEAT1組小鼠每周尾靜脈注射慢病毒顆粒（50 mL），Control組注射等量的PBS，連續(xù)注射4周。實驗結(jié)束時，采集血液樣本，并收集血清樣本用于進一步分析。lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4 mRNA的表達水平通過qRT-PCR進行測量。根據(jù)制造商說明，使用市售試劑盒檢測TG、TC和LDL-C水平。

1.4統(tǒng)計學處理

采用SPSS 25.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析和SNK-q檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1lncRNA NEAT1在AS病人血清和ox-LDL處理HUVEC中的過表達

與健康人血清lncRNA NEAT1（1.05±0.38）比較，AS病人（3.64±0.96）升高（P＜0.05）。此外，ox-LDL刺激導致HUVEC中l(wèi)ncRNA NEAT1的表達以劑量和時間依賴性方式上調(diào)（P＜0.05）。詳見表1、表2。因此，采用100 μg/mL的ox-LDL濃度處理24 h的HUVEC細胞進行進一步的實驗。

2.2沉默lncRNA NEAT1可減輕ox-LDL引發(fā)的HUVEC損傷

與Control組比較，ox-LDL組HUVEC細胞中l(wèi)ncRNA NEAT1和ELK4水平均明顯升高，miR-424-5p水平降低（P＜0.05）；HUVEC細胞增殖活力下調(diào)，細胞凋亡率上調(diào)（P＜0.05）。與si-NC組比較，si-lncRNA NEAT組HUVEC細胞中l(wèi)ncRNA NEAT1和ELK4水平均明顯降低，miR-424-5p水平明顯升高（P＜0.05）；HUVEC細胞增殖活力上調(diào)，細胞凋亡率下調(diào)（P＜0.05）。與si-lncRNA NEAT1組比較，si-lncRNA NEAT1＋in-miR-424-5p組或si-lncRNA NEAT1＋oe-ELK4組ELK4水平升高（P＜0.05）；HUVEC細胞增殖活力下調(diào)，細胞凋亡率上調(diào)（P＜0.05）。詳見表3及圖1、圖2。此外，對健康人和AS病人血清中miR-424-5p和ELK4 mRNA水平檢測發(fā)現(xiàn)，與健康人比較，AS病人血清中miR-424-5p水平降低（0.39±0.12與1.04±0.36，P＜0.05），ELK4 mRNA水平升高（1.95±0.68與1.01±0.40，P＜0.05）。

2.3沉默lncRNA NEAT1可減輕ox-LDL引發(fā)的HUVEC中炎性因子和Lp-PLA2、CRP的水平

與Control組比較，ox-LDL組HUVEC細胞上清液中LDH釋放量、TNF-α和IL-1β含量、Lp-PLA2和CRP水平均明顯升高（P＜0.05）。與si-NC組比較，si-lncRNA NEAT組HUVEC細胞上清液中LDH釋放量、TNF-α和IL-1β含量、Lp-PLA2和CRP水平均明顯降低（P＜0.05）。與si-lncRNA NEAT1組比較，si-lncRNA NEAT1＋in-miR-424-5p組和si-lncRNA NEAT1＋oe-ELK4組HUVEC細胞上清液中LDH釋放量、TNF-α和IL-1β含量、Lp-PLA2和CRP水平均明顯升高（P＜0.05）。詳見表4。

2.4lncRNA NEAT1在HUVEC細胞中的作用機制分析

使用基于網(wǎng)絡的生物信息資源“starBase”和“TragerScan”預測miR-424-5p與lncRNA NEAT1或ELK4之間的結(jié)合位點。雙熒光素酶報告基因檢測結(jié)果顯示，與miR-NC組比較，miR-424-5p組HUVEC共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-lncRNA NEAT1或WT-ELK4可明顯降低熒光素酶相對活性（P＜0.05），而共轉(zhuǎn)染MT-lncRNA NEAT1或MT-ELK4則對熒光素酶活性無明顯影響（P＞0.05）。詳見圖3、表5。

2.5沉默lncRNA NEAT1降低ApoE－/－小鼠血脂水平

與野生型C57BL/6J小鼠比較，喂食高脂飲食的ApoE－/－小鼠血清樣本中l(wèi)ncRNA NEAT1水平明顯上調(diào)（2.54±0.25與1.03±0.08，P＜0.05），miR-424-5p表達下調(diào)（0.36±0.04與1.03±0.05，P＜0.05），ELK4 mRNA水平上調(diào)（1.87±0.12與1.01±0.05，P＜0.05）。值得注意的是，sh-lncRNA NEAT1轉(zhuǎn)染導致血清樣本中l(wèi)ncRNA NEAT1水平下降，更重要的是lncRNA NEAT1的表達降低顯著降低了喂食高脂飲食的ApoE－/－小鼠血清樣本中TG、TC和LDL-C水平（P＜0.05）。此外，lncRNA NEAT1的表達降低導致血清樣本中miR-424-5p表達增加和ELK4 mRNA表達降低（P＜0.05）。詳見表6。

3討論

脂代謝紊亂是AS病變的基礎(chǔ)［12］。ox-LDL介導的內(nèi)皮細胞損傷是AS發(fā)生和進展的關(guān)鍵因素。AS是一種炎癥性疾病，是導致冠心病、腦梗死和外周血管疾病的主要原因，這些疾病是當今世界疾病死亡的主要原因［1］。因此，研究ox-LDL誘導的內(nèi)皮細胞損傷的機制至關(guān)重要。研究表明，在AS發(fā)病過程中存在多種lncRNA介導的機制，特別是lncRNA/miRNA/mRNA網(wǎng)絡［8］。

本研究結(jié)果顯示，lncRNA NEAT1在AS病人血清和ox-LDL刺激的HUVEC中過表達，與之前的研究結(jié)果一致［7-8］。在肺腺癌等多種癌癥中l(wèi)ncRNA NEAT1高表達［13］。此外，lncRNA NEAT1通過paraspeckle形成參與調(diào)節(jié)巨噬細胞中ox-LDL引發(fā)的炎癥和脂質(zhì)攝?。?4］；且阻斷l(xiāng)ncRNA NEAT1通過調(diào)節(jié)人巨噬細胞中miR-342-3p抑制炎癥反應和脂質(zhì)攝入［15］。結(jié)合以上研究，推測沉默lncRNA NEAT1可保護HUVEC免受ox-LDL誘導損傷。另外，Lp-PLA2與臨床上的幾種心血管風險標志物和心血管事件密切相關(guān)，且Lp-PLA2在ox-LDL暴露的HUVEC中被誘導表達［16］；CRP是炎癥和血栓形成之間的重要機制聯(lián)系，增加CRP表達可增強對血管損傷的血栓形成反應［17］。結(jié)合本研究結(jié)果得出，沉默lncRNA NEAT1保護HUVEC免受ox-LDL誘導的細胞毒性。ApoE-/-小鼠是發(fā)生高膽固醇血癥和AS的經(jīng)典動物模型，血清中TC、TG和LDL-C水平異常升高是AS脂質(zhì)紊亂的特征之一。本研究發(fā)現(xiàn)，沉默lncRNA NEAT1可減輕脂質(zhì)紊亂，抑制ApoE-/-小鼠的AS進展。本研究還證明了lncRNA NEAT1與miR-424-5p存在靶向調(diào)控關(guān)系。miR-424-5p是宮頸癌等人類癌癥的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑［18］。此外，miR-424-5p還與骨性關(guān)節(jié)炎［19］、缺血性腦卒中［20］等疾病發(fā)展有關(guān)。本研究結(jié)果表明，miR-424-5p在AS病人血清中低表達，表明其表達可能與AS有關(guān)。進一步結(jié)果顯示，抑制miR-424-5p可部分逆轉(zhuǎn)lncRNA NEAT1沉默對ox-LDL誘導的HUVEC損傷的緩解作用。隨后，將ELK4鑒定為HUVEC中miR-424-5p的直接靶標。ELK4是Ets轉(zhuǎn)錄因子家族的成員，已有多項研究表明，ELK4在許多癌癥中起關(guān)鍵作用［21］。本研究結(jié)果顯示，ELK4在AS病人血清中高度表達，與之前的研究相似，且研究指出miR-3188通過直接靶向上調(diào)ELK4促進AS惡性進展［22］。本研究結(jié)果顯示，沉默lncRNA NEAT1可作為miR-424-5p海綿在ox-LDL誘導的HUVEC中下調(diào)ELK4的表達。且進一步研究結(jié)果證實，ELK4過表達可部分逆轉(zhuǎn)lncRNA NEAT1沉默對ox-LDL誘導的HUVEC損傷的保護作用。結(jié)合以上結(jié)果得出，沉默lncRNA NEAT1通過影響ox-LDL誘導的HUVEC中miR-424-5p的表達調(diào)節(jié)ELK4的表達。

綜上所述，本研究在ox-LDL誘導的HUVEC功能障礙中發(fā)現(xiàn)了一個新的調(diào)控網(wǎng)絡，即lncRNA NEAT1/miR-424-5p/ELK4軸。本研究證據(jù)表明，lncRNA NEAT1是AS中顯著過表達的lncRNA，通過靶向miR-424-5p/ELK4軸調(diào)節(jié)ox-LDL觸發(fā)的HUVEC損傷，突出了AS管理有希望的分子靶點。深入探究lncRNA NEAT1/miR-424-5p/ELK4信號傳導是否影響與內(nèi)皮細胞損傷相關(guān)的某些通路的激活將是進一步研究的主題。

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（收稿日期：2022-06-01）

（本文編輯鄒麗）