黃麗群 顧嵐 俞雪梅 于志雷 張琴 周艷

摘要 目的：分析先天性心臟病患兒母體孕期血清miR-22、Notch1表達(dá)及臨床意義。方法：選取蘇州吳江地區(qū)2019年1月—2020年12月出生的先天性心臟病患兒的孕婦58例為觀察組，選取同期住院分娩正常兒童的孕婦308名為對(duì)照組。對(duì)兩組孕婦一般資料及環(huán)境暴露因素進(jìn)行問卷調(diào)查，采用單因素及二分類Logistic回歸分析潛在暴露因素與先天性心臟病之間的潛在關(guān)系；使用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）及Pearson分析miR-22及Notch1表達(dá)及潛在關(guān)系。結(jié)果：觀察組外周血清miR-22低于對(duì)照組，Notch1高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Pearson分析顯示，miR-22與Notch1呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。兩組孕婦孕期體重增加＞15 kg、亞臨床甲狀腺功能減退、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Logistic分析結(jié)果顯示，孕期體重增加＞15 kg、亞臨床甲狀腺功能減退、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤、miR-22水平降低及Notch1升高為新生兒先天性心臟病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論：miR-22及Notch1異常表達(dá)與先天性心臟病發(fā)生密切相關(guān)，具有較好的研究價(jià)值；孕期多種暴露因素與先天性心臟病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，臨床工作應(yīng)積極指導(dǎo)孕期健康，以降低先天性心臟病發(fā)生率。

關(guān)鍵詞 先天性心臟病；新生兒；孕期；暴露因素；miR-22；Notch1

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.05.026

基金項(xiàng)目 蘇州市吳江區(qū)“科教興衛(wèi)”項(xiàng)目（No.wwk201819）

作者單位 南京醫(yī)科大學(xué)附屬江蘇盛澤醫(yī)院，南京醫(yī)科大學(xué)康達(dá)學(xué)院盛澤臨床醫(yī)學(xué)院（江蘇蘇州? 215228），E-mail：hlq364@163.com

引用信息 黃麗群，顧嵐，俞雪梅，等.先天性心臟病患兒母體孕期血清miR-22、Notch1表達(dá)及臨床意義［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（5）：907-910.

先天性心臟病是由于孕期各種暴露因素引起胎兒心臟、血管發(fā)育障礙，導(dǎo)致局部解剖結(jié)構(gòu)及功能異常，或胎兒出生后應(yīng)自動(dòng)關(guān)閉的通道未閉合導(dǎo)致異常血流分布［1-3］。多項(xiàng)研究顯示，先天性心臟病是嬰幼兒病死率的首要原因，遺傳、環(huán)境因素均可導(dǎo)致先天性心臟病發(fā)生［4-5］。微小RNA是一類小的非編碼單鏈RNAs，作為基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)因子，其是調(diào)節(jié)機(jī)體正常生理活動(dòng)的重要因子，參與遺傳性疾病的發(fā)生發(fā)展過程［6］。有研究證實(shí)，主動(dòng)脈夾層病人血清miR-22異常表達(dá)，且與Notch1有關(guān)［7］。有研究顯示，多數(shù)先天性心臟病的遺傳度為35%，一定程度提示暴露因素對(duì)胎兒心血管發(fā)育有重要影響［8］。不同區(qū)域人群生活習(xí)慣不同引起先天性心臟病的因素存在爭議?；诖?，本研究旨在調(diào)查蘇州市吳江地區(qū)先天性心臟病患兒的發(fā)生相關(guān)孕期暴露因素，檢測(cè)miR-22及Notch1的表達(dá)，分析期臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2019年1月—2020年12月吳江地區(qū)出生的先天性心臟病患兒孕婦58例作為觀察組，匹配性別、出生時(shí)體重、孕周、孕次、產(chǎn)次等因素選取同期住院分娩正常兒童的孕婦308名作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患兒先天性心臟病，經(jīng)多普勒超聲證實(shí)；單胎妊娠；孕婦年齡＞18歲；于各個(gè)地區(qū)醫(yī)院接受完整孕前檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往高血壓、糖尿病及甲狀腺功能障礙；既往家族先天性心臟病病史；既往身體發(fā)育不良；精神疾病史；風(fēng)濕性疾病病史。所有研究對(duì)象均對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書，且本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集

通過查閱相關(guān)病例資料，記錄兩組孕婦產(chǎn)前保健等資料；同時(shí)追蹤患兒先天性心臟病的診斷，由兒科醫(yī)生聯(lián)合多普勒超聲證實(shí)。

1.2.2 miR-22及Notch1含量檢測(cè)

抽取兩組孕婦外周血，離心后獲取血清，采用Trizol試劑獲取總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)兩組研究對(duì)象外周血miR-22及Notch1含量。對(duì)總RNA進(jìn)行電泳，反轉(zhuǎn)錄為單鏈cDNA。在RT-PCR儀上分別對(duì)miR-22（正向引物5′-TGGGTACCTTAAGTCAAGAGTG-3′，反向引物5′-AGGTGCTGTGGTCAACTCAGTT-3′）、Notch1（正向引物5′-GATGGCCTCAATGGGTACAAG-3′，反向引物5′-TCGTTGTTGTTGATGTCACAGT-3′）和內(nèi)參GAPDH進(jìn)行擴(kuò)增。采用2－△△Ct計(jì)算miR-22與Notch1相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 暴露因素調(diào)查

根據(jù)相關(guān)指南設(shè)計(jì)先天性心臟病患兒母親孕期高危因素項(xiàng)目的調(diào)查問卷，對(duì)兩組新生兒母親行為問卷調(diào)查，調(diào)查兩組新生兒孕期的各種因素（母親年齡、職業(yè)、暴露環(huán)境、孕期感染史、生活習(xí)慣等）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；定性資料以例數(shù)、百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)?；诮M間的差異危險(xiǎn)因素，建立兒童先天性心臟病影響因素模型，對(duì)相關(guān)因素差異按等級(jí)變量賦值，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析先天性心臟病患兒發(fā)生的危險(xiǎn)因素，采用逐步向前（Ward）法進(jìn)行變量篩，其中納入標(biāo)準(zhǔn)0.05，排除標(biāo)準(zhǔn)為0.10，相對(duì)社交回避發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)以校準(zhǔn)后優(yōu)勢(shì)比（OR）表示。采用Pearson分析miR-22與Notch1的關(guān)系。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 先天性心臟病疾病情況

本研究共納入58例先天性心臟病患兒，其中室間隔缺損9例，房間隔缺損28例，動(dòng)脈導(dǎo)管未閉6例，卵圓孔未閉13例，室間隔缺損聯(lián)合房間隔缺損2例；出生時(shí)間：2019年33例，2020年25例。均由兒科醫(yī)生在患兒出生時(shí)體檢發(fā)現(xiàn)異常雜音或經(jīng)皮血氧飽和度異常后，經(jīng)胸多普勒超聲證實(shí)確診。

2.2 兩組新生兒及孕婦臨床資料比較（見表1）

2.3 兩組孕婦外周血清miR-22與Notch1表達(dá)量比較

觀察組孕婦外周血清miR-22含量低于對(duì)照組（3.43±0.87和6.78±1.23，t＝－7.441，P＜0.01），Notch1表達(dá)量高于對(duì)照組（1.32±0.36和0.44±0.19，t＝3.440，P＜0.001）。Pearson分析顯示，孕婦外周血清miR-22表達(dá)與Notch1呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.664，P＜0.01）。

2.4 先天性心臟病患兒孕期暴露因素分析

兩組職業(yè)、受教育程度、居住地、高脂血癥、高尿酸血癥比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；觀察組亞臨床甲狀腺功能減退、孕期體重增加＞15 kg、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤占比高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表2。

2.5 兒童先天性心臟病孕婦相關(guān)因素分析

多因素Logistic回歸分析顯示，孕期亞臨床甲狀腺功能減退、孕期體重增加＞15 kg、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤、miR-22與Notch1為先天性心臟病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。詳見表3。

3 討 論

多項(xiàng)研究顯示，全球每年新發(fā)超過100多萬例先天性心臟病病人，雖然世界范圍內(nèi)均開展了產(chǎn)前保健、孕期指導(dǎo)等各種措施以降低先天性心臟病發(fā)生率，但目前先天性心臟病仍是兒童發(fā)病率較高的先天性疾病，嚴(yán)重影響兒童群體健康［9-10］。有研究顯示，先天性心臟病的發(fā)生與遺傳物質(zhì)及環(huán)境因素密切相關(guān)，且與各個(gè)地區(qū)群體生活習(xí)慣、生活環(huán)境等相關(guān)［11］。研究先天性心臟病發(fā)病的相關(guān)因素對(duì)降低先天性心臟病發(fā)生率，提高產(chǎn)前診斷水平，全面減少我國的先天性心臟病患兒數(shù)量具有重要的臨床意義［12］。為此，2018年，吳江區(qū)衛(wèi)健委正式與上海復(fù)旦兒科醫(yī)院簽約開展新生兒先天性心臟病的篩查，早期發(fā)現(xiàn)先天性心臟病，以提高該地區(qū)先天性心臟病篩查及診療水平。

本研究結(jié)果顯示，納入的先天性心臟病患兒均為相對(duì)簡單的心臟畸形，經(jīng)過正規(guī)治療后達(dá)到康復(fù)水準(zhǔn)，對(duì)患兒后期生活影響較小。分析原因可能與先進(jìn)的心臟彩超可早期診斷復(fù)雜的心臟病并采取優(yōu)生措施相關(guān)，家屬優(yōu)生選擇基于后期治療效果及患兒的生活質(zhì)量，故降低了復(fù)雜先天性心臟病出生率，與相關(guān)研究結(jié)果［13］一致。產(chǎn)前診斷先天性心臟病存在一定的漏診率，加之缺乏客觀血清學(xué)檢測(cè)導(dǎo)致先天性心臟病發(fā)生率維持在較高水平。

miRNA作為目前的研究重點(diǎn)，其外周血的表達(dá)已逐步應(yīng)用于臨床疾病的診療中，且獲得了較好的應(yīng)用效果，部分先天性心臟病病人中顯示miR-22異常。本研究結(jié)果顯示，觀察組孕期外周血miR-22水平表達(dá)低于對(duì)照組，初步說明了miR-22可能參與了先天性心臟病的發(fā)生發(fā)展，佐證了既往的研究結(jié)論［14］。本研究檢測(cè)了先天性心臟病患兒母親孕期外周血Notch1，結(jié)果顯示其高于對(duì)照組，且Pearson結(jié)果顯示，miR-22與Notch1呈負(fù)相關(guān)，一定程度提示miR-22/Notch1途徑可能參與先天性心臟病的發(fā)生發(fā)展。有研究顯示，miR-22/Notch1可作為先天性心臟病早期診斷的指標(biāo)［15］。

本研究進(jìn)一步分析暴露因素與先天性心臟病發(fā)生的關(guān)系，經(jīng)過單因素篩查及多因素Logistic分析顯示，孕期亞臨床甲狀腺功能減退、孕期體重增加＞15 kg、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤為新生兒先天性心臟病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。分析原因：1）亞臨床甲狀腺功能減退主要指孕婦無特異性臨床表現(xiàn)，僅外周血促甲狀腺激素水平高于正常值高限，游離甲狀腺素處于正常水平；臨床亞臨床甲狀腺功能減退發(fā)病率逐年升高，好發(fā)于育齡孕婦，易漏診，目前對(duì)該病的干預(yù)治療也存在爭議，甲狀腺素對(duì)胎兒的心臟功能發(fā)育具有重要影響。結(jié)合既往研究結(jié)果，建議加強(qiáng)孕期甲狀腺功能檢測(cè)，脫離既往“甲功五項(xiàng)”的慣性思維，從而降低甲狀腺功能異常的漏診率［16］。2）孕期體重增加＞15 kg可增加妊娠期合并癥，如高血壓、糖尿病發(fā)生率。本研究結(jié)果顯示，孕期體重增加＞15 kg為新生兒先天性心臟病的危險(xiǎn)因素，可能與其增加了妊娠期合并癥發(fā)生率相關(guān)。蘇州吳江地區(qū)居民飲食多以米面為主食，同時(shí)菜品口味偏甜，最終導(dǎo)致孕期體重增加過快，故積極控制孕期體重增長為孕期保健的重要內(nèi)容［17］。3）孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥為常見的危險(xiǎn)因素，本研究結(jié)果與既往研究結(jié)果［18］一致。4）喜吃燒烤為本研究發(fā)現(xiàn)的危險(xiǎn)因素，隨著燒烤逐漸在業(yè)余生活中流行，其為先天性心臟病潛在的危險(xiǎn)因素，可能與燒烤中各種添加劑、防腐劑為致畸因素，同時(shí)燒烤食物可能制作不熟，生肉、海鮮中的弓形蟲引起感染風(fēng)險(xiǎn)，海鮮中的嘌呤成分導(dǎo)致尿酸增高。海鮮中的嘌呤成分已證實(shí)為先天性心臟病的危險(xiǎn)因素［19-20］。本研究缺乏弓形蟲感染資料不全未進(jìn)一步分析，同時(shí)結(jié)果顯示，觀察組高尿酸血癥發(fā)生率高于對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可能與樣本量有限相關(guān)，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，孕期外周血miR-22/Notch1差異表達(dá)可作為先天性心臟病的重要指標(biāo)，同時(shí)亞臨床甲狀腺功能減退、孕期體重增加＞15 kg、孕早中期呼吸道感染、妊娠期合并癥、喜吃燒烤為蘇州市吳江地區(qū)先天性心臟病患兒的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，應(yīng)加強(qiáng)孕期保健。本研究為單中心研究且病例收集為巢氏病例對(duì)照，存在一定的偏倚。

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（收稿日期：2023-01-05）

（本文編輯薛妮）