周傳順 饒高雄

【摘 要】

目的：研究荷梗的化學(xué)成分。方法：采用HP-20樹脂、硅膠、RP-C18和Sephadex LH-20柱等色譜方法分離與純化，并運用核磁共振（1H-NMR和13C-NMR）波譜學(xué)方法及結(jié)合化學(xué)方法對所分離的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：從荷梗中分離鑒定出10個化合物，分別為次大風(fēng)子素（hydnocarpin，1）、木犀草素（luteolin，2）、山楂酸（maslinic acid，3）、白樺脂酸（betulinic acid，4）、反式-N-對羥基香豆酰酪胺（N-trans-coumaroyltyramine，5）、5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，6）、單棕櫚酸甘油（2，3-dihydroxypropyl palmitate，7）、棕櫚酸（palmitic acid，8）、β-谷甾醇（β-sitosterol，9）、胡蘿卜苷（daucosterol，10）。10個化合物均是荷梗中首次分離得到，化合物1和6是蓮中首次分離得到。

【關(guān)鍵詞】

荷梗；化學(xué)成分；提取分離

【中圖分類號】R284.2?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2024）07-0028-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.07.zgmzmjyyzz202407007

Chemical constituents of Petiolus Nelumbinis

ZHOU Chuanshun1，2 RAO Gaoxiong3*

1. Yi Yang Medical College， Yiyang 413000， China；

2. Key Laboratory of Anhua Huangjing Processing Technology and Product Development， Yiyang 413000， China；

3. Engineering Research Centers of Health Products by Homology of Medicine and Food of

Yunnan Province，Yunnan University of Chinese Medicine， Kunming 650500， China

Abstract：

Objective To study the chemical constituents of Petiolus Nelumbinis.Method Thesample was isolated and purified by diaion HP 20，Silica gel，RP-C18 and Sephadex LH-20 chromatography；The chemical structure was identified on the basis of nuclear magnetic resonance （1H-NMR and 13C-NMR） spectroscopy data and chemical methods.Result Ten compounds were isolated and identifiedfromPetiolus Nelumbinis： hydnocarpin（1），luteolin（2），maslinic acid（3），betu-linicacid（4），N-trans-coumaroyltyramine（5），5-hydroxymethylfurfural（6），2，3-dihydroxypropyl pal-mitate（7），palmitic acid（8），β-sitosterol（9），daucosterol（10）.Compounds 1 to 10 were isolated from Petiolus Nelumbinis for the first time，and compounds 1 and 6 were isolated from Nelumbo nucifera Gaertn. for the first time.

Keywords：

Petiolus Nelumbinis;Chemical Constituents;Extraction and Separation

荷梗為睡蓮科（Nymphaeaceae）植物蓮（Nelumbo nucifera Gaertn.）的葉柄或花柄［1］。荷梗味苦、性平，歸脾、胃經(jīng)。具有解暑清熱、理氣化濕的功效；主治暑濕胸悶不舒、泄瀉、痢疾、淋病、帶下。在經(jīng)典處方“清署益氣湯”“加味茵陳湯”和“復(fù)方犀角地黃湯”中均有荷梗的使用［2-4］。目前研究［5-7］表明荷梗中含有黃酮類和生物堿類化學(xué)成分；同時荷梗的藥理研究較少，只涉及到單體化合物的細(xì)胞毒活性作用研究。另外，荷梗在各省中藥材標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀鑒別，沒有指標(biāo)性成分對其進(jìn)行定性和定量，與其物質(zhì)基礎(chǔ)未得到充分認(rèn)識有關(guān)。在臨床應(yīng)用中，蓮各個部位都可入藥，而目前的相關(guān)研究多集中于其果實和葉子部位。為了進(jìn)一步開發(fā)荷梗的藥用價值，闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)，本實驗運用各種色譜方法對荷梗進(jìn)行提取分離，并對得到的單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。從荷梗中分離鑒定出10個化合物，分別為次大風(fēng)子素（hydnocarpin，1），木犀草素（luteolin，2），山楂酸（maslinic acid，3），白樺脂酸（betulinic acid，4），反式-N-對羥基香豆酰酪胺（N-trans-coumaroyltyramine，5），5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，6），單棕櫚酸甘油（2，3-dihydroxypropyl palmitate，7），棕櫚酸（palmitic acid，8），β-谷甾醇（β-sitosterol，9），胡蘿卜苷（daucosterol，10）。10個化合物均是荷梗中首次分離得到，化合物1和6是蓮中首次分離得到。

1 材料

Bruker Avance III 400 MHz核磁共振波譜儀（德國Bruker公司），硅膠、薄層色譜硅膠板（青島海洋化工廠，煙臺大學(xué)生物科學(xué)與工程研究所），Sephadex LH-20（Pharmacia公司），RP-C18（日本富士硅化工），HP-20型樹脂（日本三菱化工），分離純化用試劑均由工業(yè)純重蒸處理后使用。

實驗藥材購于云南省文山市，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院陳紹田研究員鑒定為植物蓮（Nelumbo nucifera Gaertn.）的葉柄部。

2 提取與分離

荷梗鮮品225 kg切成細(xì)短樣陰干，再經(jīng)粉碎后得樣品36 kg；樣品使用95%EtOH加熱回流提取2次，每次2 h，過濾，合并濾液，減壓回收溶劑得浸膏。浸膏用95%EtOH溶解，過濾，回收溶劑后浸膏再以水溶解，得水溶部分Fr.A和水不溶部分Fr.B；Fr.A經(jīng) HP-20 柱分離（水-95%EtOH梯度），得組分Fr.A1～A2，F(xiàn)r.A2 經(jīng)硅膠柱層析（氯仿-甲醇梯度）洗脫后得到化合物 6（11.1 g）。Fr.B經(jīng)甲醇溶解后經(jīng)MCI柱分離，以甲醇梯度洗脫，薄層層析顯示該步驟未有分離效果，故合并以硅膠柱層析（氯仿-甲醇梯度）洗脫，得組分Fr.B1～B2，同時得化合物 9（830 mg），10（265 mg）。Fr.B1經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（甲醇）和Sephadex LH-20 柱色譜（氯仿-甲醇=1∶1）得到化合物1（17.7 mg），3（143 mg），4（3.2 mg），7（52 mg），8（20 mg）。Fr.B2經(jīng)經(jīng)硅膠柱層析（氯仿-甲醇梯度）和Sephadex LH-20 柱色譜（氯仿-甲醇=1∶1）后得到化合物 2（18 mg），5（18 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色無定形粉末，溶于甲醇。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.21（1H，d，J=2.0Hz，H-6），6.52（1H，d，J=2.0Hz，H-8），7.67（1H，d，J=2.2Hz，H-2′），7.09（1H，d，J=8.6Hz，H-5′），7.61（1H，dd，J=8.6，2.2Hz，H-6′），7.04（1H，d，J=1.8Hz，H-2″），6.82（1H，d，J=8.0Hz，H-5″），6.88（1H，m，H-6″），5.02（1H，d，J=7.8Hz，H-7″），4.28（1H，m，H-8″），3.59（1H，d，J=12.9Hz，H-9″a），3.38（1H，s，H-9″b），12.92（1H，s，5-OH），10.89（1H，s，7-OH），3.78（1H，s，3″-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：163.4（C-2），104.4（C-3），182.2（C-4），161.9（C-5），99.4（C-6），164.7（C-7），94.6（C-8），157.9（C-9），104.3（C-10），124.2（C-1′），115.3（C-2′），144.1（C-3′），147.6（C-4′），115.8（C-5′），118.0（C-6′），127.4（C-1″），112.3（C-2″），148.1（C-3″），147.7（C-4″），115.8（C-5″），121.1（C-6″），76.8（C-7″），78.5（C-8″），60.6（C-9″），56.2（OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報道對照基本一致，故鑒定該化合物為次大風(fēng)子素（Hydnocarpin）。

化合物2：黃色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.67（1H，s，H-3），6.19（1H，s，H-6），6.45（1H，s，H-8），7.40（1H，s，H-2′），6.89（1H，d，J=8.0Hz，H-5′），7.43（1H，s，H-6′），12.99（1H，s，5-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：164.4（C-2），103.3（C-3），182.1（C-4），161.9（C-5），99.3（C-6），164.6（C-7），94.3（C-8），157.7（C-9），104.2（C-10），122.0（C-1′），113.8（C-2′），146.2（C-3′），150.1（C-4′），116.5（C-5′），119.4（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報道對照基本一致，故鑒定該化合物為木犀草素（Luteolin）。

化合物3：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ：2.24（1H，dd，J=12.4，4.1Hz，H-1），4.09（1H，td，J=11.0，4.2Hz，H-2），3.39（1H，d，J=9.4Hz，H-3），5.44（1H，m，H-12），3.27（1H，dd，J=13.7，3.8Hz，H-18），1.25（3H，s，H-23），0.99（3H，m，H-24），0.98（3H，m，H-25），1.06（3H，s，H-26），1.24（3H，s，H-27），0.96（3H，s，H-29），0.94（3H，s，H-30）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ：47.5（C-1），68.4（C-2），83.6（C-3），39.6（C-4），55.7（C-5），18.6（C-6），33.0（C-7），39.6（C-8），47.9（C-9），38.3（C-10），23.5（C-11），122.2（C-12），144.6（C-13），42.0（C-14），28.0（C-15），23.7（C-16），46.5（C-17），41.8（C-18），46.2（C-19），30.7（C-20），34.0（C-21），33.0（C-22），29.1（C-23），17.4（C-24），16.6（C-25），17.2（C-26），25.9（C-27），180.0（C-28），33.0（C-29），23.5（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報道對照基本一致，故鑒定該化合物為山楂酸（Maslinic acid）。

化合物4：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.13（1H，m，H-3），0.75（3H，s，H-23），0.86（3H，s，H-24），0.95（3H，s，H-25），0.97（3H，s，H-26），1.01（3H，s，H-27），4.71（1H，s，H-29a），4.59（1H，s，H-29b），1.70（3H，s，H-30）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：40.3（C-1），28.2（C-2），79.8（C-3），40.1（C-4），57.1（C-5），19.6（C-6），35.8（C-7），42.1（C-8），52.2（C-9），38.5（C-10），22.3（C-11），27.1（C-12），39.8（C-13），43.8（C-14），31.9（C-15），33.5（C-16），57.7（C-17），48.7（C-18），50.6（C-19），152.2（C-20），31.0（C-21），38.3（C-22），28.8（C-23），16.9（C-24），16.8（C-25），16.3（C-26），15.3（C-27），180.7（C-28），110.3（C-29），19.7（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報道對照基本一致，故鑒定該化合物為白樺脂酸（Betulinic acid）。

化合物5：白色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.38（2H，d，J=8.0Hz，H-2，6），6.78（2H，d，J=8.0Hz，H-3，5），7.31（1H，d，J=15.7Hz，H-7），6.39（1H，d，J=15.7Hz，H-8），7.01（2H，d，J=8.0Hz，H-2′，6′），6.69（2H，d，J=8.0Hz，H-3′，5′），2.64（2H，t，J=7.4Hz，H-7′），3.33（2H，m，H-8′），8.01（1H，t，J=5.4Hz，NH）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：126.4（C-1），129.6（C-2），116.2（C-3），159.2（C-4），116.2（C-5），129.6（C-6），139.0（C-7），119.2（C-8），165.8（C-9），130.0（C-1′），129.9（C-2′），115.6（C-3′），156.1（C-4′），115.6（C-5′），129.9（C-6′），34.9（C-7′），41.1（C-8′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報道對照基本一致，故鑒定該化合物為反式-N-對羥基香豆酰酪胺（N-trans-coumaroyltyramine）。

化合物6：紅棕色油狀物，溶于氯仿。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：9.49（1H，s，H-1），6.52（1H，s，H-3），7.26（1H，s，H-4），4.67（2H，s，H-6）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：178.1（C-1），152.0（C-2），124.0（C-3），110.1（C-4），161.4（C-5），57.0（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報道對照基本一致，故鑒定該化合物為5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural）。

化合物7：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：4.21（1H，m，H-1a），3.71（1H，m，H-1b），3.94（1H，m，H-2），4.14（1H，m，H-3a），3.62（1H，m，H-3b），2.35（2H，t，J=7.5Hz，H-2′），1.62（2H，m，H-3′），1.26（24H，m，H-4′～15′），0.88（3H，t，J=6.6Hz，H-16′）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：65.2（C-1），70.3（C-2），63.4（C-3），174.4（C-1′），34.2（C-2′），31.9（C-3′），29.7～29.1（C-4′～13′），24.9（C-14′），22.7（C-15′），14.1（C-16′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報道對照基本一致，故鑒定該化合物為單棕櫚酸甘油（2，3-dihydroxypropyl palmitate）。

化合物8：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：2.35（2H，t，J=7.4Hz，H-2），1.63（2H，m，H-3），1.30（24H，m，H-4～15），0.88（3H，t，J=6.5Hz，H-16）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：179.7（C-1），34.0（C-2），24.7（C-3），29.7～29.1（C-4～13），31.9（C-14），22.7（C-15），14.1（C-16）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］報道對照基本一致，故鑒定該化合物為棕櫚酸（Palmitic acid）。

化合物9：白色針晶（氯仿），使用10%硫酸乙醇顯色呈紫紅色，與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品共薄層對照時Rf 值相同，故鑒定化合物9為β-谷甾醇。

化合物10：白色粉末（丙酮），使用10%硫酸乙醇顯色呈紫紅色，與胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品共薄層對照時Rf 值相同，故鑒定化合物10為胡蘿卜苷。

4 討論

本實驗從荷梗中分離鑒定出10個化合物，其中次大風(fēng)子素（hydnocarpin，1）、木犀草素（luteolin，2）屬于黃酮類成分；山楂酸（maslinic acid，3）、白樺脂酸（betulinic acid，4）屬于五環(huán)三萜類成分；β-谷甾醇（β-sitosterol，9）、胡蘿卜苷（daucosterol，10）為甾體類成分；其他化合物反式-N-對羥基香豆酰酪胺（N-trans-coumaroyltyramine，5）、5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，6）、單棕櫚酸甘油（2，3-dihydroxypropyl palmitate，7）、棕櫚酸（palmitic acid，8）分別屬于香豆素類、呋喃衍生物、脂肪酸酯和脂肪酸成分?，F(xiàn)代藥理表明木犀草素、白樺脂酸和β-谷甾醇具有抑菌作用［16-19］；山楂酸具有抑制寄生蟲的作用［20］。這些藥理作用為荷梗治療泄瀉、痢疾、淋病提供了一定理論依據(jù)。另外，本文的研究豐富了荷梗的成分類型，為其后續(xù)藥效評價、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)完善和開發(fā)利用提供了部分理論基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2023-07-07 編輯：劉 斌）

基金項目：

湖南省教育廳科學(xué)研究項目（21C1499）。

作者簡介：

周傳順（1992—），男，漢族，碩士，助教，研究方向為天然藥物開發(fā)與利用工作。E-mail：735386048@qq.com

通信作者：

饒高雄（1965—），男，漢族，碩士，教授，研究方向為天然藥物化學(xué)的研究工作。E-mail：raowufam@vip.sohu.com