董進(jìn)浪　譚煒煒

[摘要] 目的 探討胃癌患者外周血中CD3+CD4-CD8-（DNT）細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)及臨床意義。 方法 利用流式細(xì)胞儀對43例胃癌、36例健康人外周血中的DNT細(xì)胞及T細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測，并對比分析兩者的差異。 結(jié)果 胃癌患者DNT細(xì)胞百分比（9.11±5.56）%明顯高于正常對照組（4.84±1.43）%（P ＜ 0.01），胃癌患者CD4+%、CD4+/CD8+比值低于正常對照組（P均＜ 0.01），CD8+%高于正常對照組（P ＜ 0.01）。 結(jié)論 胃癌患者DNT細(xì)胞百分比顯著升高及T淋巴細(xì)胞亞群比例改變，提示胃癌患者免疫功能異常，為胃癌發(fā)病機(jī)制研究及免疫治療提供理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；DNT細(xì)胞；T淋巴細(xì)胞亞群

[中圖分類號] R735.2[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）21-0088-02

胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，占消化道腫瘤的首位，在消化道惡性腫瘤死亡病例中，約有半數(shù)死于胃癌[1，2]。其發(fā)病率和死亡率不斷上升，但其發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚，因此早期診斷胃癌并及時選擇合適的治療方法非常重要。近年來的研究表明，細(xì)胞免疫是機(jī)體抗腫瘤免疫的主要方式，而T淋巴細(xì)胞及其亞群是細(xì)胞免疫中的主要效應(yīng)細(xì)胞。CD3+CD4-CD8-（double negative T cell，DNT）細(xì)胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的一群免疫調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，它和CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞一樣，在免疫調(diào)節(jié)和抑制、抗病毒、抗腫瘤、自身免疫等方面都具有非常重要的作用[3，4]。為探討細(xì)胞免疫在胃癌患者發(fā)病過程中的作用，我們利用流式細(xì)胞儀對43例胃癌患者、36例健康人外周血中的DNT細(xì)胞及T細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

研究標(biāo)本來源于2010年6月～2011年6月我院新入院的43例胃癌患者，男24例，女19例，年齡31～86歲，平均65歲；另選正常體檢者36例作為健康對照組。兩組性別、年齡經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。病例選擇標(biāo)準(zhǔn)：所有胃癌患者均經(jīng)病理確診，未經(jīng)放療或化療，近期無明顯感染史，肝腎功能正常。

1.2 方法

1.2.1 試劑PerCP-anti-CD3/FITC-anti-CD4/PE-anti-CD8三標(biāo)記單克隆抗體購自美國貝克曼庫爾特有限公司。

1.2.2 儀器流式細(xì)胞儀為美國貝克曼庫爾特有限公司生產(chǎn)的FC500型。

1.2.3 檢測方法選取胃癌患者及健康者外周靜脈血1 mL，EDTA-K2抗凝。嚴(yán)格按照三標(biāo)記單克隆抗體PerCP-anti-CD3/FITC-anti-CD4/PE-anti-CD8的使用說明書進(jìn)行染色，染色后上流式細(xì)胞儀檢測10 000個淋巴細(xì)胞。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件和Microsoft Excel 2003進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，各組資料測量結(jié)果以（x±s）表示。樣本符合正態(tài)分布，其差異采用獨立樣本t檢驗進(jìn)行分析，P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌患者DNT細(xì)胞分布

胃癌患者DNT細(xì)胞比例（9.11±5.56）%高于正常對照組（4.84±1.43）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜ 0.01），見圖1。胃癌患者DNT細(xì)胞流式散點圖見圖2C、2D，正常健康對照組DNT細(xì)胞流式散點圖見圖2A、2B。

圖1 胃癌患者和正常對照組DNT細(xì)胞分布情況

注：以CD3/SSC設(shè)門圈定T淋巴細(xì)胞（圖A，C）并應(yīng)用于CD4-FITC/CD8-PE雙參數(shù)散點圖（圖B，D）分析DNT細(xì)胞

圖2 CD3+CD4-CD8-（DNT）細(xì)胞典型流式散點圖

2.2 T細(xì)胞亞群分布

胃癌患者CD8+比例高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜ 0.01），胃癌患者CD4+比例、CD4+/CD8+比值均低于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜ 0.01）。見表1。＼

表1 胃癌患者T細(xì)胞和健康對照組T細(xì)胞亞群分布（x±s）

3 討論

近年來CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞廣泛受到人們的關(guān)注，它在免疫調(diào)節(jié)和抑制自身免疫性疾病等方面都發(fā)揮了非常重要的作用，而DNT細(xì)胞這群新發(fā)現(xiàn)的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞也具有免疫抑制功能，有報道稱它的免疫調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞[4，5]，DNT細(xì)胞可針對性地清除具有同樣TCR特異性的已激活的CD8+細(xì)胞，并誘導(dǎo)抗原特異性免疫耐受[6-8]。

本文實驗結(jié)果顯示胃癌患者DNT細(xì)胞比例明顯高于健康對照組，這與徐利軍等[9]在小鼠中的研究結(jié)果一致，提示DNT細(xì)胞的異常表達(dá)可能參與了胃癌疾病的發(fā)生、發(fā)展過程，它可能通過抑制CD8＋T淋巴細(xì)胞的抗腫瘤排斥反應(yīng)，從而在體內(nèi)起到了抑制抗腫瘤免疫作用，但確切的作用機(jī)制目前還不清楚，有待于進(jìn)一步研究。

胃癌的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)，當(dāng)機(jī)體的免疫功能下降時，機(jī)體的免疫清除以及免疫監(jiān)視能力下降，使得腫瘤的發(fā)病率增高。

本實驗結(jié)果顯示胃癌患者組CD8+比例高于健康對照組，而CD4+比例、CD4+/CD8+比值均低于健康對照組，這與國內(nèi)外報道一致[10-12]，這可能是機(jī)體內(nèi)的免疫平衡失調(diào)，造成惡性腫瘤患者的免疫功能減退或受到抑制。

綜上所述，DNT可能參與了胃癌的發(fā)病機(jī)制，深入研究DNT細(xì)胞在胃癌發(fā)病機(jī)制中的作用，不僅可為胃癌發(fā)病機(jī)制研究提供新的思路，并能為胃癌的免疫學(xué)治療提供新的方法。

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（收稿日期：2012-04-24）