徐 麗，張?zhí)m威，*，張玉梅，薛 勇，劉釗燕，呂艷麗

(1.哈爾濱工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150081;

2.北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生學(xué)院，北京 100191)

兩代繁殖實(shí)驗(yàn)研究牛初乳粉對(duì)大鼠生殖發(fā)育的影響

徐 麗1，張?zhí)m威1，*，張玉梅2，薛 勇2，劉釗燕2，呂艷麗2

(1.哈爾濱工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150081;

2.北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生學(xué)院，北京 100191)

為探討圍產(chǎn)期接受牛初乳粉對(duì)子代生殖發(fā)育的影響，設(shè)計(jì)了兩代繁殖實(shí)驗(yàn)，分析親代和子代雌雄鼠血清激素水平，生殖器官發(fā)育和生殖受孕變化。結(jié)果表明:食用含有牛初乳粉的飼料后，親代和子代雌鼠生殖受孕指標(biāo)及雄鼠精子密度和活率與空白組相比無(wú)顯著差異(p＞0.05)。親代和子代雄鼠血清激素水平與空白組相比無(wú)顯著差異(p＞0.05)，但親代雌鼠血清中催乳素和孕酮顯著低于空白組(p＜0.05)，子一代血清中催乳素顯著低于空白組(p＜0.05)。子二代雌鼠F2a生殖器間距與空白組相比顯著降低(p＜0.05)，子二代F2b的陰道開(kāi)口時(shí)間推遲(p＜0.05)，不能確定是偶然發(fā)生還是受生理影響所致，需要重復(fù)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。

牛初乳粉，兩代繁殖研究，精子活率，生殖器間距

許多研究已調(diào)查人類食用的動(dòng)物源性食物包括乳制品中含有多種內(nèi)源性激素，這些食物的攝入與人類癌癥的發(fā)生率存在顯著的流行病學(xué)相關(guān)性［1］。食物中攜帶的激素特別是類固醇激素具有較強(qiáng)的激素活性，促進(jìn)了人類癌癥的發(fā)生［2］。同樣，男性生殖能力下降，精子數(shù)量降低及精子發(fā)育異常與類固醇激素的暴露也相關(guān)［3－4］。乳制品是人類倍受睛睞的食物，現(xiàn)代的商業(yè)乳75%來(lái)自懷孕乳牛分泌的乳，雌激素水平顯著提高。通過(guò)對(duì)西方人的膳食模式調(diào)查發(fā)現(xiàn)，因攝入乳制品而給人體帶入的雌激素占動(dòng)物膳食來(lái)源雌激素的60%～70%［5］。研究表明青春期前兒童飲用懷孕乳牛分泌的牛乳后，尿液中雌激素水平顯著提高，性發(fā)育受到影響［6］。懷孕乳牛分泌的乳汁也使人類生殖發(fā)育受到不利影響［7］。除常乳外，牛初乳也是人類消費(fèi)的主要乳制品。牛初乳中的雌激素及孕激素等類固醇化合含量高于牛乳［8］。但作為人類功能食品和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的牛初乳制品始終缺乏針對(duì)人類生殖發(fā)育影響的研究報(bào)道。本研究采用兩代動(dòng)物繁殖實(shí)驗(yàn)探討圍產(chǎn)期接受牛初乳粉對(duì)SD大鼠子代生殖發(fā)育的影響，重點(diǎn)探討SD大鼠在攝入牛初乳粉后雌雄鼠的內(nèi)分泌激素水平，生殖器官發(fā)育及成年后的生殖受孕變化。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

甲醇、乙醇 分析純，購(gòu)于北京化工廠;瑞氏染液、Giemsa染液、f12培養(yǎng)液 均購(gòu)于中科邁晨科技有限公司;蘇木精染液、酸酒精、伊紅染液 均購(gòu)于北京益利化學(xué)品有限公司;促黃體生成素(LH)測(cè)定試劑盒、促卵泡激素(FSH)測(cè)定試劑盒、孕酮(P)測(cè)定試劑盒、雌二醇(E2)測(cè)定試劑盒、睪酮(T)測(cè)定試劑盒 均購(gòu)于北京科美生物技術(shù)有限公司;牛初乳粉 哈爾濱康普生物科技公司贊助(其中可的松含量為 19.84μg/kg，氫化可的松 15.03μg/kg，睪酮1.41μg/kg，雄烯二酮2.17μg/kg，孕酮13.00μg/kg，雌二醇9.71μg/kg，雌酮21.08μg/kg)。

WLZY－9000型偉力彩色精子質(zhì)量檢測(cè)系統(tǒng) 北京偉力技貿(mào)公司;DFM－96型放射免疫計(jì)數(shù)器

合肥眾成機(jī)電技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司;奧林巴斯CKX－41型光學(xué)顯微鏡 日本。

1.2 動(dòng)物飼料的配制和分組

動(dòng)物飼料分為空白飼料和牛初乳粉飼料，空白授試物為能夠滿足SD鼠日常所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而配制的標(biāo)準(zhǔn)飼料。牛初乳粉飼料是在空白飼料基礎(chǔ)上添加牛初乳粉，并調(diào)整其他輔料配比以達(dá)到能量均衡，蛋白質(zhì)，脂肪及碳水化合物與空白組一致，其中牛初乳粉提供了授食物37%的蛋白質(zhì)、6.7%脂肪和4.3%碳水化合物。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供，為SPF級(jí)4周齡健康SD大鼠雌雄各20只，體重分別為(80±20)g和(100±20)g。本次實(shí)驗(yàn)獲得北京大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。SD大鼠在SPF級(jí)動(dòng)物房溫度(23±2)℃，相對(duì)濕度50% ±5%，24h晝夜交替，光照時(shí)間為6:00～18:00適應(yīng)3d后，根據(jù)體重隨機(jī)分為空白組和牛初乳粉組，每組雌雄各十只，分別編號(hào)，并分籠飼養(yǎng)，每籠3～4只，自由攝入水和飼料。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物繁殖實(shí)驗(yàn)操作流程 親代鼠在不同飼料干預(yù)8周后雌雄鼠合籠，合籠雌雄比例為2∶1，雌鼠每天都合籠，雄鼠輪換。每晚22:00合籠，次日8:00做陰道涂片，鏡下檢查涂片有精子表示合籠成功。按圖1流程完成兩代繁殖實(shí)驗(yàn)。親代雌鼠在合籠、懷孕及哺乳期間都食用實(shí)驗(yàn)飼料。幼鼠斷乳后繼續(xù)接受相應(yīng)組飼料，從生命第五周開(kāi)始每隔一周測(cè)定親代和子一代雌雄鼠體重至生命12周。親代和子一代雌鼠懷孕后測(cè)定第0、7、14、21d體重。子一代和子二代幼鼠出生后測(cè)定第0、4、7、14、21d體重。

1.3.2 雌雄鼠生殖器間距及雌鼠動(dòng)情周期檢測(cè) 雌雄鼠斷乳后觀察陰道開(kāi)口時(shí)間和包皮張開(kāi)時(shí)間，并于35d測(cè)量子鼠肛門生殖器間距，精確度為0.1mm。實(shí)驗(yàn)雌鼠膳食干預(yù)5周后，做陰道涂片，鏡下觀察涂片狀況，連續(xù)觀察三周確定動(dòng)情周期。

圖1 兩代繁殖實(shí)驗(yàn)親代，子一代，子二代實(shí)驗(yàn)流程Fig.1 Experimental outline for parental，offspring F1，F(xiàn)2a and F2b generations in two－generation reproduction

1.3.3 親代和子一代雌雄鼠血清激素檢測(cè) 雌雄鼠處死后取股動(dòng)脈血，低溫離心分離得血清，采用放射性免疫吸附法檢測(cè)雄鼠血清中促黃體生成激素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睪酮(Testosterone)激素水平，和雌鼠血清中促黃體生成激素(LH)、卵泡刺激素 (FSH)、雌二醇 (Estradio－17β)、孕酮(Progesterone)、催乳素(Prolactin)水平。

1.3.4 親代和子一代雄鼠精子數(shù)和活率測(cè)定 分離雄鼠左側(cè)附睪，稱重后，立即放置于1m L含有1%小牛血清的f12培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱)中，用眼科剪剪碎，5m in后吸取上清，利用 Computer－aided sperm analysis(CASA)系統(tǒng)評(píng)價(jià)精子數(shù)及活力。

1.3.5 親代和子一代雌雄鼠組織器官和體重比 親代和子一代雌雄大鼠12h禁食后稱重，之后處死，摘取雄鼠左側(cè)附睪、右側(cè)附睪、左側(cè)睪丸、右側(cè)睪丸、左側(cè)儲(chǔ)精囊和右側(cè)儲(chǔ)精囊稱重，摘取雌鼠左側(cè)卵巢、右側(cè)卵巢和子宮稱重，與處死前禁食12h后的體重相比，得到臟體比。

2 結(jié)果與討論

2.1 親代雌雄鼠生長(zhǎng)狀況及生殖發(fā)育

2.1.1 親代雌雄鼠體重及臟器重量比 4周齡SD鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)期，第五周隨機(jī)分組后開(kāi)始監(jiān)測(cè)各實(shí)驗(yàn)組雌雄鼠體重至12周齡，此期間，牛初乳粉組雄性鼠從第8周齡開(kāi)始體重明顯高于空白組(p＜0.05)。兩組雌鼠在此期間體重?zé)o統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)，如圖2所示。

圖2 親代雌雄鼠體重變化Fig.2 Weight of partenal female and male

親代雄鼠與雌鼠被處死前稱量體重，處死后取臟器稱重。如表1所示，牛初乳粉組雄鼠在處死前體重顯著高于空白組，且左儲(chǔ)精囊臟體比也顯著高于空白組(p＜0.05)。而牛初乳粉組雌鼠處死前體重及各臟體比與空白組無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。

表1 親代雌雄鼠器官重量(±SD) Table 1 Organ weights of parental andoffspring generation female and male rats(±SD)

表1 親代雌雄鼠器官重量(±SD) Table 1 Organ weights of parental andoffspring generation female and male rats(±SD)

注:*:與空白組的差異。表3、4、7、9、10、12同。

指標(biāo) 空白組 牛初乳粉組雄性體重(g) 606.64±16.74 689.07±56.56*臟體比(‰) 1.87±0.45 1.93±0.58右睪丸 2.89±0.29 2.78±0.52左睪丸 2.93±0.32 2.91±0.33右附睪 0.58±0.09 0.54±0.05左附睪 0.61±0.13 0.56±0.10右儲(chǔ)精囊 0.50±0.09 0.45±0.07左儲(chǔ)精囊 0.55±0.09 0.45±0.08*雌性體重(g) 333.19±30.31 340.69±19.06臟體比(‰)右卵巢 0.33±0.08 0.29±0.05左卵巢 0.32±0.06 0.27±0.06子宮

2.1.2 親代雌鼠生殖指標(biāo) 如表2所示兩組雌鼠孕期體重、受孕率、妊娠率、孕期時(shí)間等均無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。牛初乳粉組小鼠出生后存活率略高于空白組，但兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。對(duì)于出生小鼠的性別，牛乳粉組出生的雄性小鼠比率高于空白組，但兩組間也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。

表2 親代雌鼠生殖數(shù)據(jù)(±SD)Table 2 Parental reproductive data(±SD)

表2 親代雌鼠生殖數(shù)據(jù)(±SD)Table 2 Parental reproductive data(±SD)

注:a受孕率(%)=懷孕動(dòng)物數(shù)/交配雌性動(dòng)物數(shù)×100;b妊娠率(%)=分娩有活體幼仔的窩數(shù)/懷孕動(dòng)物數(shù)×100;c出生存活率(%)=產(chǎn)后4 d仔鼠存活數(shù)/出生時(shí)活仔數(shù)×100; d性別比=仔鼠成熟時(shí)雄鼠數(shù)/雌鼠數(shù)。表7同。

10 10受孕率(%)a 100 100妊娠率(%)b 100 100出生存活率(%)c 95.71 99.22動(dòng)情周期(d) 4.32±0.53 4.46±0.64繁育幼鼠性別比d 1.00±0.97 1.19±0.59雌鼠懷孕后體重(g) 0d 311.00±31.26 323.45±30.36 7d 348.53±36.39 352.34±27.67 14d 387.58±32.74 382.25±33.69指標(biāo) 空白組 牛初乳粉組配對(duì)動(dòng)物數(shù)21d 483.62±29.87 474.43±49.05

2.1.3 親代雄鼠精子數(shù)量和活率 如表3所示牛初乳粉組精子總數(shù)顯著高于空白組(p＜0.05)，兩組間精子密度與精子活率無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。

表3 親代雄鼠精子數(shù)量及質(zhì)量(±SD)Table 3 Sperm counts and quality of parentalmale(±SD)

表3 親代雄鼠精子數(shù)量及質(zhì)量(±SD)Table 3 Sperm counts and quality of parentalmale(±SD)

指標(biāo) 空白組 牛初乳粉組精子總數(shù) 105.00±33.76 141.44±33.55* 15.78±8.28 16.14±4.47精子密度(百萬(wàn)/mL) 8.96±2.94 9.94±2.55精子活率(%)

2.1.4 親代雌雄鼠血清激素水平 如表4所示，兩組間雄鼠血清中睪酮、FSH、LH水平無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。牛初乳粉組雌鼠血清中催乳素和孕酮顯著低于空白組(p＜0.05)，其余激素兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異。

表4 親代血清激素水平(±SD)Table 4 Serum hormone concentrations of parents(±SD)

表4 親代血清激素水平(±SD)Table 4 Serum hormone concentrations of parents(±SD)

指標(biāo) 空白組 牛初乳粉組7.37±6.56 11.36±7.38雄鼠T(ng/dL) 141.59±176.19 259.93±279.52 FSH(m IU/mL) 0.26±0.17 0.17±0.21 LH(m IU/mL) 0.72±0.26 0.46±0.31雌鼠LH(m IU/mL) 0.46±0.31 0.72±0.26 FSH(m IU/m L) 0.22±0.10 0.21±0.13 PRL(ng/mL) 0.76±0.43 0.27±0.33* P(ng/mL) 112.70±64.17 41.92±25.13* E2(pg/mL)

2.2 子一代雌雄鼠生殖發(fā)育變化

子一代幼鼠出生后食用對(duì)應(yīng)母鼠的乳汁，監(jiān)測(cè)第0、4、7、14、21d體重變化，如表5所示。兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。

表5 子一代出生后體重Table 5 Weight of offspring after birth

子一代幼鼠3w后斷乳，之后食用與母鼠一致的飼料，第5w開(kāi)始每隔一周稱量體重至第12周，評(píng)估子一代體重變化。如圖3所示，兩組間雌雄鼠的體重?zé)o統(tǒng)計(jì)上的差異(p＞0.05)。

圖3 子一代雌雄鼠體重變化Fig.3 Weight of offspring female and male

測(cè)定幼鼠體重同時(shí)，觀察各組幼鼠生殖器官的發(fā)育如表6所示。兩組雄鼠包皮開(kāi)口時(shí)間在出生后33～35d之間，但無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。雌鼠陰道開(kāi)口時(shí)間在出生后31～33d之間，牛初乳粉組相對(duì)早于空白組，但兩組間也無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。出生后第35d雌雄鼠生殖器間距兩組間也無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。

表7 子一代(F1)生殖數(shù)據(jù)(±SD)Table 7 Offspring generation(F1)reproductive data(±SD)

表7 子一代(F1)生殖數(shù)據(jù)(±SD)Table 7 Offspring generation(F1)reproductive data(±SD)

10 10 10 10受孕率(%)a 80 100 70 100妊娠率(%)b 100 100 100 100出生存活率(%)c 99.15 95.23 100 99.34動(dòng)情周期(d) 4.73±0.55 4.83±0.54 / /繁育幼鼠性別比d 1.28±0.41 1.52±1.23 1.63±1.08 1.35±0.66雌鼠懷孕后體重(g) 0d 328.35±28.66 336.70±22.29 383.26±28.86 375.20±28.46 7d 357.30±27.08 359.75±24.97 414.19±40.74 406.48±32.04 14d 398.94±32.59 411.83±26.48 459.49±41.78 453.36±33.00 21d 455.7±90.73 508.83±35.49 557.79±36.16 560.96±34.50空白組 牛初乳粉組 空白組 牛初乳粉組配對(duì)動(dòng)物數(shù)指標(biāo) 子一代F1(第一次生育) 子一代F1(第二次生育) *

表6 子一代生殖器指標(biāo)(±SD)Table 6 Reproductive organ index of offspring F1 pups(±SD)

表6 子一代生殖器指標(biāo)(±SD)Table 6 Reproductive organ index of offspring F1 pups(±SD)

1.59±0.11 1.57±0.09 34.5±3.37 33.89±3.48雌鼠陰道開(kāi)口時(shí)間(d) 32.90±2.96 31.56±1.33 35日雄鼠生殖器間距(mm) 3.45±0.45 3.71±0.21 35日雌鼠生殖器間距(mm)指標(biāo) 空白組 牛初乳粉組雄鼠包皮開(kāi)口時(shí)間(d)

子一代雌鼠生育指標(biāo)如表7所示，兩組雌鼠動(dòng)情周期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。子一代雌雄鼠孕育兩次，測(cè)定兩次雌鼠懷孕期間第0、7、14、21d體重。第一次孕育期間，牛初乳粉組各時(shí)間段體重與空白組無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。第二次孕育期間，第21d牛初乳粉組雌鼠體重顯著高于空白組(p＜0.05)。兩次孕育牛初乳粉組受孕率和妊娠率均為100%，相對(duì)高于空白組。但出生后空白組幼鼠的存活率相對(duì)高于牛初乳粉組，主要因牛初乳粉組母鼠食掉幼鼠所致。對(duì)兩次孕育生出的幼鼠的性別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)兩組幼鼠的雄性數(shù)量均高于雌性數(shù)量，但兩組間在性別比上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。

子一代雄鼠精子活率測(cè)定如表8所示，兩組間雄鼠精子總數(shù)，精子密度和精子活率均無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。

表8 子一代雄鼠精子數(shù)量及質(zhì)量(±SD)Table 8 Sperm counts and quality of offspring generation male(±SD)

表8 子一代雄鼠精子數(shù)量及質(zhì)量(±SD)Table 8 Sperm counts and quality of offspring generation male(±SD)

27.39±7.47 24.35±7.17 111.30±62.76 109.20±51.10精子密度(百萬(wàn)/mL) 34.98±14.75 39.32±13.30精子活率(%)指標(biāo) 空白組 牛初乳粉組精子總數(shù)

子代雌雄生殖器官稱重與處死前體重比如表9所示，除處死前牛初乳粉組雄鼠體重顯著高于空白組(p＜0.05)，兩組間的雌雄鼠的臟體均無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。

子一代雌雄鼠孕育完兩次后處死，取血分析血清中激素水平如表10所示。牛初乳粉組雄鼠血清激素水平與空白組無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。對(duì)于雌鼠，除牛初乳粉組催乳素含量顯著高于空白組外(p＜0.05)，其余激素水平兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。

表9 子一代器官重量(±SD)Table 9 Organ weights of offspring generation rats(±SD)

表9 子一代器官重量(±SD)Table 9 Organ weights of offspring generation rats(±SD)

指標(biāo) 空白組 牛初乳粉組雄鼠體重(g) 702.74±59.97 787.3±63.13*右睪丸 2.18±0.24 2.02±0.24左睪丸 2.23±0.25 2.02±0.26右附睪 0.45±0.09 0.43±0.06左附睪 0.50±0.09 0.45±0.11右儲(chǔ)精囊 0.40±0.07 0.37±0.05左儲(chǔ)精囊 0.42±0.08 0.37±0.05雌鼠體重(g) 433.84±64.37 441.44±44.05臟體比(‰)臟體比(‰) 1.45±0.48 1.30±0.45右卵巢 0.19±0.06 0.17±0.07左卵巢 0.22±0.07 0.19±0.09子宮

表10 子一代血清激素水平(±SD)Table 10 Serum hormone concentration in parental and offspring generation rats(±SD)

表10 子一代血清激素水平(±SD)Table 10 Serum hormone concentration in parental and offspring generation rats(±SD)

指標(biāo) 空白組 牛初乳粉組9.10±4.30 9.31±3.33雄鼠T(ng/dL) 252.26±234.81 211.26±160.66 FSH(m IU/mL) 0.11±0.08 0.16±0.09 LH(m IU/mL) 0.30±0.06 0.31±0.04雌鼠LH(m IU/mL) 0.29±0.03 0.31±0.07 FSH(m IU/mL) 0.14±0.06 0.11±0.04 PRL(ng/mL) 43.16±21.25 57.57±38.62* P(ng/mL) 496.14±312.09 507.22±409.29 E2(pg/mL)

2.3 子二代(F2a，F(xiàn)2b)雌雄鼠生殖發(fā)育

子二代F2a，F(xiàn)2b幼鼠出生后第0、4、7、14、21d的體重的測(cè)定結(jié)果如表11所示。各時(shí)間段兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。

測(cè)定幼鼠體重同時(shí)，觀察兩組幼鼠生殖器官的發(fā)育如表12所示。F2a雄鼠包皮開(kāi)口時(shí)間在出生后32～34天之間，F(xiàn)2b雄鼠包皮開(kāi)口時(shí)間在33～35d之間，兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。F2a雌鼠陰道開(kāi)口時(shí)間在出生后32～33d之間，兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異。但F2b雌鼠陰道開(kāi)口時(shí)間在30～34d之間，牛初乳粉組顯著遲于空白組(p＜0.05)。F2a出生后第35d雄鼠生殖器間距牛初乳粉組與空白組無(wú)差異(p＞0.05)，F(xiàn)2b第35d雄鼠生殖器間距兩組間也無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＜0.05)。對(duì)于雌鼠第35d生殖器間距，F(xiàn)2a牛初乳粉組均顯著低于空白組(p＜0.05)，F(xiàn)2b牛初乳粉組與空白組無(wú)統(tǒng)計(jì)差異(p＞0.05)。

表11 子二代出生后體重(±SD)Table 11 Weight of offspring(F2a，F(xiàn)2b)after birth(±SD)

表11 子二代出生后體重(±SD)Table 11 Weight of offspring(F2a，F(xiàn)2b)after birth(±SD)

天數(shù)(d) F2b空白組(g) 牛初乳粉組(g) 空白組(g) 牛初乳粉組(g) F2a 7.64±1.61 6.96±0.53 6.51±0.52 6.65±0.67 4 9.84±1.70 10.67±2.40 10.72±1.20 11.38±1.94 7 16.22±2.37 17.65±4.79 18.95±1.11 19.67±2.56 14 34.83±4.06 35.53±3.07 32.15±4.60 39.10±4.09 21 58.01±7.35 61.81±5.81 56.45±7.44 62.87±3.15 0

表12 子二代F2a、F2b生殖器指標(biāo)(±SD)Table 12 Reproductive organ index of offspring F2a and F2b pups(±SD)

表12 子二代F2a、F2b生殖器指標(biāo)(±SD)Table 12 Reproductive organ index of offspring F2a and F2b pups(±SD)

F2a F2b空白組 牛初乳粉組 空白組 牛初乳粉組雄鼠包皮開(kāi)口時(shí)間(d) 32.88±3.98 33.22±4.63 33.86±2.91 34.70±3.59指標(biāo)雌鼠陰道開(kāi)口時(shí)間(d) 32.13±2.30 32.00±3.02 30.14±0.90 33.67±2.55* 35日雄鼠生殖器間距(mm) 3.44±0.18 3.54±0.12 3.54±0.12 3.69±0.23 35日雌鼠生殖器間距(mm) 1.71±0.12 1.61±0.07*1.53±0.10 1.61±0.13

食用含有牛初乳粉的飼料后，親代雄鼠左儲(chǔ)精囊臟體比顯著降低，但在子代中未表現(xiàn)出相同的現(xiàn)象，推斷親代雄鼠左儲(chǔ)精囊臟體比的降低與牛初乳粉的攝入無(wú)關(guān)。雄鼠包皮開(kāi)口時(shí)間和雌鼠陰道開(kāi)口時(shí)間是大鼠一個(gè)可靠的無(wú)損操作青春期效應(yīng)指標(biāo)，子宮內(nèi)接受雌激素類物質(zhì)會(huì)使雄鼠包皮開(kāi)口時(shí)間推遲，雌鼠陰道開(kāi)口時(shí)間提前或推后［9－10］，暗示青春期發(fā)育受到影響。本研究使用的牛初乳粉含有相對(duì)含量較高的雌激素和孕激素，但圍產(chǎn)期接受牛初乳粉并未使兩代雄鼠血清中內(nèi)分泌激素產(chǎn)生異常，暗示了內(nèi)分泌系統(tǒng)沒(méi)有受到損害，雄鼠包皮開(kāi)口時(shí)間未被引起異常，即青春期發(fā)育正常。對(duì)于雌鼠，親代和子一代雌鼠的陰道開(kāi)口時(shí)間和動(dòng)情周期表現(xiàn)正常，但子二代F2b的陰道開(kāi)口時(shí)間明顯推遲，這一現(xiàn)象未在子二代F2a中表現(xiàn)，因此還不能真正推斷牛初乳粉的攝入延遲了子二代雌鼠的青春期發(fā)育，需要重復(fù)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。生殖器間距是評(píng)估子宮內(nèi)激素水平的敏感指標(biāo)，雌性生殖器間距只有雄性的一半，雄性幼仔生殖器間距變小與生殖系統(tǒng)雌化有關(guān)，暗示了可能在子宮內(nèi)受到了內(nèi)分泌干擾物的暴露，生殖系統(tǒng)受到損害［11－12］。本研究發(fā)現(xiàn)食用牛初乳粉后子二代雌鼠F2a生殖器間距與空白組相比顯著降低，但子一代和子二代F2b雌鼠生殖器間距表現(xiàn)正常，因此還不能確定這種現(xiàn)象的產(chǎn)生是偶然發(fā)生還是生物學(xué)的差異，仍需重復(fù)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。

3 結(jié)論

兩代繁殖實(shí)驗(yàn)證明了牛初乳粉對(duì)親代和子代雌雄鼠的生長(zhǎng)具有潛在的促進(jìn)作用，對(duì)于在圍產(chǎn)期接受牛初乳粉的子代幼鼠的青春期發(fā)育和生殖系統(tǒng)無(wú)明顯的嚴(yán)重?fù)p傷，沒(méi)有對(duì)SD大鼠生殖系統(tǒng)產(chǎn)生明顯的不良影響。對(duì)于子二代F2a雄鼠生殖器間距和F2b雌鼠陰道開(kāi)口時(shí)間的異常表現(xiàn)需要重復(fù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步證實(shí)。

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Effect of bovine colostrum s powders on reproductive development in male and female rats assessed by a two－generation reproduction

XU Li1，ZHANG Lan－wei1，*，ZHANG Yu－mei2，XUE Yong2，LIU Zhao－yan2，LV Yan－li2
(1.School of Food Science and Engineering，Harbin Institute of Technology，Harbin 150081，China;
2.Department of Nutrition and Food Hygiene，School of Public Health，Peking University Health Science Center，Beijing 100191，China)

To exam ine the effect of bovine colostrum powder on the rep roductive development and rep roductive ability of offsp ring rats when the exposure began in uteri，the two－generation rep roduction study was designed.The hormone levels in serum，the developm entof rep roduc tive organs and rep roduc tive date were detec ted.There were no significant differences in fertility or rep roductive organ developmentof both parents and offsp ring female pups，or in the germ cell numbers and the germ ac tivity of both parents and offsp ring male pups between bovine colostrum powder g roup and controlg roup(p＞0.05).There were no significantdifferences in the hormone levels of parents and offsp ring male pups between two g roups(p＞0.05).However，the p rogesterone content of parents female rats and the p rolactin contents of parents and offsp ring female pups in bovine colostrum powder g roup were significant lower than those of controlg roup(p＜0.05).The anogenital d istance of F2a fem ale pups in bovine colostrum powder g roup was shorten(p＜0.05)，and the vaginal open of F2b fem ale pups in bovine colostrum powder g roup were delayed com paring w ith control g roup(p＜0.05).It was unknown whether they occurred by chance or was biolog ically significant until this treatment effect is rep licated.

bovine colostrum s powder;two－generation study;sperm ac tivity;anogenital d istance

TS202

A

1002－0306(2012)19－0335－06

2012－02－28 *通訊聯(lián)系人

徐麗(1976－)，女，在讀博士，研究方向:食品科學(xué)與工程。