吳宏萍 魏云 楊紅文

摘要：建立了同時(shí)測定白酒中四種甜味劑（安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS-MS）分析方法，采用Poroshell 120 EC-C18柱，以含0.1%甲酸的水-甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速0.4mL/min，在電噴霧電離（ESI）負(fù)離子模式下，采用多重反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行檢測，線性范圍均在5～100?g /L；安賽蜜檢出限為1?g /L，糖精鈉檢出限為 1?g /L，甜蜜素檢出限為1?g /L，阿斯巴甜檢出限為1?g /L。四種成分的加標(biāo)回收率為89～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均不大于2.5%。該法快捷、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

關(guān)鍵詞：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS-MS）；白酒；安賽蜜；糖精鈉；甜蜜素；阿斯巴甜

中圖分類號(hào)：Q81 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-4437（2014）02-0060-04

中國白酒歷史悠久，它與威士忌、伏特加、白蘭地、朗姆酒、金酒并稱為世界六大蒸餾酒。中國白酒以糧谷為主要原料，以大曲、小曲等為糖化發(fā)酵劑，經(jīng)蒸煮、糖化、發(fā)酵、蒸餾而制成[1]。其工藝精良、風(fēng)味獨(dú)特，深受廣大消費(fèi)者喜愛。甜味對(duì)白酒的風(fēng)味起著很大的作用?，F(xiàn)代研究表明，優(yōu)質(zhì)發(fā)酵生產(chǎn)白酒之所以具有醇甜感，是由于白酒本身含有一定的多元醇或酮等甜味物質(zhì)，如2，3-丁二醇、丙三醇、雙乙酞等。保持適度甜味的白酒，可以給人以甘醇、綿甜的愉悅感。近年來為適應(yīng)新的消費(fèi)需求，增加白酒的甜味、回甜感 ，添加甜味劑成為了眾多白酒企業(yè)競相研究的課題。甜味劑是一類重要的食品添加劑，它賦予食品以甜味，可以改善食品口感，提高食品的品質(zhì)。目前，廣泛應(yīng)用的人工合成甜味劑主要包括甜蜜素、阿斯巴甜、糖精鈉、安賽蜜等。我國只允許在配制酒中添加少量甜蜜素、三氯蔗糖、糖精鈉等甜味劑，研究表明，攝入高劑量的甜味劑會(huì)對(duì)人體的肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成傷害，甚至引發(fā)癌癥，因此人工合成甜味劑的合理使用不僅關(guān)系到產(chǎn)品的品質(zhì)，更關(guān)系到消費(fèi)者的健康、安全。我國強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，禁止在發(fā)酵酒中添加甜味劑。各香型白酒國家標(biāo)準(zhǔn)中也規(guī)定，優(yōu)級(jí)、一級(jí)、二級(jí)均不得加入非自身發(fā)酵物質(zhì)。

目前，已建立的測定甜味劑的方法很多，包括高效液相色譜法-紫外檢測法、毛細(xì)管氣相色譜法、超高壓液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法、紫外分光光度法，但這些方法都不適合白酒中多種甜味劑的檢測，這些方法存在著檢出限不能滿足檢測要求 、易出現(xiàn)假陽性等問題，不能滿足白酒中甜味劑的檢測要求。

本研究運(yùn)用LC-MS-MS方法對(duì)白酒中安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜同時(shí)進(jìn)行測定，可對(duì)白酒中多種痕量甜味劑含量進(jìn)行監(jiān)控，有利于提高白酒整體質(zhì)量控制水平，保障白酒的食品質(zhì)量和安全。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

Agilent 1260 Infinity LC System， Agilent 6460 Triple Quad LC/MS（美國，Agilent 公司）；Milli-Q超純水裝置（美國，Millipore公司）；AL204電子天平（上海梅特勒錯(cuò)誤！未找到引用源。SK2200HP型數(shù)控超聲波清洗器（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）

甲醇（色譜純，F(xiàn)isher公司）；甜蜜素、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜均購自德國Dr.Ehrenstorfer 公司，實(shí)驗(yàn)室用水為超純水。

1.2 溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精確稱取四種標(biāo)準(zhǔn)品各0.1g，分別用超純水溶解并定容至100mL容量瓶中，配成質(zhì)量濃度為1000mg/L的各標(biāo)準(zhǔn)品單標(biāo)儲(chǔ)備液，于0～4℃下保存。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取一定體積的安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜的單標(biāo)儲(chǔ)備液混合于容量瓶中，用PH4.3的水（用乙酸調(diào)節(jié)PH為4.3）定容，逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度范圍為5～100?g /L系列的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確吸取白酒樣品2mL，過0.22?m濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析

1.4 色譜條件

采用Agilent Poroshell 120 EC-C18色譜柱（50mmx3.0mm，2.7?m）；以0.1%甲酸的水（A）-甲醇（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫程序：0～2min，10%B～60%B；2～5min，60%B～10%B；流速為0.4mL/min；進(jìn)樣量為5?L。

1.5 質(zhì)譜條件

離子源為電噴霧電離源（ESI），采用負(fù)離子檢測模式。干燥氣：N2，溫度為325℃，流速為8L/min；霧化氣：N2，霧化器壓力為3.1x105Pa，毛細(xì)管電壓為4000V。采用多重反應(yīng)監(jiān)測模式，四種目標(biāo)組分的其他質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

對(duì)常用流動(dòng)相水-甲醇和水.-乙腈進(jìn)行了考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明使用水-甲醇體系作流動(dòng)相時(shí)靈敏度高于水-乙腈體系，色譜峰形對(duì)稱，且分離效果更好。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)條件下采用負(fù)離子模式檢測各物質(zhì)，采用MRM模式，以不同的碰撞能量將待測物的準(zhǔn)分子離子打碎，以子離子響應(yīng)最強(qiáng)時(shí)的參數(shù)來確定碰撞能量和裂解電壓。

2.3 色譜與質(zhì)譜行為

在選定的色譜—質(zhì)譜條件下，被測組分間可獲得良好的分離，色譜圖見圖1.根據(jù)峰的保留時(shí)間及質(zhì)譜信息進(jìn)行定性。

2.4線性關(guān)系及檢出限

取各標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，精確配置一系列不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)液，于優(yōu)化后的條件下分別進(jìn)樣測定，重復(fù)3次，以各物質(zhì)特征碎片離子（定量離子）峰面積的平均值（Y）對(duì)被測組分的質(zhì)量濃度（X，?g /L）進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍；以信噪比（S/N）為3確定4種待測組分的檢出限；結(jié)果為表2。

2.5精密度和回收率實(shí)驗(yàn)

取不含4種人工合成甜味劑的白酒樣品6份，分別向其中添加50?g/L、100?g/L、200?g /L的3種不同濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照以上實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行測定，每個(gè)添加水平進(jìn)行6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，分別計(jì)算4種物質(zhì)的回收率，結(jié)果見表3。本方法在3個(gè)濃度添加水平下，4種成分的加標(biāo)回收率在89%～102%，RSD均小于或等于2.5%，能滿足測定要求。

2.6 樣品分析

按照上述優(yōu)化好的條件對(duì)市售的8種白酒進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果見表4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法能滿足白酒中四種甜味劑的同時(shí)檢測。

3. 結(jié)論

本文研究了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定白酒中安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜四種甜味劑含量的方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有簡便、快捷、準(zhǔn)確、靈敏和定性能力強(qiáng)的特點(diǎn)

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參考文獻(xiàn)：

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