曾慶斌，郭茜旎，羅晴，吳光耀，周欣*

圖1 錳離子增 強(qiáng)的小鼠嗅球MRI。A：灌注MnCl2前，(左)矢狀圖，(右)冠狀圖；B：灌注MnCl2后，(左)矢狀圖，(右)冠狀圖[11]Fig.1 Manganese-enhanced imaging (MEMRI) of mouse olfactory bulb.A: Pre-infusion MnCl2, (left) sagittal image, (right) coronal image.B: Postinfusion MnCl2, (left) sagittal image, (right) coronal image [11].

自從1973年Lauterbur[1]首次實現(xiàn)MRI，1977年Mans fi eld[2]利用回波平面成像(echo planar imaging,EPI)提高了成像效率以來，MRI這項技術(shù)在世界范圍內(nèi)的生物、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域獲 得很好的發(fā)展和廣泛應(yīng)用。因其優(yōu)勢明顯使其成為目前活體狀態(tài)下，顯示人體結(jié)構(gòu)的一種主要的臨床影像技術(shù)。其中，功能MRI(fMRI)更是在研究大腦的功能結(jié)構(gòu)、大腦活動以及病理狀態(tài)中起著中流砥柱的作用[3]。在醫(yī)學(xué)診斷中，為了得到更高的信號對比度，往往就要用到MRI對比劑(contrast agent, CA)。調(diào)查表明， 在現(xiàn)如今的MRI實驗中，有40%～50%的實驗都要用到對比劑[4]。目前臨床上正在使用和研發(fā)的對比劑按照其作用原理來說，可以分為T1對比劑和T2對比劑兩類。一種合格的可供臨床使用的MRI對比劑需要同時滿足以下幾個條件：(1)足夠的穩(wěn)定性；(2)低毒性；(3)高弛豫率；(4)靶向性；(5)在體內(nèi)既有足夠的停留時間又易于排出[5]。理論上來說多種過渡金屬和鑭系金屬都可以用作磁共振對比劑，但釓一直以來就是順磁性對比劑的首選金屬，因為三價態(tài)的釓?fù)鈱佑?個未成對電子，具有很強(qiáng)的順磁弛豫增強(qiáng)能力。雖然含釓類對比劑使用較為廣泛，但是含釓類對比劑有可能引起一種雖然罕見卻極 其嚴(yán)重的疾病——腎源性系統(tǒng)性纖維化(nephrogenic systemic fibrosis, NSF)[6]，因此含釓類對比劑的使用也具有一定的局限性。過渡態(tài)金屬錳是一種生物體內(nèi)必須的微量元素，毒性非常低。二價態(tài)的錳外層有5個未成對電子，也具有很強(qiáng)的順磁弛豫增強(qiáng)能力，這些特殊的性質(zhì)使得錳在磁共振成像中也得到了一定的應(yīng)用，是一種較早期的用于MRI的順磁性對比劑。筆者將對錳對比劑最近的最新研究進(jìn)展及應(yīng)用進(jìn)行綜述。

1 錳對比劑的特性

錳因其良好的電子排布以及獨特的生物化學(xué)性質(zhì)，使其在磁共振對比劑領(lǐng)域也占有一席之地。錳對比劑相對于其他對比劑來說，特征比較明顯：一是存在形勢比較多樣，如有錳鹽、小分子有機(jī)螯合物、大分子螯合物、氧化物納米粒子等多種類型；二是錳對比劑毒性較低；三是錳對比劑可以用于神經(jīng)影像的研究，因Mn2+是Ca2+的類似物，Mn2+可通過在神經(jīng)活動時打開的電壓門控Ca2+通道進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞，并且可以通過基于微管道的傳輸系統(tǒng)在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)傳遞，因此Mn2+可以運用于神經(jīng)影像學(xué)的研究。

2 錳對比劑的相關(guān)研究及應(yīng)用

2.1 錳無機(jī)鹽的研究進(jìn)展及應(yīng)用

Mn2+是最早用于MRI的順磁 性對比劑，早在1973年，Lauterbur[1]在其發(fā)表的文章中就用到了MnSO4作為MRI對比劑來提高信號對比度。1997年，Lin等[7]提出了錳離子增強(qiáng)磁共振成像(MEMRI)技術(shù)，該方法 通過在生物體內(nèi)直接引入外源性的Mn2+作為對比劑來直接或者動態(tài)的研究神經(jīng)細(xì)胞的功能活動。目前MEMRI在動物神經(jīng)影像研究中的應(yīng)用可以概括為三個方面：(1)神經(jīng)纖維追蹤，(2)大腦形態(tài)學(xué)研究，(3)腦功能成像[8]。錳曾作為對比劑來提高信號對比度從而研究大腦的局部缺血，Aoki等[9]在2003年利用MEMRI技術(shù)來研究大鼠中風(fēng)模型中的神經(jīng)興奮性毒性影像，該方法對大腦動脈栓塞腦缺血具有較好的診斷作用。李英霞等[10]利用MEMRI技術(shù)成功的顯示了大鼠急性腦缺血過程中的Ca2+超載過程。2007年，Bock等[8]以MnCl2·4H2O作為對比劑來研究大鼠腦部結(jié)構(gòu)。2013年，Gutman等[11]利用MEMRI及DTI技術(shù)對小鼠的嗅覺系統(tǒng)進(jìn)行了相關(guān)研究，在小鼠鼻腔灌注MnCl2后，小鼠的嗅球信號得到了明顯的加強(qiáng)(圖1)。

錳不僅可以用于神經(jīng)影像的研究還可以運用于肝臟的影像研究。以前已有的對肝臟具有特異性的錳對比 劑的給藥方式都是通過靜脈注射的方式，然而這種方法會導(dǎo)致不必要的副作用和并發(fā)癥，為了解決這個問題，2006年，Elizaveta等[12]通過給病人口服CMC-001對比劑(該對比劑包含1.6 g MnCl2·4H2O，1 g丙氨酸，1600IU維生素D3)，利用這種方法不但能夠解決靜脈注射會產(chǎn)生的副作用，而且成功的監(jiān)測到肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程。

圖2 大鼠腦部MR T1WI (A、B、C)、T2WI (D、E、F)、注射對比劑后15 h (A、D)、注射對比劑后24 h(B、E)，注射對比劑后72 h (C、F)[18]Fig.2 The MRI of rat brain, T1-weighted image (A, B, C), T2-weighted image (D, E, F), post- injected 15 h(A, D), post-injected 24 h, (c, f) post-injected 72 h (B, E) [18].

MEMRI技術(shù)在糖尿病的診斷中也有一定的應(yīng)用。2013年，Antkowiak等[13]利用MEMRI技術(shù)，在環(huán)磷酰胺加速誘導(dǎo)的1型糖尿病小鼠模型中成功的監(jiān)測到了胰腺β細(xì)胞的減少。

2.2 錳有機(jī)小分子螯合物的研究進(jìn)展及應(yīng)用

降低錳的毒性，通常有兩種方案[14]：一是利用一些化合物和錳進(jìn)行螯合，進(jìn)而除去自由的錳，可以有效降低毒性；二是加入能和錳競爭的鈣離子，從而降低由鈣通道進(jìn)入細(xì)胞的錳的量。這兩種方案都能夠有效的降低錳的毒性。目前與錳螯合的有機(jī)小分子主要是卟啉和羧酸類化合物，錳卟啉對比劑具有比較好的信號對比增強(qiáng)效果，并且具有靶向功能。常見的用于與錳螯合的羧酸類化合物基本上都是DTPA和DOTA的系列衍生物。

2004年，Troughton等[15]合成出了一種基于EDTA衍生物的錳對比劑，該類對比劑在動物實驗時沒有表現(xiàn)出明顯的毒性。在兔子血管損傷模型中顯示出了較高的對比度。在注射該對比劑后，模型兔的正常部位和因損傷造成的炎癥部位形成了明顯的對比。

通過MRI進(jìn)行離子識別并且對一些離子的分布進(jìn)行測定逐漸成為一個重要的研究領(lǐng)域。Zhang等[16]2007年發(fā)表了一篇關(guān)于可特異性識別Zn2+的錳(Ⅲ)卟啉熒光/MRI雙模態(tài)探針的文章，該作者預(yù)測這種卟啉探針可以實現(xiàn)對生物體內(nèi)Zn2+的探測以及對Zn2+的分布進(jìn)行成像。在其后續(xù)的研究工作中[17]，成功的實現(xiàn)了對大鼠海馬區(qū)內(nèi)Zn2+的探測和對Zn2+的分布進(jìn)行磁共振成像，在將來有可能用于研究與鋅異常引起的精神疾病。

Bertin等[18]2009年合成出了一種新型的樹枝狀DTPA錳螯合物，4.7 T成像儀和20℃條件下，測得其T1弛豫率為1.3 mMM-1s-1，T2弛豫率為17.41 mM-1s-1。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)該種對比劑毒性很低，并且在大鼠模型中，當(dāng)注射對比劑24 h后，大鼠腦部的對比劑分布出現(xiàn)了差別，可以清晰的看出組織結(jié)構(gòu)(圖2)。此研究結(jié)果表明此對比劑不僅可以應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)的基礎(chǔ)研究，還有可能用于診斷帕金森綜合征(PD)或者阿爾茨海默綜合征(AD)。該類樹枝狀DTPA錳螯合物對比劑T1弛豫率(1.3 mM-1s-1)與MnCl2的T1弛豫率(6.9 mM-1s-1)相比低了很多，主要是因為該類樹枝狀DTPA錳螯合物不含結(jié)合水。有相關(guān)文獻(xiàn)[19]對金屬 結(jié)合水的個數(shù)與 弛豫率的關(guān)系進(jìn)行了論述，感興趣 的讀者可對其進(jìn)行參閱。

2.3 錳高分子螯合物的研究進(jìn)展及應(yīng)用

高分子材料因其合成技術(shù)成熟、化學(xué)結(jié)構(gòu)可控、易于化學(xué)修飾以及具有比較高的穩(wěn)定性等特點，得到了科學(xué)家們的廣泛關(guān)注。將順磁性金屬和高分子材料進(jìn)行結(jié)合得到磁共振對比劑是對比劑的一個重要發(fā)展方向。

2009年，Zhang等[20]通過葡聚糖和錳卟啉反應(yīng)得到了一種可以選擇性靶向癌細(xì)胞的錳卟啉高分子對比劑，其Mn-porphyrin-dextran T1弛豫率(8.9 mM-1s-1)比Gd-DTPA弛豫率(5.12 mM-1s-1)還高，在活體實驗中，注射對比劑后，腫瘤部位信號增強(qiáng)明顯，可以用于對癌癥的診斷。這種含有卟啉類化合物的對比劑一般弛豫率都比較高，主要是因為卟啉是一個平面結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)可以使水分子和順磁性金屬中心進(jìn)行充分的接觸，能量傳遞的將會更加有效，使得水分子的弛豫變快[20]。

圖3 小鼠腦部T1WI。A：功能化的MnO納米粒子選擇性的對小鼠腦部乳腺癌部位的信號加強(qiáng)；B：非功能化的MnO納米粒子對小鼠腦部的腫瘤部位和正常部位的信號均加強(qiáng)[28]Fig.3 The T1-weighted MRI of mouse brain.A: The functionalized MnO nanoparticles selectively enhanced the breast cancer cells.B: The nonfunctionalized MnO nanoparticles enhanced both the tumor and the normal brain tissue[28].

蛋白質(zhì)是生物體的重要組成部分，其兼容性高。近幾年，順磁性金屬與蛋白質(zhì)螯合的對比劑引起了科學(xué)家們的特別關(guān)注。2008年，Sotak等[21]合成出了一種錳(Ⅲ)-轉(zhuǎn) 鐵蛋白螯合物，該種對比劑可以標(biāo)記小鼠肝細(xì)胞，在肝細(xì)胞中其弛豫率和錳離子的差不多，雖然弛豫率很低，但是卻提供了一種新的對比劑設(shè)計思路：利用一種生物學(xué)過程來釋放對比劑，即利用受體結(jié)合、內(nèi)吞作用、內(nèi)酸化等過程來達(dá)到釋放對比劑的目的。這種想法為藥物載體以及藥物釋放提供了一種設(shè)計思路。2011年，Geninatti等[22]合成出了一種錳螯合去鐵鐵蛋白的對比劑(Mn-Apo)，這種對比劑一個去鐵鐵蛋白的空穴中含有300～400個錳原子，其T1弛豫率可以達(dá)到7000mM-1s-1(以去鐵鐵蛋白的量算，7 T成像儀上測得)，經(jīng)實驗研究發(fā)現(xiàn)這種對比劑可以對肝癌進(jìn)行很好的診斷，這種將錳離子封裝在去鐵鐵蛋白內(nèi)腔中的方法是一種有效的降低毒性和提高弛豫率的方法，并且去鐵鐵蛋白不會引起任何生物體內(nèi)的免疫反應(yīng)，可以使對比劑有較長的保留時間，為有效的進(jìn)行疾病診斷提供了保障。Winter等[23]最近合成出了一種錳卟啉取代硝酸亞鐵血紅素(H-NOX)的高弛豫率對比劑，其T1弛豫速率12 mM-1s-1，T2弛豫速率16.8 mM-1s-1(1.4 T成像儀，37 ℃測得)。這種新型的對比劑可以通過基因或者化學(xué)手段進(jìn)一步修飾從而增強(qiáng)MRI信號和提高生物兼容性。蛋白質(zhì)在水溶液中表面一般都會有一個結(jié)合水層，這些結(jié)合的水分子自由度降低，這樣這些水分子的自由運動頻率變得接近拉莫頻率，就可以產(chǎn)生比較有效的能量傳遞，使得T1弛豫時間縮短，另外順磁性金屬的存在也會進(jìn)一步的縮短T1弛豫時間，這兩種因素一起造成了順磁性金屬螯合蛋白質(zhì)的對比劑T1弛豫速率很大。

2.4 錳納米粒子的研究進(jìn)展及應(yīng)用

納米粒子材料因其特有的物化性質(zhì)，近幾年來一直是廣大科研工作者們的研究熱點，將順磁性金屬與納米粒子材料結(jié)合起來不僅可以增加其生物兼容性，還可以提高其弛豫率，是一個很有前景的發(fā)展方向。近年來，納米粒子對比劑越來越得到科研工作者的關(guān)注。

早在1993年，就有文獻(xiàn)[24]報道了基于脂質(zhì)體的錳納米粒子對比劑，該類對比劑是由脂質(zhì)體包裹的烷基化的錳組成，其毒性低、穩(wěn)定，并且其弛豫率比自由的錳更高，在活體成像實驗中顯示該類對比劑可以特異性的提高肝臟病變部位和正常部位的對比度。2008年，Pan等[25]首次通過具有兩親性質(zhì)的超支化聚乙烯亞胺(PEI)分子和Mn(Ⅲ)卟啉以及生物素的自組裝得到了粒徑在180～200nm之間的形如紅細(xì)胞的納米粒子對比劑，細(xì)胞實驗顯示，該類對比劑具有潛在的靶向能力。

Tan等[26]于2010年首次用Mn-DOTA與以硅三氧烷為核心的第三代賴氨酸樹狀高分子相互作用，然后再使之與具有靶向性的CLT1肽鏈作用，得到了可以靶向癌細(xì)胞的錳納米球?qū)Ρ葎摲N對比劑對比增強(qiáng)效果明顯，少量的注射量就可以得到足夠的信號對比度，將來可能應(yīng)用于癌癥診斷的分子影像中。在Tan等[27]的后續(xù)工作中，又通過NOTA或者DOTA與以硅三氧烷為核心的第二、三、四代賴氨酸樹枝狀高分子相互作用，然后再螯合Mn2+形成了一種新型的錳納米球?qū)Ρ葎＝?jīng)研究發(fā)現(xiàn)，不同的錳螯合物，弛豫速率不同，并且隨著代數(shù)的增長，弛豫率增加。在動物實驗中發(fā)現(xiàn)，很少量的注射對比劑，在動物模型的腫瘤部位就可以得到對比明顯的信號。該類對比劑因其熱力學(xué)穩(wěn)定性、在水中的高溶解度以及均勻的粒徑使其具有很廣闊的應(yīng)用前景。

錳氧化物納米粒子對比劑是另一個較重要的研究方向，2007年Na等[28]由油酸錳在300℃下熱分解得到球狀MnO納米粒子后，再將之包裹在聚乙二醇(PEG)或者磷脂殼膜中，即可得到具有水溶性的MnO納米粒子對比劑。該種對比劑生物兼容性較好，粒徑在10～30nm之間，在小鼠模型實驗中，T1WI可以得到對比明顯的圖像(圖3)，并且該種對比劑對乳腺癌細(xì)胞具有靶向性，可以對腦部轉(zhuǎn)移瘤的乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行選擇性成像。2011年，Kim等[29]開發(fā)出了一種新型的介孔二氧化硅涂層空心氧化錳納米粒子(HMnO@mSiO2)對比劑，這種含有介孔的納米殼可以使水分子充分接近磁性中心，進(jìn)而可以有效增強(qiáng)水中質(zhì)子的T1弛豫速率，在11.7 T譜儀上的弛豫速率為0.99 mM-1s-1，實驗發(fā) 現(xiàn)該種納米粒子可以被脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)很好的吸收。在小鼠模型實驗中，注射該對比劑14 d后，仍然可以得到具有一定對比度的圖像。因干細(xì)胞傾向于轉(zhuǎn)移到腫瘤位置，因此該對比劑可以用來檢測癌細(xì)胞并且可以追蹤癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程。該研究結(jié)果使利用MRI技術(shù)追蹤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程成為了可能。2013年，Xiao等[30]開發(fā)出了一種超高弛豫率的Mn3O4納米粒子對比劑，在3.0T成像儀上，水溶液質(zhì)子的T1弛豫率為8.26 mM-1s-1，PBS中質(zhì)子的T1弛豫率為6.79 mM-1s-1，該錳氧化物納米粒子的T1弛豫率為目前所見報道的所有錳氧化物納米粒子T1弛豫率的最高值。在細(xì)胞實驗及活體實驗中均未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性，并且在活體成像實驗中，腫瘤部位的成像對比效果明顯。該研究結(jié)果為錳氧化物納米粒子在臨床中的應(yīng)用鋪平了道路。

3 小結(jié)與展望

由于錳具有良好的電子排布和豐富的生物化學(xué)特性，以其作為對比增強(qiáng)對比劑相對于其他順磁性金屬對比劑來說具有很大的優(yōu)勢。然而自由的錳又是具有毒性的，超劑量的使用Mn2+，會導(dǎo)致Mn2+在大腦基底節(jié)、黑質(zhì)等腦區(qū)沉積，進(jìn)而引起腦細(xì)胞死亡，出現(xiàn)類似帕金森綜合癥的臨床癥狀，因此在利用錳作為對比劑之前需要將之進(jìn)行一定的修飾，比如將之包裹在脂質(zhì)體之內(nèi)或者用一些有機(jī)化合物與錳進(jìn)行螯合使之形成穩(wěn)定的化合物，這樣就可以有效的降低錳的毒性。因此尋找可以有效降低錳的毒性，又能和錳形成穩(wěn)定的化合物，并且生物兼容性好的配體就顯得尤為重要。聚合物、納米粒子材料都是很重要的研究方向，雖然目前在這方面的研究工作已經(jīng)很多，但是目前還沒有被批準(zhǔn)使用的錳對比劑，因此在錳造影的研發(fā)上還有很大的發(fā)展空間，還需要廣大的科研工作者做出更多的努力。

[References]

[1]Lauterbur PC.Image formation by induced local interactions:examples employing nuclear magnetic resonance.Nature, 1973,242(5394): 190-191.

[2]Mans fi eld P.Multi-planar image formation using NMR spin echoes.J Physics C: Solid State Physics, 1977, 10(3): L55-L58.

[3]Song WM, Chen NK.fMRI: a brief review and outlook on the stateof-the-art methodology.Chin J Magn Reson Imaging, 2013, 5(1):361-372.宋無名, 陳南圭.功能MRI：最先進(jìn)方法的簡要回顧和展望.磁共振成像, 2013, 5(1): 361-372.

[4]Shellock FG, Kanal E.Safety of magnetic resonance imaging contrast agents.J Magn Reson Imaging, 1999, 10(3): 477-484.

[5]Yan GP, Zhuo RX.Research progress of magnetic resonance imaging contrast agents.Chin Science Bulletin, 2001, 46(7): 531-538.鄢國平, 卓仁禧.磁共振成像造影劑的研究進(jìn)展.科學(xué)通報, 2001,46(7): 531-538.

[6]Kuo PH, Kanal E, Abu-Alfa AK, et al.Gadolinium-based MR con trast agents and nephrogenic systemic fibrosis.Radiology, 2007, 242(3):647-649.

[7]Lin YJ, Koretsky AP.Manganese ion enhances T1- weighted MRI during brain activation: an approach to direct imaging of brain function.Magn Reson Med, 1997, 38(3): 378-388.

[8]Bock NA, Paiva FF.Fractionated manganese-enhanced MRI.NMR Biomed, 2008, 21(5): 473-478.

[9]Aoki I, Ebisu T, Naruse S, et al.Detection of the anoxic depolarization of focal ischemia using manganese-enhanced MRI.Magn Reson Med,2003, 50(1): 7-12.

[10]Li YX, Fang K, Tang SM, et al.Mn2+ enhanced magnetic resonance molecular imaging.Chin J Interventional Imaging and Therapy, 2004,1(1): 65-70.李英霞, 方可, 唐山民, 等.以Mn2+為探針的磁共振分子影像技術(shù).中國介入影像與治療學(xué), 2004, 1(1): 65-70.

[11]Gutman DA, Magnuson M, Majeed W, et al.Mapping of the mouse olfactory system with manganese-enhanced magnetic resonance imaging and diffusion tensor imaging.Brain Struct Funct, 2013,218(2): 527-537.

[12]Elizaveta C, Vibeke L, Moller JM, et al.Imaging liver metastases with a new oral manganese-based contrast agent.Acad Radiology, 2006,13(7): 827-832.

[13]Antkowiak PF, Stevens BK, Nunemaker CS, et al.Manganeseenhanced magnetic resonance imaging detects declining pancreatic β-cell mass in a cyclophosphamide-accelerated mouse model of type 1 diabetes.Diabetes, 2013, 62(1): 44-48.

[14]Schaefer S, Lange RA, Gutekunst DP, et al.Contrast-enhanced magnetic resonance imaging of hypoperfused myocardium.Invest Radiology, 1991, 26(6): 551-556.

[15]Troughton JS, Greenfield MT, Greenwood JM, et al.Synthesis and evaluation of a high relaxivity manganese (II)- based MRI contrast agent.Inorg Chem, 2004, 43(20): 6313-6323.

[16]Zhang XA, Lovejoy KS, Jasanoff A, et al.Water-soluble porphyrins as a dual- function molecular imaging platform for MRI and fl uorescence zinc sensing.Proc Natl Acad Sci U S A, 2007, 104(26): 10780-10785.

[17]Lee T, Zhang XA, Dhar S, et al.In vivo Imaging with a cell-permeable porphyrin-based MRI contrast agent.Chem Biol, 2010, 17(6):665-673.

[18]Bertin A, Steibel J, Michou-Gallani AI, et al.Development of a dendritic manganese- enhanced magnetic resonance imaging (MEMRI)contrast agent: synthesis, toxicity (in vitro) and relaxivity (in vitro, in vivo) studies.Bioconjugate chem, 2009, 20(4): 760-767.

[19]Caravan P, Ellison JJ, McMurry TJ, et al.Gadolinium (III) chelates as MRI contrast agents: structure, dynamics, and applications.Chemical Rev, 1999, 99(9): 2293-2352.

[20]Zhang Z, He R, Yan K, et al.Synthesis and in vitro and in vivo evaluation of manganese (Ⅲ) porphyrin-dextran as a novel MRI contrast agent.Bioorg Med Chem Lett, 2009, 19(23): 6675-6678.

[21]Sotak CH, Sharer K, Koretsky AP.Manganese cell labeling of murine hepatocytes using manganese (Ⅲ)- transferrin.Contrast Media Mol Imaging, 2008, 3(3): 95-105.

[22]Geninatti CS, Cutrin JC, Lanzardo S, et al.Mn-loaded apoferritin:a highly sensitive MRI imaging probe for the detection and characterization of hepatocarcinoma lesions in a transgenic mouse model.Contrast Media Mol Imaging, 2012, 7(3): 281-288.

[23]Winter MB, Klemm PJ, Phillips-Piro CM, et al.Porphyrin-substituted H-NOX proteins as high-relaxivity MRI contrast agents.Inorg Chem,2013, 52(5): 2277-2279.

[24]Unger E, Fritz T, Kang S, et al.Manganese-based liposomes comparative approaches.Radiology, 1993, 28(10): 933-938.

[25]Pan D, Caruthers SD, Hu G, et al.Ligand-directed nanobialys as theranostic agent for drug delivery and manganese-based magnetic resonance imaging of vascular targets.J Am Chem Soc, 2008, 130(29):9186-9187.

[26]Tan M, Wu X, Jeong EK, et al.An effective targeted nanoglobular manganese (II) chelate conjugate for magnetic resonance molecular imaging of tumor extracellular matrix.Mol Pharm, 2010, 7(4):936-943.

[27]Tan M, Ye Z, Jeong EK, et al.Synthesis and evaluation of nanoglobular macrocyclic Mn (Ⅱ) chelate conjugates as non-gadolinium (Ⅲ) MRI contrast agents.Bioconjugate Chem, 2011, 22(5): 931-937.

[28]Na HB, Lee JH, An K, et al.Development of a T1 contrast agent for magnetic resonance imaging using MnO nanoparticles.Angew Chem,2007, 119(28): 5397-5401.

[29]Kim T, Momin E, Choi J, et al.Mesoporous silica-coated hollow manganese oxide nanoparticles as positive T1 contrast agents for labeling and MRI tracking of adipose derived mesenchymal stem cells.J Am Chem Soc, 2011, 133(9): 2955-2961.

[30]Xiao J, Tian XM, Yang C, et al.Ultrahigh relaxivity and safe probes of manganese oxide nanoparticles for in vivo imaging.Sci Rep, 2013, 3:3424.