王亞輝+李洪澤+韓風雨

【摘要】目的：建立補腎益腦片含量測定方法。方法：用HPLC法以Dikma C18（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（45∶55）；檢測波長：245nm；柱溫：室溫；流速：1.0ml/min測定補腎益腦片中補腎脂數(shù)和異補腎脂數(shù)的含量。結果：補骨脂素的含量在0.0744～0.4644μg范圍內線性關系良好（r=0.9997），異補骨脂素的含量在0.075～0.450μg范圍內線性關系良好（r=0.9999）。補骨脂素平均回收率為99.668%，RSD%=0.94%；異補骨脂素平均回收率為99.5%，RSD%=1.85%。結論：該含量測定方法簡便、準確。

【關鍵詞】補腎益腦片；高效液相色譜法；補骨脂素、異補骨脂素；含量測定

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）17-0019-02

Abstract：

Keywords：

補腎益腦片方由鹿茸（去毛）、紅參、補骨脂（鹽制）等十六味藥組成。其功能主治為補腎益氣，養(yǎng)血生精。用于氣血兩虛，腎虛精虧，心悸氣短，失眠健忘，遺精盜汗，腰腿酸軟，耳鳴耳聾。依據《中國藥典》（2010版）中補腎益腦片標準[1]，經多次試驗，確立了本品中補骨脂有效成分補骨脂素、異補骨脂素的含量測定方法，陰性無干擾，經方法學考察，方法的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、精密度、回收率試驗均符合有關規(guī)定。

1儀器與試藥

1.1儀器Lab Alliance高效液相色譜儀，Model 500檢測器，Series III泵，ANASTAR色譜工作站，Dikma C18柱（4.6×250mm，5μm）；AB135-S電子分析天平；Model C3860A 超聲波儀（上海超聲儀器廠）。

1.2試藥補骨脂素對照品（批號：110739-201115，中國食品藥品檢定研究院）；異補骨脂素（批號：110738-201012，中國食品藥品檢定研究院）；補腎益腦片（自制，批號20130217、20131007、20131008、20131009）。甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水，其試劑均為分析純。

2方法和結果

2.1波長選擇稱取補骨脂素、異補骨脂素對照品適量，加甲醇溶液配成每1ml含0.06mg的溶液，在200～500nm的波長范圍內掃描，在245nm處有最大吸收。

2.2色譜條件色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（45∶55）；檢測波長：245nm；柱溫：室溫；流速：1.0ml/min。在此條件下，補骨脂素、異補骨脂素與其他組分均達到基線分離，理論板數(shù)按補骨脂素計算大于3000。

2.3溶液的制備

2.3.1對照品溶液的制備分別取補骨脂素異補骨脂素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含25μg的混合溶液，即得。

2.3.2供試品溶液的制備取本品適量，研細，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率280W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.3.3陰性溶液的制備取除補骨脂外其它藥材按供試品制備方法制成陰性樣品溶液。

2.4陰性干擾試驗精密吸取上述三種溶液各10μl，注入液相色譜儀中，繪制液相色譜圖，在對照品色譜相應的位置，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性液在此峰位無吸收，表明該方法專屬性良好。

2.5線性范圍考察分別精密吸取補骨脂素對照品溶液7.74、15.48、23.22、30.96、38.7、46.44μg/ml；異補骨脂素對照品溶液7.5、15、22.5、30.0、37.5、45.0μg/ml，按擬定的色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標，補骨脂素、異補骨脂素進樣量（μg）坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程。補骨脂素為：Y=5020682X-387.807（r=0.99974）；異補骨脂素為Y=5079826X-18635.9（r=0.9999）。補骨脂素、異補骨脂素分別在0.0744-0.4644μg和0.075-0.450μg范圍內與峰面積程良好的線性關系。

2.6穩(wěn)定性性試驗取樣品（批號20130217），研細，取粉末3.0g，精密稱定，按正文“2.3”制備供試液，精密吸取同一供試液，分別于0、2、4、6、8、10h進樣分析，測定色譜峰面積，RSD%為0.97%，故供試液10h內具有良好的穩(wěn)定性。

2.7精密度試驗精密吸取同一濃度供品溶液10μl，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，補骨脂素與異補骨脂素RSD%分別為1.43%和1.34%。

2.8重復性試驗取本品（批號20130217），研細，分別取五份，精密稱定，分別按正文“2.3”方法操作，測定，補骨脂素含量為4.9999、0.5042、0.5038、0.5005、0.4882 mg/g，異補骨脂素含量為0.4526、0.4729、0.4620、0.4584、0.4558 mg/g，總含量RSD%為1.31%，表明本試驗重復性良好。

2.9回收率考察精密稱取本品（批號20130217，補骨脂素含量0.4993mg/g和異補骨脂素含量0.4603mg/g）五份，每份分別加補骨脂素對照品（0.1162mg/ml）5ml和異補骨脂素（0.1072mg/ml）5ml，按正文“2.3”制備供試品溶液，按上述色譜條件依法測定，結果如下：

3討論

參考文獻[2]，對索氏提取和超聲提取，且對超聲提取時間進行考察。結果表明超聲提取在30min提取已完全且與索氏提取含量相當，由于超聲提取方便，故選擇超聲提取30min。

測定結果表明，選用補骨脂素和異補骨脂素作為定量檢測指標以及建立的HPLC色譜條件，方法靈敏度高，專屬性強，重現(xiàn)性好并通過對三批樣品含量及藥材含量進行考察，可作為補腎益腦片質量控制指標之一。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]張衛(wèi)紅，鄭玉光，李曉松，等.HPLC法測不同產地補骨脂中補骨脂素和異補骨脂素的含量[J].河北中醫(yī)藥學報，2008，23（1）：43.

（收稿日期：2014.07.09）endprint

【摘要】目的：建立補腎益腦片含量測定方法。方法：用HPLC法以Dikma C18（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（45∶55）；檢測波長：245nm；柱溫：室溫；流速：1.0ml/min測定補腎益腦片中補腎脂數(shù)和異補腎脂數(shù)的含量。結果：補骨脂素的含量在0.0744～0.4644μg范圍內線性關系良好（r=0.9997），異補骨脂素的含量在0.075～0.450μg范圍內線性關系良好（r=0.9999）。補骨脂素平均回收率為99.668%，RSD%=0.94%；異補骨脂素平均回收率為99.5%，RSD%=1.85%。結論：該含量測定方法簡便、準確。

【關鍵詞】補腎益腦片；高效液相色譜法；補骨脂素、異補骨脂素；含量測定

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）17-0019-02

Abstract：

Keywords：

補腎益腦片方由鹿茸（去毛）、紅參、補骨脂（鹽制）等十六味藥組成。其功能主治為補腎益氣，養(yǎng)血生精。用于氣血兩虛，腎虛精虧，心悸氣短，失眠健忘，遺精盜汗，腰腿酸軟，耳鳴耳聾。依據《中國藥典》（2010版）中補腎益腦片標準[1]，經多次試驗，確立了本品中補骨脂有效成分補骨脂素、異補骨脂素的含量測定方法，陰性無干擾，經方法學考察，方法的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、精密度、回收率試驗均符合有關規(guī)定。

1儀器與試藥

1.1儀器Lab Alliance高效液相色譜儀，Model 500檢測器，Series III泵，ANASTAR色譜工作站，Dikma C18柱（4.6×250mm，5μm）；AB135-S電子分析天平；Model C3860A 超聲波儀（上海超聲儀器廠）。

1.2試藥補骨脂素對照品（批號：110739-201115，中國食品藥品檢定研究院）；異補骨脂素（批號：110738-201012，中國食品藥品檢定研究院）；補腎益腦片（自制，批號20130217、20131007、20131008、20131009）。甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水，其試劑均為分析純。

2方法和結果

2.1波長選擇稱取補骨脂素、異補骨脂素對照品適量，加甲醇溶液配成每1ml含0.06mg的溶液，在200～500nm的波長范圍內掃描，在245nm處有最大吸收。

2.2色譜條件色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（45∶55）；檢測波長：245nm；柱溫：室溫；流速：1.0ml/min。在此條件下，補骨脂素、異補骨脂素與其他組分均達到基線分離，理論板數(shù)按補骨脂素計算大于3000。

2.3溶液的制備

2.3.1對照品溶液的制備分別取補骨脂素異補骨脂素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含25μg的混合溶液，即得。

2.3.2供試品溶液的制備取本品適量，研細，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率280W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.3.3陰性溶液的制備取除補骨脂外其它藥材按供試品制備方法制成陰性樣品溶液。

2.4陰性干擾試驗精密吸取上述三種溶液各10μl，注入液相色譜儀中，繪制液相色譜圖，在對照品色譜相應的位置，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性液在此峰位無吸收，表明該方法專屬性良好。

2.5線性范圍考察分別精密吸取補骨脂素對照品溶液7.74、15.48、23.22、30.96、38.7、46.44μg/ml；異補骨脂素對照品溶液7.5、15、22.5、30.0、37.5、45.0μg/ml，按擬定的色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標，補骨脂素、異補骨脂素進樣量（μg）坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程。補骨脂素為：Y=5020682X-387.807（r=0.99974）；異補骨脂素為Y=5079826X-18635.9（r=0.9999）。補骨脂素、異補骨脂素分別在0.0744-0.4644μg和0.075-0.450μg范圍內與峰面積程良好的線性關系。

2.6穩(wěn)定性性試驗取樣品（批號20130217），研細，取粉末3.0g，精密稱定，按正文“2.3”制備供試液，精密吸取同一供試液，分別于0、2、4、6、8、10h進樣分析，測定色譜峰面積，RSD%為0.97%，故供試液10h內具有良好的穩(wěn)定性。

2.7精密度試驗精密吸取同一濃度供品溶液10μl，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，補骨脂素與異補骨脂素RSD%分別為1.43%和1.34%。

2.8重復性試驗取本品（批號20130217），研細，分別取五份，精密稱定，分別按正文“2.3”方法操作，測定，補骨脂素含量為4.9999、0.5042、0.5038、0.5005、0.4882 mg/g，異補骨脂素含量為0.4526、0.4729、0.4620、0.4584、0.4558 mg/g，總含量RSD%為1.31%，表明本試驗重復性良好。

2.9回收率考察精密稱取本品（批號20130217，補骨脂素含量0.4993mg/g和異補骨脂素含量0.4603mg/g）五份，每份分別加補骨脂素對照品（0.1162mg/ml）5ml和異補骨脂素（0.1072mg/ml）5ml，按正文“2.3”制備供試品溶液，按上述色譜條件依法測定，結果如下：

3討論

參考文獻[2]，對索氏提取和超聲提取，且對超聲提取時間進行考察。結果表明超聲提取在30min提取已完全且與索氏提取含量相當，由于超聲提取方便，故選擇超聲提取30min。

測定結果表明，選用補骨脂素和異補骨脂素作為定量檢測指標以及建立的HPLC色譜條件，方法靈敏度高，專屬性強，重現(xiàn)性好并通過對三批樣品含量及藥材含量進行考察，可作為補腎益腦片質量控制指標之一。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]張衛(wèi)紅，鄭玉光，李曉松，等.HPLC法測不同產地補骨脂中補骨脂素和異補骨脂素的含量[J].河北中醫(yī)藥學報，2008，23（1）：43.

（收稿日期：2014.07.09）endprint

【摘要】目的：建立補腎益腦片含量測定方法。方法：用HPLC法以Dikma C18（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（45∶55）；檢測波長：245nm；柱溫：室溫；流速：1.0ml/min測定補腎益腦片中補腎脂數(shù)和異補腎脂數(shù)的含量。結果：補骨脂素的含量在0.0744～0.4644μg范圍內線性關系良好（r=0.9997），異補骨脂素的含量在0.075～0.450μg范圍內線性關系良好（r=0.9999）。補骨脂素平均回收率為99.668%，RSD%=0.94%；異補骨脂素平均回收率為99.5%，RSD%=1.85%。結論：該含量測定方法簡便、準確。

【關鍵詞】補腎益腦片；高效液相色譜法；補骨脂素、異補骨脂素；含量測定

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）17-0019-02

Abstract：

Keywords：

補腎益腦片方由鹿茸（去毛）、紅參、補骨脂（鹽制）等十六味藥組成。其功能主治為補腎益氣，養(yǎng)血生精。用于氣血兩虛，腎虛精虧，心悸氣短，失眠健忘，遺精盜汗，腰腿酸軟，耳鳴耳聾。依據《中國藥典》（2010版）中補腎益腦片標準[1]，經多次試驗，確立了本品中補骨脂有效成分補骨脂素、異補骨脂素的含量測定方法，陰性無干擾，經方法學考察，方法的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、精密度、回收率試驗均符合有關規(guī)定。

1儀器與試藥

1.1儀器Lab Alliance高效液相色譜儀，Model 500檢測器，Series III泵，ANASTAR色譜工作站，Dikma C18柱（4.6×250mm，5μm）；AB135-S電子分析天平；Model C3860A 超聲波儀（上海超聲儀器廠）。

1.2試藥補骨脂素對照品（批號：110739-201115，中國食品藥品檢定研究院）；異補骨脂素（批號：110738-201012，中國食品藥品檢定研究院）；補腎益腦片（自制，批號20130217、20131007、20131008、20131009）。甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水，其試劑均為分析純。

2方法和結果

2.1波長選擇稱取補骨脂素、異補骨脂素對照品適量，加甲醇溶液配成每1ml含0.06mg的溶液，在200～500nm的波長范圍內掃描，在245nm處有最大吸收。

2.2色譜條件色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（45∶55）；檢測波長：245nm；柱溫：室溫；流速：1.0ml/min。在此條件下，補骨脂素、異補骨脂素與其他組分均達到基線分離，理論板數(shù)按補骨脂素計算大于3000。

2.3溶液的制備

2.3.1對照品溶液的制備分別取補骨脂素異補骨脂素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含25μg的混合溶液，即得。

2.3.2供試品溶液的制備取本品適量，研細，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率280W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.3.3陰性溶液的制備取除補骨脂外其它藥材按供試品制備方法制成陰性樣品溶液。

2.4陰性干擾試驗精密吸取上述三種溶液各10μl，注入液相色譜儀中，繪制液相色譜圖，在對照品色譜相應的位置，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性液在此峰位無吸收，表明該方法專屬性良好。

2.5線性范圍考察分別精密吸取補骨脂素對照品溶液7.74、15.48、23.22、30.96、38.7、46.44μg/ml；異補骨脂素對照品溶液7.5、15、22.5、30.0、37.5、45.0μg/ml，按擬定的色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標，補骨脂素、異補骨脂素進樣量（μg）坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程。補骨脂素為：Y=5020682X-387.807（r=0.99974）；異補骨脂素為Y=5079826X-18635.9（r=0.9999）。補骨脂素、異補骨脂素分別在0.0744-0.4644μg和0.075-0.450μg范圍內與峰面積程良好的線性關系。

2.6穩(wěn)定性性試驗取樣品（批號20130217），研細，取粉末3.0g，精密稱定，按正文“2.3”制備供試液，精密吸取同一供試液，分別于0、2、4、6、8、10h進樣分析，測定色譜峰面積，RSD%為0.97%，故供試液10h內具有良好的穩(wěn)定性。

2.7精密度試驗精密吸取同一濃度供品溶液10μl，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，補骨脂素與異補骨脂素RSD%分別為1.43%和1.34%。

2.8重復性試驗取本品（批號20130217），研細，分別取五份，精密稱定，分別按正文“2.3”方法操作，測定，補骨脂素含量為4.9999、0.5042、0.5038、0.5005、0.4882 mg/g，異補骨脂素含量為0.4526、0.4729、0.4620、0.4584、0.4558 mg/g，總含量RSD%為1.31%，表明本試驗重復性良好。

2.9回收率考察精密稱取本品（批號20130217，補骨脂素含量0.4993mg/g和異補骨脂素含量0.4603mg/g）五份，每份分別加補骨脂素對照品（0.1162mg/ml）5ml和異補骨脂素（0.1072mg/ml）5ml，按正文“2.3”制備供試品溶液，按上述色譜條件依法測定，結果如下：

3討論

參考文獻[2]，對索氏提取和超聲提取，且對超聲提取時間進行考察。結果表明超聲提取在30min提取已完全且與索氏提取含量相當，由于超聲提取方便，故選擇超聲提取30min。

測定結果表明，選用補骨脂素和異補骨脂素作為定量檢測指標以及建立的HPLC色譜條件，方法靈敏度高，專屬性強，重現(xiàn)性好并通過對三批樣品含量及藥材含量進行考察，可作為補腎益腦片質量控制指標之一。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]張衛(wèi)紅，鄭玉光，李曉松，等.HPLC法測不同產地補骨脂中補骨脂素和異補骨脂素的含量[J].河北中醫(yī)藥學報，2008，23（1）：43.

（收稿日期：2014.07.09）endprint