李 楊，明海霞

(甘肅中醫(yī)學院，甘肅 蘭州 730000)

單葉細辛對寒飲射肺證模型大鼠TGF-β1、PC-III影響的實驗研究*

李 楊，明海霞

(甘肅中醫(yī)學院，甘肅 蘭州 730000)

目的：觀察單葉細辛對寒飲射肺證模型大鼠轉化生長因子-β1(TGF-β1)、III型前膠原(PC-III)含量的影響。方法：將40只SPF級Wistar大鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、遼細辛組、單葉細辛組。后3組用中醫(yī)理論復制寒飲射肺動物模型；造模后第2天，正常對照組、模型對照組分別給予生理鹽水(1μL/g)灌胃，兩細辛治療組灌胃中藥水提取液(1 μL/g)，1 d 1次，連續(xù)28 d。檢測肺泡灌洗液、血清中TGF-β1、PC-III含量。結果：與正常對照組對比，模型對照組TGF-β1、PC-III含量升高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明造模成功；與模型對照組對比，給藥組TGF-β1、PC-III含量均明顯降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；兩細辛給藥組的TGF-β1、PC-III對比，差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論：單葉細辛可調節(jié)TGF-β1、PC-III的表達，減輕肺部炎癥，對寒飲射肺模型大鼠肺組織具有保護作用。

細辛/藥效學；寒飲射肺證/藥物作用；TGF-β1；PC-III；動物；大鼠

寒飲射肺證為臨床常見慢性呼吸系統(tǒng)病證，多由宿罹痰飲、復感寒邪、寒邪引動痰飲而出現咳嗽、哮喘、水腫等病癥，病情呈進行性、緩慢進展，常并發(fā)慢性支氣管炎、肺動脈高壓，嚴重者常發(fā)生肺源性心臟病等[1]。已有文獻[2]報道，單葉細辛對寒飲射肺證模型大鼠血栓素-B2、內皮素、磷脂等有顯著的療效，但對TGF-β1、PC-III的研究未見相關報道。本實驗根據中醫(yī)理論復制寒飲射肺證動物模型，就單葉細辛對寒飲射肺證動物模型TGF-β1、PC-III含量的表達進行了研究。

1 材料與方法

1.1 動 物

SPF級7～8周齡Wistar 大鼠40只，體質量(200±20)g，雌雄兼用，購自甘肅中醫(yī)學院SPF級科研實驗動物中心，實驗動物質量合格證號：SCXK(甘) 2013-0004。

1.2 藥品、試劑與儀器

遼細辛、單葉細辛由甘肅中醫(yī)學院附屬醫(yī)院中草藥房提供，經甘肅中醫(yī)學院中藥教研室黃世佐教授鑒定，甘肅中醫(yī)學院中藥化學教研室用水提法模擬臨床用藥劑型，制備成質量分數1 g/mL的溶液備用。血PC-III放免試劑盒(批號131502)、TGF-β1酶聯(lián)免疫試劑盒(批號131015)、肺泡灌洗液PC-III放免試劑盒(批號131505)、TGF-β1酶聯(lián)免疫試劑盒(批號131106)，均由北京福瑞生物工程公司提供；質量分數250 g/L的烏拉坦，為中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司產品，批號 C20130305。BioLap420E生物信號監(jiān)測系統(tǒng)，成都泰盟生物科技公司產品；放射免疫γ自動記數器，南京桑力電子設備廠產品；JA1003型電子天平 ，上海天美儀器廠產品；超速離心機，金壇市恒豐儀器廠產品；Bio-RAD680 酶標儀電腦分析系統(tǒng)，產地美國。

1.3 動物分組、給藥與模型的建立

大鼠在 SPF 條件下自由飲水，普通飼料喂養(yǎng)1周后，被隨機分為正常對照組、模型對照組、遼細辛組、單葉細辛組，每組10只。除正常對照組外，其余各組造模：以質量分數250 g/L烏拉坦(4 μL/g)腹腔注射麻醉，常規(guī)消毒，仰臥位固定；頸部正中切開皮膚，鈍性分離暴露正中氣管、左側頸總動脈、氣管；于環(huán)狀軟骨下方0.5cm處橫向切開氣管前壁，再向頭端作縱向切口，使切口呈倒“⊥”字形，插“Y”型氣管插管，固定后，吸凈血液；右側管經張力換能器與BioLap420E生物信號監(jiān)測系統(tǒng)相連；分離左側頸總動脈備用，用20號套管針穿刺置管并結扎固定，以備采血檢測；待呼吸平穩(wěn)后，左側管插入軟塑料內套管，固定后按 2.5 μL/g 灌注7 ℃冷生理鹽水入肺內，保留30 s 后抽出，5 min 后重復灌洗1次，連續(xù)5次。按上述方法，寒飲射肺動物模型復制成功[2]。

自造模成功后第2天，正常對照組、模型對照組灌胃9 g/L NaCl溶液1 μL/g，兩細辛給藥組分別灌胃相應的中藥水提取液1 μL/g，1 d 1次，連續(xù)28 d。

1.4 檢測指標

經氣管插管向支氣管內注入9 g/L氯化鈉注射液行支氣管肺泡灌洗，每次灌入2 mL，保留30 s，反復抽洗3次，至肺泡灌洗液總量達4 mL左右，總灌注量6 mL/只，留取肺泡灌洗液，離心取上清，待測。左側頸總動脈取動脈血8 mL待測。血清、肺泡灌洗液PC-III檢測采用放免分析法、TGF-β1采用酶聯(lián)免疫法，操作方法嚴格按說明書進行。

1.5 統(tǒng)計學方法

2 結 果

2.1 大鼠一般情況對比

正常對照組大鼠毛發(fā)光澤，呼吸平穩(wěn)，體質量漸增，活潑好動。模型對照組大鼠毛稀疏，氣促，口、爪趾黏膜紫紺，體質量減輕，活動能力下降。兩中藥組癥狀有所好轉，皮毛順滑，咳嗽、氣促減輕，飲食增多，體質量有所上升，活動能力增強。

2.2 各組大鼠肺泡灌洗液、血清TGF-β1、PC-III含量對比

與正常對照組對比，模型對照組大鼠肺泡灌洗液、血清TGF-β1、PC-III含量均升高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明造模成功。與模型對照組對比，兩細辛給藥組肺泡灌洗液、血清TGF-β1、PC-III含量均下降，說明藥物治療有效。兩細辛給藥組TGF-β1、PC-III對比，差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

組 別動物數TGF-β1肺泡灌洗液/(ng·L-1)血清/(ng·L-1)PC-Ⅲ肺泡灌洗液/(ng·L-1)血清/(ng·L-1)正常對照組1011.154±1.59911.554±1.32920.847±1.31475.228±2.465模型對照組1036.845±2.059**42.765±0.735**34.255±1.308**133.945±1.871**遼細辛組1020.165±0.761##25.965±0.899##23.636±0.435##106.382±1.417##單葉細辛組1021.236±0.878##△27.036±0.642##△24.034±0.415##△110.762±4.982##△

注：與正常對照組對比，**P<0.05；與模型對照組對比，##P<0.05；與遼細辛組對比，△P>0.05。

3 討 論

單葉細辛是細辛屬草本植物，味辛，性溫，歸心、肺、腎經，主要分布于甘肅、寧夏、陜西等地。全草具有祛風散寒、通竅止痛、溫肺化飲的作用，民間藥用歷史悠久?！渡褶r本草經》記載“ 細辛主咳逆，溫肺化飲止咳”，《本草綱目》記載“辛能泄肺，故風寒咳嗽上氣者宜用”[3-4]。

在眾多細胞因子中，TGF-β1可調控細胞的分化、黏附、運動、凋亡以及細胞外基質的分泌，由巨噬細胞、成纖維細胞、中性粒細胞等合成與分泌，可以促進透明質酸和Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原的合成與分泌，最終導致細胞外基質在肺內積聚，肺泡壁增厚，引起肺纖維化、呼吸功能障礙。TGF-β1還可上調膠原和纖維粘連蛋白的mRNA表達水平，使損傷區(qū)域成纖維細胞大量增殖，影響其他纖維化細胞因子，促進炎癥的發(fā)展[5]。慢性肺疾病主要是由于肺泡上皮細胞、炎性細胞、血管內皮細胞等細胞膜受到脂質過氧化損傷，肺基質中膠原沉積過多。PC-III主要分布于呼吸系統(tǒng)的肺間質，是細胞外基質的主要成分之一，是細胞外基質合成和降解的重要調節(jié)因子，而細胞外基質降解和沉積失衡是慢性肺疾病主要原因，PC-III其表達的高低可代表肺纖維化的嚴重程度[6-7]。

本實驗結果顯示，單葉細辛可以通過下調TGF-β1、PC-III的表達抑制肺部炎癥反應的發(fā)生和發(fā)展，減輕肺組織病理改變而起到治療作用，單葉細辛藥物療效與遼細辛相近。

[1]李楊，黃世佐，明海霞，等.單葉細辛對“寒飲射肺”證模型大鼠呼吸和血氣指標的影響[J].甘肅中醫(yī)學院學報， 2010，27(1)： 17-19.

[2]明海霞，黃世佐，李楊，等.單葉細辛對寒飲射肺證模型大鼠肺通氣功能相關指標的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志， 2009,16(5)：23-25.

[3]劉效栓，宋平順，丁永輝.甘肅細辛的植物資源調查兼論細辛的產地變遷[J].中草藥，2002， 33(1): 78-79.

[4]周禎祥.細辛本草研究[J].中醫(yī)藥信息，2007，24(1)：35-37.

[5]肖清萍,孫堅.肺間質纖維化的發(fā)病機制研究進展[J].江西醫(yī)藥，2007，42(6):569.

[6]李愛敏，袁雅冬.特發(fā)性肺纖維化患者血清MDA水平與PCⅢ和LN的相關性[J].軍醫(yī)進修學院學報，2011，32(3)：261.

[7]李江，武芳，黃茂，等.川芎嗪對肺纖維化大鼠Ⅲ型膠原及層黏連蛋白的干預作用[J].實用兒科臨床雜志，2007，22(4)：290-291.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)10-0063-02 ·實驗研究·

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.10.30

明海霞，副教授，在讀博士， 18909429885@163.com

甘肅省教育廳基金資助項目(02B4-04)

2014-12-03；

2015-03-02