針刺對(duì)抑郁癥睡眠障礙大鼠海馬組織及血清中SOD·MDA的影響

俞裕天1,袁青2,陳津巖3,謝津津1,郎建英4,麥嘉玲1,曾曉林1，汪滿霞1，薛爾平1

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510405；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)針灸康復(fù)臨床醫(yī)學(xué)院，廣州 510405；

3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)核醫(yī)學(xué)教研室，廣州 510405；4.廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣州 510405)

摘要：目的觀察針刺對(duì)抑郁癥睡眠障礙(SDD)大鼠海馬組織及血清中SOD活性和MDA含量的影響。方法正常組8只SD大鼠常規(guī)合籠飼養(yǎng)。32只SD大鼠接受為期21 d的孤養(yǎng)+CUMS法+REM睡眠剝奪法造模，其中28只完成造模,二次分組為模型組、針刺組、藥物組、針?biāo)幗M,每組各7只。模型組僅造模不干預(yù);針刺組取印堂、神庭、太沖(雙)進(jìn)行針刺;藥物組給予舍曲林和阿普唑侖水溶液灌胃；針?biāo)幗M同時(shí)結(jié)合針刺組與藥物組的兩種干預(yù)方式;3組均連續(xù)干預(yù)7 d。結(jié)果SDD造模致大鼠海馬組織〔(41.19±5.59)u/mL〕和血清〔(34.57±5.53)u/mL〕的SOD活性較正常組〔(60.19±8.85)、(56.20±13.68)u/mL〕明顯下調(diào)(P<0.05),且致海馬組織〔(5.12±1.22)nmol/mg〕和血清〔(6.22±0.96)nmol/mg〕的MDA含量較正常組〔(3.49±1.02)、(4.35±1.55)nmol/mg〕明顯上調(diào)(P<0.05);針刺組海馬組織〔(52.29±11.37)u/mL〕和血清〔(54.32±6.95)u/mL〕SOD活性均較模型組有明顯的上調(diào)(P<0.05)，且僅針刺組的海馬組織〔(3.86±0.80)nmol/mg〕MDA含量較模型組得到了明顯的下調(diào)(P<0.05)；藥物組僅上調(diào)了血清SOD活性〔(44.70±5.31)u/mL，P<0.05)〕；針?biāo)幗M上調(diào)了海馬組織〔(51.95±7.58)u/mL〕和血清〔(48.23±6.70)u/mL〕的SOD活性(P<0.05)。結(jié)論SDD造模能明顯加速衰老；3種干預(yù)手段均有一定的抗衰老作用，其中針刺組最優(yōu)，針?biāo)幗M次之。

關(guān)鍵詞：抑郁癥;睡眠障礙；衰老；針刺；靳三針;大鼠

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.027

中圖分類號(hào)：R246文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)10-1060-04

基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金經(jīng)費(fèi)資助(81072878、81303041)。

作者簡(jiǎn)介:俞裕天(1987-)，男,博士，在站博士后，主要從事中醫(yī)藥及針灸防治腦病、神志病的臨床與實(shí)驗(yàn)研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：趙玉芝2014-12-03)

*通信作者:袁青，電話-13902211008，電子信箱-yuanqing1005@126.com

Acupuncture on hippocampus and serum SOD activity and MDA content of SDD rats

YU Yutian1,YUAN Qing2,CHEN Jinyan3,XIE Jinjin1,LANG Jianying4,MAI Jialing1,ZENG Xiaolin1,WANG Manxia1,XUE Erping1

(1.Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China;

2.Clinical Medical College of Acupuncture,Moxibustion and Rehabilitation,Guangzhou University of Chinese Medicine,

Guangzhou 510405,China;

3.Dept.of Nuclear Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China;

4.College of Basic Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China)

Abstract:ObjectiveObservation on acupuncture on hippocampus and serum SOD Activity and MDA content of SDD Rats.MethodsThe 8 normal Sprague Dawley rats were caged together normally.The 32 Sprague Dawley rats were underwent a 21 d solitary raised+CUMS+REM sleep deprivation method modeling.The 28 rats successfully completed the modeling,and divided into model group,acupuncture group,medicine group,acupuncture with medicine group,each group with 7 rats.Model group rats,only modeling without intervention.Acupuncture group rats were acupuncture on acupoint Yintang,Shenting and Taichong (both) each day for 20 min with a 15 s stimulation every 10 min.Medicine group rats were gavaged administration with Zoloft and Alprazolam solution.Acupuncture with medicine group combined acupuncture and medicine intervention.Three intervention groups were given intervention for 7 days.ResultsSOD activity of hippocampal tissue (41.19±5.59) u/mL and serum (34.57±5.53) /mL of DD rats was significantly lower than the normal rats (P<0.05),and hippocampus tissue and serum MDA content significantly increased than the normal (60.19±8.85,56.20±13.68) u/mL rats (P<0.05);Acupuncture group’s SOD activity of hippocampal tissue (5.12±1.22) nmol/mg and serum (6.22±0.96) nmol/mg were up regulated than the model group (3.49±1.02),(4.35±1.55) nmol/mg (P<0.05),and only acupuncture group’s MDA content in hippocampus has been significantly down regulated (P<0.05);Medicine group’s SOD (52.29±11.37) u/ml activity of serum (54.32±6.95) u/ml were down regulated (P<0.05);Acupuncture combined with medicine group’s SOD activity (44.70±5.31)u/mL,P<0.05, of hippocampal tissue (51.95±7.58) u/ml and serum (48.23±6.70) u/ml were up regulated (P<0.05).ConclusionSleep deprivation depression modeling can significantly accelerate aging;3 ways of interventions on SDD rats have some anti-aging effects.And acupuncture group has the best effect with acupuncture combined with medicine group followed.

Keywords:depression;sleep deprivation;aging;acupuncture;Jin’s three technique;rat

抑郁障礙(Major Depressive Disorder,MDD)影響著全世界約16%的人口[1]。睡眠障礙是抑郁癥狀群的重要組成部分，是抑郁癥最常見的癥狀之一，以入睡困難、睡眠不深及早醒為特征。睡眠障礙可加重抑郁癥的病情，延緩抑郁癥的康復(fù)進(jìn)程。抑郁癥睡眠障礙(sleep deprivation depression,SDD)的研究已成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)[2]，對(duì)SDD的動(dòng)物模型[2-3]也在逐漸增多。眾所周知，失眠容易引起各種疾病，加速衰老[4]，然而對(duì)于該問(wèn)題的實(shí)驗(yàn)室研究文獻(xiàn)仍較少見。本研究復(fù)制SDD大鼠模型并探討針刺、藥物、針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)其大腦海馬組織及血清SOD活性和MDA的影響，報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1動(dòng)物與分組SPF級(jí)SD大鼠40只，體質(zhì)量220～250 g，雄性(廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(粵)2013-0034)。實(shí)驗(yàn)于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。先用Open-Field法[5]及蔗糖偏好實(shí)驗(yàn)[6]進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，選得分相近的40只大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，隨機(jī)分成正常組8只、造模組32只。

1.2抑郁癥睡眠障礙(SDD)造模正常組8只常規(guī)合籠飼養(yǎng)，不接受任何刺激。造模組32只大鼠接受不可預(yù)見中等應(yīng)激(CUMS)，結(jié)合孤養(yǎng)18 d，再用小平臺(tái)睡眠剝奪技術(shù)[7]行快速動(dòng)眼相(REM)睡眠剝奪72 h。

1.2.1孤養(yǎng)造模組32只均單獨(dú)分籠飼養(yǎng)。

1.2.2CUMS法由Willner P[6]和Katz[8]方法改進(jìn)而來(lái)：1)禁水17 h；2)禁食、禁水20 h；3)持續(xù)光照17 h；4)傾斜鼠籠(45°)17 h；5)4 ℃冰水游泳5 min;6)潮濕墊料21 h；7)搖晃(1次/s，15 min)；8)夾尾1 min；9)行為限制2 h；共9種刺激，每天隨機(jī)采取1種，共安排18 d。

1.2.3小平臺(tái)睡眠剝奪技術(shù)(platform technique)[7]于造模的第19 d開始，連續(xù)72 h快速動(dòng)眼相睡眠(REM)剝奪：剝奪箱為30×30×36 cm的玻璃水箱，正中立一個(gè)直徑6 cm圓形平臺(tái)(高18 cm)，箱中注水，水面距平臺(tái)面約1 cm。大鼠在平臺(tái)上可抬頭自由進(jìn)食進(jìn)水;如果大鼠進(jìn)入REM睡眠期，大鼠會(huì)因?yàn)榧埩λ沙诙淙胨谢蚬?jié)律性低頭、觸水，以此來(lái)達(dá)到剝奪快速動(dòng)眼相(REM)睡眠的目的。造模期間持續(xù)高光通量LED燈光照射，室內(nèi)溫度控制在18.0～22.0 ℃，水溫保持在20.0 ℃左右。

1.3二次分組與干預(yù)正常組不造模不干預(yù)。造模組再次隨機(jī)分成模型組、針刺組、藥物組、針?biāo)幗M,預(yù)計(jì)每組8只。模型組僅造模不干預(yù)(第21天后繼續(xù)行CUMS法)。針刺組造模后進(jìn)行針刺干預(yù)：用佳健牌針灸針(規(guī)格：0.25 mm×13 mm)針刺，根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[9]大鼠穴位定位方法取:1)印堂穴，2)神庭穴，3)配太沖穴(雙)，各穴均行導(dǎo)氣通經(jīng)的手法15 s，隔10 min運(yùn)針1次，每次留針20 min。 藥物組給予兩種藥物的水溶液灌胃：按成人劑量折算出大鼠給藥劑量舍曲林0.83 mg/(kg·d)+阿普唑侖0.067 mg/(kg·d)。針?biāo)幗M同時(shí)結(jié)合針刺組與藥物組的兩種干預(yù)方式。針刺組、藥物組、針?biāo)幗M均連續(xù)干預(yù)7 d。

1.4樣本處理與指標(biāo)檢測(cè)于28 d進(jìn)行完其他測(cè)試后，對(duì)各組大鼠取樣：1)血樣：大鼠眼眶取血，12 000 g，離心5 min，取上清液待測(cè)；2)海馬組織:取100 mg海馬組織，加1 mL預(yù)冷的生理鹽水研磨勻漿，成10%的勻漿液，1 2000 g，離心5 min，取上清液待測(cè)；選用凱基微量丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒與凱基微量丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑盒所附方法步驟進(jìn)行。

2結(jié)果

2.1SDD造模致死CUMS法造模期間，4只造模大鼠出現(xiàn)較重的抑郁癥狀，分別于CUMS法造模的第15天和第17天死亡。完成21 d孤養(yǎng)+CUMS+REM睡眠剝奪造模的大鼠共28只,分為模型組、針刺組、藥物組、針?biāo)幗M，每組各7只。

2.2各組大鼠大腦海馬組織SOD活性和MDA含量如表1所示：模型組大鼠海馬組織SOD活性較正常組顯著下調(diào)(P<0.05)，提示SDD造模能顯著降低海馬組織SOD活性;針刺組和針?biāo)幗M海馬組織SOD活性則較模型組顯著上調(diào)(P<0.05)。如表1所示：模型組大鼠海馬組織MDA含量較正常組明顯上調(diào)(P<0.05)，提示SDD造模能顯著增加海馬組織MDA含量;僅針刺組大鼠MDA含量較模型組得到了明顯下調(diào)(P<0.05)。

表1　海馬組織SOD活性和MDA含量

注:模型組與正常組比較,#P<0.05;干預(yù)組與模型組比較,△P<0.05

2.3各組大鼠大腦血清SOD活性和MDA含量如表2所示：模型組大鼠血清SOD活性較正常組顯著下調(diào)(P<0.05)，提示SDD造模能顯著降低血清SOD活性；3個(gè)干預(yù)組血清SOD活性則較模型組顯著上調(diào)(P<0.05)。如表2所示:模型組大鼠血清MDA含量較正常組明顯上調(diào)(P<0.05)，提示SDD造模能顯著增加血清MDA含量；3個(gè)干預(yù)組都未能顯著下調(diào)血清MDA含量(P<0.05)。

表2　血清SOD活性和MDA含量

注：模型組與正常組比較,#P<0.05；干預(yù)組與模型組比較,△P<0.05

3討論

3.1SDD造模加速衰老長(zhǎng)期以來(lái)，人們都認(rèn)為失眠會(huì)加速衰老,然而這方面的實(shí)驗(yàn)室研究仍較少見于報(bào)道。通過(guò)本次研究，我們發(fā)現(xiàn)，SDD造模會(huì)致大鼠海馬組織和血清的SOD活性顯著降低(P<0.05)，并且導(dǎo)致海馬組織和血清的MDA含量顯著上調(diào)(P<0.05);這個(gè)結(jié)果提示：抑郁癥睡眠障礙降低了機(jī)體清除自由基的能力，加重了機(jī)體受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。因此，我們可以認(rèn)為抑郁癥睡眠障礙造模加速了大鼠衰老。

3.2藥物治療SDD目前臨床上30%～40%的抑郁癥睡眠障礙患者聯(lián)合使用選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)+苯二氮卓類(BDZ)藥物。選擇性5-羥色胺再吸收抑制劑(SSRIs)的基本藥理是通過(guò)抑制神經(jīng)突觸細(xì)胞對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)血清素的再吸收，以增加細(xì)胞外可以和突觸后受體結(jié)合的血清素濃度。作為目前抗抑郁的一線用藥,SSRIs被廣泛用于臨床治療抑郁癥、焦慮癥、強(qiáng)迫癥等。傳統(tǒng)的鎮(zhèn)靜催眠藥苯二氮卓類(BDZ)可以治療抑郁相關(guān)性失眠[10],此類藥物可縮短入睡時(shí)間、減少覺(jué)醒時(shí)間和次數(shù)、增加總睡眠時(shí)間，具有安全、起效快、耐受性良好等特點(diǎn)[11]。聯(lián)用BDZ，主要在于加強(qiáng)SSRIs對(duì)中樞神經(jīng)的作用，以盡快改善睡眠以及全身癥狀，穩(wěn)定患者的情緒，特別是對(duì)抑郁癥狀和睡眠障礙改善尤為明顯。本研究藥物組和針?biāo)幗M聯(lián)合使用舍曲林(Sertraline)和阿普唑侖(Alprazolam)是SSRIs+BDZ治療抑郁癥睡眠障礙的典型代表。

3.3靳三針調(diào)神針?lè)ǘ嗄暌詠?lái)，靳三針療法在治療腦病、神志病方面取得了巨大的成就。神志病，多源于大腦功能與結(jié)構(gòu)的異常。我們的前期研究證實(shí)：靳三針能有效緩解HIBD大鼠的神經(jīng)細(xì)胞凋亡，起到了保護(hù)大腦的作用[12]。對(duì)于抑郁癥睡眠障礙治療，靳三針療法有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[13-14]。中醫(yī)自古對(duì)“不寐”就有因氣郁而營(yíng)衛(wèi)失調(diào)的論述[15],臨床80%以上的失眠與焦慮、抑郁等心理因素相關(guān)。抑郁癥睡眠障礙則屬于神志病中“失神”的范疇，因此臨床治療中調(diào)神的作用極為重要[16]。本研究針刺組和針?biāo)幗M所選用的靳三針刺神穴組，由靳三針中的智三針與定神針精煉而來(lái)[17]。印堂穴是定神針的要穴，在兩眉之間、鼻根部，雖說(shuō)是經(jīng)外奇穴，但處于督脈之上，可振奮陽(yáng)氣；神庭穴是智三針的要穴，是頭部?jī)H有的以“神”命名的兩個(gè)穴位之一，專用于調(diào)神的要穴；配穴方面，太沖穴是足厥陰肝經(jīng)的輸穴和原穴，位于足背第一、二跖骨之間，能鎮(zhèn)肝熄風(fēng)、醒腦開竅、鎮(zhèn)心安神、解郁止痛、治療失眠、調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)等，是臨床運(yùn)用具有高效、精簡(jiǎn)、安全的典范對(duì)穴。

3.4針?biāo)幗Y(jié)合的加速起效和增效作用我們的同期研究結(jié)果表明:1)為期7 d的針?biāo)幗Y(jié)合干預(yù)對(duì)抑郁癥睡眠障礙大鼠起效較快，能明顯改善抗抑郁藥物起效慢的問(wèn)題(中縫背核5-羥色胺受體mRNA表達(dá))[18]；2)為期7 d的針刺干預(yù)對(duì)抑郁癥睡眠障礙大鼠有效,且與藥物干預(yù)效果相當(dāng)，為期7 d的針?biāo)幗Y(jié)合干預(yù)則有明顯的增效作用(外側(cè)韁核βCaMKⅡ蛋白表達(dá))[19]。

3.5單純針刺較針?biāo)幗Y(jié)合、藥物的抗衰老效果更優(yōu)從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出：針刺組的海馬組織和血清SOD活性均較模型組有顯著的提升(P<0.05),且僅針刺組的海馬組織MDA含量得到了明顯的下調(diào)(P<0.05);藥物組僅上調(diào)了血清SOD活性(P<0.05)，海馬組織SOD活性、血清與海馬組織MDA含量均未得到顯著的調(diào)整(P<0.05);針?biāo)幗M上調(diào)了海馬組織和血清的SOD活性(P<0.05)，海馬組織和血清的MDA含量也均未被顯著下調(diào)(P<0.05)。因此，從3個(gè)干預(yù)組的抗衰老效果來(lái)看，針刺組最優(yōu)，針?biāo)幗M次之。

4結(jié)論

抑郁癥睡眠障礙(SDD)造模能顯著加速大鼠衰老；為期7 d對(duì)SDD大鼠的3種干預(yù)手段，均有一定的抗衰老作用，其中針刺組最優(yōu)，針?biāo)幗M次之。

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