陳世偉，李衛(wèi)青，李巨奇，王建國*（1.深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院，廣東深圳518001；2.深圳市第五人民醫(yī)院，廣東深圳518001；.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點實驗室，湖南長沙410007）

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加味參附姜苓湯對圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘患者血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達的影響

陳世偉1,2，李衛(wèi)青1,2，李巨奇1,2，王建國3*
（1.深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院，廣東深圳518001；2.深圳市第五人民醫(yī)院，廣東深圳518001；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點實驗室，湖南長沙410007）

〔摘要〕目的研究加味參附姜苓湯對圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘患者血清金屬基質(zhì)蛋白酶-2（MMP-2）、金屬基質(zhì)蛋白酶-9 （MMP-9）及金屬基質(zhì)蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）表達的影響，探討其治療圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘的作用機制。方法將圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘患者80例，隨機分為治療組和對照組各40例。治療組服用加味參附姜苓湯治療，對照組口服氨茶堿緩釋片聯(lián)合酮體芬片治療，療程3個月。觀察兩組療效及治療前后血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達變化。結(jié)果治療組總有效率為90.0%，對照組為72.5%，治療組療效優(yōu)于對照組（P＜0.05）。治療后兩組血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達水平顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），且治療組降低較對照組顯著（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論加味參附姜苓湯對圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘具有較好的療效，其可能通過下調(diào)患者血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達而發(fā)揮治療作用。

〔關(guān)鍵詞〕咳嗽變異性哮喘；圍月經(jīng)期；加味參附姜苓湯；金屬基質(zhì)蛋白酶-2；金屬基質(zhì)蛋白酶-9；金屬基質(zhì)蛋白酶抑制劑-1

Effect of Modified Shenfu Jiangling Decoction on the Expression of Serum MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 in Premenstrual and Menstrual Cycle Patients with Cough Variant Asthma

CHEN Shiwei1,2, LI Weiqing1,2, LI Juqi1,2, WANG Jianguo3*
（1.Shenzhen Luohu People's Hospital, Shenzhen, Guangdong 518001, China; 2.The Fifth People's Hospital of Shenzhen City, Shenzhen, Guangdong 518001, China; 3.Hunan Provincial Key Laboratory of Diagnostics in Chinese Medicine, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, Hunan 410007, China）

〔Abstract〕Objective To explore the influence of modified Shenfu Jiangling Decoction on serum MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 in premenstrual and menstrual cycle patients with cough variant asthma. Methods 80 patients with cough variant asthma in premenstrual and menstrual cycle were randomly divided into the treatment group（40 cases）and the control group （40 cases）. The treatment group was treated with modified Shenfu Jiangling Decoction, the control group was treated with aminophylline sustained-release tablets combined with finland ketone tablets, the course for 3 months. The serum MMP-2, MMP -9 and TIMP -1 expression levels by enzyme -linked immunosorbent assay. Results The total effective rate in the treatment group was 90%, the control group with 72.5%, the effect of treatment group was suprior to the control group（P＜0.05）. The level of MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 of the treatment group were significantly decreased（P＜0.05, P＜0.01）, and the decrease degree of treatment group was better than control group（P＜0.05,P＜0.01）. Conclusion The modified Shenfu Jiangling Decoction showed good curative effect on patients with cough variant asthma in premenstrual and menstrual cycle. Its machanism may be associated with down-regulation the expression levels of serum MMP-2, MMP-9 and TIMP-1.

〔Keywords〕cough variant asthma; premenstrual and menstrual cycle; Jiawei Shenfu Jiangling Decoction; MMP-2；MMP-9；TIMP-1

圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘是一種特殊的咳嗽變異性哮喘，多發(fā)于育齡期婦女，約占哮喘婦女的30%～40%[1-2]。圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘僅表現(xiàn)為慢性、反復(fù)發(fā)作性咳嗽，月經(jīng)前及月經(jīng)期加重，臨床體查、輔助檢查均無明顯肺部陽性及感染性指征[3-4]。當(dāng)前研究顯示，圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘病理生理表現(xiàn)為氣道慢性非特異性炎癥及氣道細胞外基質(zhì)降解與結(jié)構(gòu)重塑[3-4]；細胞外基質(zhì)合成與降解平衡失衡是引起圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘氣道炎癥與氣道重塑的重要因素[5-6]，而金屬基質(zhì)蛋白酶-2（MMP-2）、金屬基質(zhì)蛋白酶-9 （MMP-9）及其抑制劑-1（TIMP-1）是重要的細胞外基質(zhì)代謝限速酶，其中MMP-2、MMP-9具有促進基質(zhì)降解的作用，TIMP-1抑制MMP-2、MMP-9活性，使細胞外基質(zhì)降解減少，沉積增多，導(dǎo)致結(jié)構(gòu)重塑[7-8]。陳世偉教授認(rèn)為，圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘基本病機是熱入血室，肺腎陽虛，痰瘀內(nèi)結(jié)[9]，臨證每以加味參附姜苓湯治之，療效顯著。本研究擬探討加味參附姜苓湯對圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘患者血清MMP -2、MMP -9及TIMP-1的影響，以明確其作用機制，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2014年9月-2015年1月于深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院中醫(yī)科就診的圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘患者80例，隨機分為治療組和對照組各40例。治療組平均年齡（32.72±5.48）歲，平均病程（54.17± 24.99）月；對照組平均年齡（32.90±6.11）歲，平均病程（51.72±23.72）月。兩組患者年齡、病程差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會審查通過。

1.2病例選擇

1.2.1診斷標(biāo)準(zhǔn)符合咳嗽的診斷與治療指南（2009版）[10]中咳嗽變異性哮喘相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，并且符合月經(jīng)前期4 d、月經(jīng)期及月經(jīng)后3 d哮喘發(fā)作或者加重的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2納入標(biāo)準(zhǔn)（1）符合診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）年齡18～40歲；（3）自愿參加，簽署知情同意書。

1.2.3排除標(biāo)準(zhǔn)（1）肺結(jié)核、肺癌、哮喘；（2）嚴(yán)重肝、腎功能不全、心功能衰竭等心、肺、腎疾??；（3）精神意識障礙者；（4）入選本次研究前2周曾使用過糖皮質(zhì)激素者；（5）2周內(nèi)服用過白三烯受體調(diào)節(jié)劑者。

1.3治療方法

治療組服用加味參附姜苓湯，方藥組成：制附片10 g（先煎1 h），干姜15 g，紅參15 g（另燉，沖服），茯苓30 g，五味子15 g，細辛10 g，柴胡15 g，黃芩10 g，法半夏10 g，烏藥10 g（后下），雞血藤30 g，淫羊藿30 g，炙甘草15 g。所有中藥飲片均由深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院藥劑科統(tǒng)一購制及發(fā)藥。每日1劑，水煎，早晚2次分服。對照組予以口服氨茶堿緩釋片（修正藥業(yè)集團股份有限公司，0.1 g/片）0.1-0.2 g，3次/d；酮體芬片（海南制藥廠有限公司制藥一廠，1 mg/片）1 mg，1次/d。兩組連續(xù)治療3個月。

1.4血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達水平檢測

兩組患者均于治療前日清晨和治療結(jié)束后次日清晨，空腹采集外周靜脈血，3 000 r/min，離心10 min，取血清，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達水平。試劑盒由博士德生物工程有限公司提供。按試劑盒說明書進行檢測。

1.5療效評價標(biāo)準(zhǔn)[10]

顯效：治療期間和療程結(jié)束后，哮喘消失，隨訪3個月不復(fù)發(fā)；有效：治療期間和治療結(jié)束后，哮喘發(fā)作明顯減少、程度減輕；無效：治療前后，哮喘發(fā)作次數(shù)無明顯減少，程度也無明顯減輕。

1.6統(tǒng)計學(xué)分析

2　結(jié)果

2.1兩組療效比較

治療組的臨床療效優(yōu)于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

表1　兩組臨床療效比較　（例）

2.2兩組治療前后MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達水平比較

治療前兩組患者血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；治療后兩組各項指標(biāo)均明顯降低（P＜0.05，P＜0.01），且治療組降低更顯著（P＜0.05，P＜0.01）。提示加味參附姜苓湯可下調(diào)圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達。結(jié)果見表2。

表2　兩組血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達水平比較（±s）

表2　兩組血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達水平比較（±s）

注：與治療前比較＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與對照組治療后比較△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 　　MMP-2 （pg/L）MMP-9 （ng/L）TIMP-1 （ng/L）治療組（ ＝40） 　治療后 　1401.94±148.86 　250.25±26.34 　204.52±27.19治療前 　　2014.88±73.40 　367.20±14.72 　304.58±19.75治療前 　2017.07±73.81 　370.30±17.77 　292.16±21.35 n ＃?！鳌。＃！鳌。＃！鳌鲗φ战M（ ＝40） 　治療后 　　1516.81±140.96 　274.36±23.29 　234.38±37.37 n＃＃＃

3　討論

作為咳嗽變異性哮喘的一種特殊的亞型，圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘臨床癥狀較單純的月經(jīng)性哮喘更為隱匿。李衛(wèi)青、陳世偉教授認(rèn)為，女性生理特點表現(xiàn)為：月經(jīng)前期陽盛陰消，陰充陽盛腎陽由盛趨衰；月經(jīng)期激素水平降低，陽氣至重，重陽轉(zhuǎn)陰；月經(jīng)后期，血海空虛，腎陰不充；月經(jīng)間期重陰轉(zhuǎn)陽，陰陽轉(zhuǎn)化。當(dāng)上述周期循行失常時，病情日久，反復(fù)發(fā)作，腎精虛耗，累及肺中陽氣，水津輸布失職，聚液生痰，久病成瘀，痰瘀互結(jié)，則形成圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘“肺腎陽虛，痰瘀內(nèi)結(jié)”的基本病機[5]，臨床多采用加味參附姜苓湯治療，取得滿意療效。加味參附姜苓湯以苓甘五味姜辛湯溫補肺陽，四逆湯溫固腎陽，小柴胡湯調(diào)暢樞機，解血室之邪，三方合一，三陰同治；并納入烏藥溫腎納氣，法夏降氣化痰，雞血藤補血調(diào)經(jīng)、活血通絡(luò)，淫羊藿溫腎助陽，固元陽之根本。諸藥合用，共奏溫補肺腎、化痰祛瘀調(diào)暢樞機之功。然其確切的作用機制尚不明確，科學(xué)的實證依據(jù)缺失，極大影響了該方藥的臨床推廣應(yīng)用。

有研究認(rèn)為，圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘的主要病機是氣道慢性非特異性炎癥及氣道細胞外基質(zhì)降解與結(jié)構(gòu)重塑[3-4,11]。新近研究表明，細胞外基質(zhì)代謝限速酶MMP-2、MMP-9及其抑制劑TIMP-1系統(tǒng)失衡是引起炎癥及氣道細胞外基質(zhì)降解與結(jié)構(gòu)重塑的關(guān)鍵因素[6-7]。MMP-2、MMP-9是降解IV型膠原的主要蛋白酶，通過激活基質(zhì)TGF-β1等釋放及誘導(dǎo)細胞增殖、分化參與氣道重塑，并通過降解血管及上皮下膠原成分促進新的血管及上皮形成而導(dǎo)致氣道纖維化[8-9,12-13]。TIMP-1是MMPs活性主要抑制劑之一，通過與MMP-2、MMP-9的催化位點結(jié)合或與酶原的某些位點結(jié)合而抑制MMP-2、MMP-9活性，使細胞外基質(zhì)降解減少，并使其降解產(chǎn)物在黏膜下層聚集，引起氣道壁增厚，促使氣道重塑的發(fā)生及進展[8-9，14]，被認(rèn)為是氣道重塑的標(biāo)志。因此，調(diào)節(jié)MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達水平，抑制氣道慢性非特異性炎癥及氣道重塑是治療圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘的新的重要策略和藥物靶點。

本研究結(jié)果顯示，治療前兩組患者MMP-2、MMP-9水平均較高，提示MMP-2、MMP-9通過激活基質(zhì)TGF-β1等釋放及誘導(dǎo)細胞增殖、分化，降解血管及上皮下膠原成分促進新的血管及上皮形成而參與圍月經(jīng)期咳嗽變異性哮喘的慢性非特異性炎癥及氣道重塑。在MMP-2、MMP-9高表達的同時，TIMP-1亦隨之升高，提示炎癥反應(yīng)過程中MMP-2、MMP-9的增高刺激TIMP-1反應(yīng)性增高，促進膠原纖維的異常增生及過度沉積，促使氣道重塑的發(fā)生及進展。經(jīng)加味參附姜苓湯治療后，實驗組患者MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達均下降，且顯著優(yōu)于對照組，提示加味參附姜苓湯可能通過調(diào)節(jié)MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表達而發(fā)揮其治療作用。

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（本文編輯馬薇）

·文獻綜述·

〔通訊作者〕*王建國，男，副主任醫(yī)師，E-Mail：707973244@qq.com。

〔作者簡介〕陳世偉，男，副主任中醫(yī)師，研究方向：肺系疾病中醫(yī)證治規(guī)律的臨床研究。

〔基金項目〕廣東省中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)計劃項目（20142133）

〔收稿日期〕2015-08-01

〔中圖分類號〕R256.12

〔文獻標(biāo)識碼〕B

〔文章編號〕

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2016.02.018