任正宇　王小青　李晶#（燕京理工學(xué)院0級化工與制藥　河北三河0650；江西省中醫(yī)藥研究院　南昌330046）

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贛產(chǎn)南丹參藥材含量測定研究*

任正宇1王小青2李晶2#
（1燕京理工學(xué)院2012級化工與制藥河北三河065201；2江西省中醫(yī)藥研究院南昌330046）

摘要：目的：建立南丹參藥材的含量測定方法。方法：色譜條件：色譜柱：Dikma Diamonsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸（18∶82）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：225 nm；柱溫：30℃。結(jié)果：丹參素鈉在6.2～775 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；加樣回收率為101.82%；RSD分別為1.97%。結(jié)論：高效液相色譜法（HPLC）操作簡單，重現(xiàn)性好，可用于南丹參藥材的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：南丹參；丹參素鈉；丹酚酸B；高效液相色譜法

南丹參為唇形科植物南丹參Salvia bowleyana Dunn.的干燥根及根莖，收載于江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)1996年版和2014年版，歷代本草中少見記載，本品為地方性習(xí)慣用藥；南丹參廣泛分布于江西、福建、浙江、湖南等省，均為野生品種，江西為主要分布產(chǎn)區(qū)之一[1]。南丹參主要含有總丹參酮、丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、咖啡酸等化學(xué)成分[2～5]。其主要水溶性成分丹參素具有多種藥理作用，包括抗炎、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)、心肌保護(hù)、提高免疫力等[6～7]。前期我院僅對該植物中所含丹酚酸B進(jìn)行了報道[8]，本實驗對其所含丹參素進(jìn)行含量測定研究，并同時進(jìn)行了丹酚酸B的測定。現(xiàn)報道如下：

1　儀器與試藥

Waters-1525高效液相色譜儀（美國Waters公司），SimplicityTM個人型超純水系統(tǒng)（Millipore公司），CQ-250超聲波清洗儀（上海船舶電子設(shè)備研究所），AG-135電子天平（梅特勒-托利多），AL-204電子天平（梅特勒-托利多）。南丹參藥材：分別來源于江西南昌（2013051301、2013051302、2013061401、2013061402、2013081501）；江西德安（2013051303、2013052201）；江西婺源（2013051401、2013051402）；江西于都（2013060201）。丹參素鈉對照品（含量測定用，批號：110855-200405，中國藥品生物制品檢定所），丹酚酸B對照品（批號：110562-200807，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），其它試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1丹參素鈉的含量測定

2.1.1色譜條件及專屬性的選擇色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：甲醇-0.1%磷酸（18∶82），流速：1 ml/min；經(jīng)光譜測定，丹參素鈉在225 nm處有最大吸收峰，故測定波長設(shè)為225 nm，柱溫：30℃。在此條件下，對照品、供試品在約7min的相同時間有一色譜峰。見圖1。

圖1　丹參素鈉測定光譜圖及色譜圖

2.1.2線性關(guān)系的考察精密稱取丹參素鈉對照品7.75 mg，置10 ml容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻（每1 ml含丹參素鈉775 mg）。分別稀釋成以下濃度：775、387.5、155、77.5、46.5、31、12.4、6.2 mg/ml按上述色譜條件測定，將峰面積對濃度進(jìn)行回歸處理，得回歸方程為：Y=8 173 609X+54 568.5，r=0.999 8（n=6），丹參素鈉對照品在6.2～775 mg/ml范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.1.3精密度試驗精密吸取丹參素鈉對照品溶液10 μl，按照精密度試驗要求，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定丹參素鈉峰面積值，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，RSD為1.13%。

2.1.4穩(wěn)定性試驗按照上述測定條件，分別在0、1、2、5、8、12 h，精密吸取南丹參供試品溶液10 μl，注入高效液相色譜儀測定每次進(jìn)樣的與丹參素鈉相同保留時間的色譜峰峰面積值，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，RSD 為1.61%，結(jié)果表明：在12 h內(nèi)供試品溶液中與丹參素鈉相同保留時間的色譜峰峰面積值基本保持不變。

2.1.5重現(xiàn)性試驗取6份南丹參藥材粗粉約2.0 g，精密稱定，分別置具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，稱重，加熱回流1 h，取出，放冷，再次稱重，以50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，混勻，濾過，取續(xù)濾液過微孔濾膜（0.45 μm），即得供試品溶液。經(jīng)測定、計算和統(tǒng)計學(xué)處理，6份從樣品的RSD為0.73%，符合重現(xiàn)性試驗要求。

2.1.6加樣回收率試驗取6份已知含量的南丹參藥材粗粉約1.0 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入含丹參素鈉對照品溶液（0.020 318 4 mg/ml）50 ml，稱重，加熱回流1 h，余后同重現(xiàn)性操作，制備各供試品溶液。同法測定并計算回收率，結(jié)果見表1，6份回收率測定數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，平均回收率101.82%，RSD=1.97%。

表1　回收率測定結(jié)果

2.1.7樣品測定取不同產(chǎn)地的南丹參藥材粗粉約2.0 g，精密稱定，按上述供試品溶液制備方法操作，分別制備各供試品溶液；同上法測定、計算，結(jié)果見表2。

表2　不同產(chǎn)地藥材中丹參素鈉的測定結(jié)果（n=2）

2.2丹酚酸B的含量測定[8]

2.2.1色譜條件色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相∶甲醇∶乙腈∶1.5%甲酸（17∶15∶68），流速：1 ml/min，檢測波長286 nm，柱溫：30℃。在此條件下，對照品、供試品在約14 min的相同時間有一色譜峰。

2.2.2對照品溶液制備取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 ml含0.14 mg的溶液，即得。

2.2.3樣品測定取不同產(chǎn)地的南丹參藥材粗粉，稱取約0.2 g，精密稱定，分別置50 ml量瓶中，加入50%甲醇至近刻度，超聲提取30 min，取出，放冷，以50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，混勻，濾過，取續(xù)濾液過微孔濾膜（0.45 μm），即得供試品溶液。同上法測定、計算，結(jié)果見表3。

表3　不同產(chǎn)地藥材中丹酚酸B的測定結(jié)果（n=2）

3　討論

在丹參素的測定研究中，分別比較了超聲與回流，50%乙醇、乙醇、50%甲醇和甲醇為溶劑，25、50、75 ml不同溶劑用量以及提取1、2、3 h，結(jié)果表明，南丹參中丹參素的提取以50%甲醇50 ml回流提取1 h效果最佳。

根據(jù)不同產(chǎn)地南丹參藥材中丹參素鈉和丹酚酸B的含量測定結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，該二種成分均以南昌產(chǎn)地為最高，婺源產(chǎn)地次之，于都產(chǎn)地最低。此外，我們分別比較了同一產(chǎn)地不同采收季節(jié)南丹參中兩成分的含量，結(jié)果顯示6月采集樣本該兩種成分含量明顯高于5、8月采集樣本的含量，并且5、8月樣本含量無顯著差異，分析可能由于4～5月南丹參處于花期，植株營養(yǎng)趨于地上部分，6～7月其地上部分開始進(jìn)入枯萎期，此時相應(yīng)的營養(yǎng)進(jìn)入地下根部，因而成分集中且較高，而到8月份地上又開始萌發(fā)新芽，地下根部的養(yǎng)分再次轉(zhuǎn)移到地上，從而使相應(yīng)成分的含量有所下降；這個結(jié)論與根莖類藥材采收期“多為秋季采挖”（地上部分枯萎前）相符。但是，由于采樣的局限性，此兩種含量與采收季節(jié)相關(guān)性還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

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[3]國家中醫(yī)藥管理局.中華本草(上冊)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1999.1652

[4]李靜,黎蓮娘,宋萬志.南丹參化學(xué)成分研究[J].中草藥,1994,25(7): 347-349

[5]沈建芳,王強(qiáng),汪紅.南丹參化學(xué)成分研究[J].中國野生植物資源, 2006,25(2):55-58

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[7]袁恒杰.丹參素藥理作用研究新進(jìn)展[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2006,26 (5):604-606

[8]劉丹,余良忠,文萍.HPLC法測定南丹參中丹酚酸B的含量[J].遼寧中醫(yī)雜志,2011,38(9):1872-1873

●綜述與進(jìn)展●

中圖分類號：R284

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

doi:10.13638/j.issn.1671-4040.2016.02.045

*基金項目：江西省青年基金資助項目（編號：20142BAB215065）

#通訊作者：李晶，E-mail：savon@sina.com

收稿日期：（2016-01-09）