顧 炎， 薛 健*， 金紅宇， 馬雙成（.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所，北京0093；.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京00050）

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GC-ECD法分析金銀花中有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留狀況

顧 炎1， 薛 健1*， 金紅宇2， 馬雙成2
（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所，北京100193；2.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京100050）

目的 建立氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器（GC-ECD）法分析金銀花Lonicera japonica Flos中有機(jī)氯及擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留狀況。方法 GC-ECD法同時(shí)測(cè)定42批樣品中29種有機(jī)氯和8種擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥，并進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。結(jié)果 所有樣品均檢出農(nóng)藥殘留，共有16種。其中，有機(jī)氯類(lèi)10種，擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)6種，前者整體檢出率低于后者，%ADI為0.001%～0.555%。結(jié)論 金銀花中農(nóng)藥的檢出率較高，但均在可接受范圍內(nèi)，需盡快建立金銀花中農(nóng)藥的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)以及安全使用規(guī)則。

金銀花；農(nóng)藥；有機(jī)氯；擬除蟲(chóng)菊酯；殘留狀況；風(fēng)險(xiǎn)分析；%ADI；GC-ECD

近年來(lái)，中藥材農(nóng)藥殘留問(wèn)題備受重視，而金銀花作為常用的大宗藥材，毫無(wú)疑問(wèn)成為被關(guān)注的種類(lèi)之一。

有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥曾被世界各國(guó)廣泛使用，雖然大部分品種已經(jīng)被全面禁止生產(chǎn)和使用，但是由于其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、難于分解，至今土壤［1-2］、水體［3］、中藥材［4-5］中仍有檢出，近年來(lái)也有金銀花中檢出該物質(zhì)的報(bào)道［6］。擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥是廣譜性殺蟲(chóng)劑，因其高效、低毒等特點(diǎn)，在金銀花上的應(yīng)用十分普遍。 《中國(guó)藥典》2015版收錄了22種有機(jī)氯類(lèi)以及3種擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的測(cè)定方法［7］，而實(shí)際上，還有其他一些品種 （氯氟氰菊酯等）也有檢出［8］。

為了解金銀花中有機(jī)氯及擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留狀況，本實(shí)驗(yàn)以 《中國(guó)藥典》2015版為基礎(chǔ)，結(jié)合常用及報(bào)道已檢出的種類(lèi)，建立氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器（GC-ECD）法同時(shí)測(cè)定該植物中29種有機(jī)氯和8種擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥。并從藥材市場(chǎng)、公司等渠道采集42批樣品，對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定和暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以期對(duì)相關(guān)監(jiān)管提出合理建議。

1　儀器與實(shí)驗(yàn)材料

1.1儀器設(shè)備 Agi1ent 7890型氣相色譜分析儀（配備電子捕獲檢測(cè)器）、HP-5型色譜柱 （30 m× 0.32 mm×0.25μm，包括G4513A自動(dòng)進(jìn)樣器）（美國(guó)Agi1ent公司）；PL203/01型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；WH-1型渦旋混合儀 （上海滬西分析儀器廠）；LABOROTA4000/4型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 （德國(guó)海道夫公司）；Feb-80型離心沉淀器 （金壇市醫(yī)療儀器廠）；SGK-5LB型低噪音空氣泵 （北京東方精華苑科技有限公司）。

1.2試劑 乙腈、甲苯為分析純 （北京化工廠）；丙酮為色譜純（美國(guó)Fisher Scientific公司）。五氯苯、α-六六六、六氯苯、β-六六六、γ-六六六、五氯硝基苯、δ-六六六、七氯、艾試劑、異丙甲草胺、三氯殺螨醇、環(huán)氧七氯、反式氯丹、A-硫丹、順式氯丹、己唑醇、狄氏劑、pp-DDE、異狄氏劑、B-硫丹、pp-DDD、op-DDT、硫丹硫酸鹽、pp-DDT、異狄氏劑酮、啶蟲(chóng)脒、甲氧ddt、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、滅蟻靈、氯氟氰菊酯、噠螨靈、氯菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯1、氰戊菊酯2、溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品 （100μg/m L，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）；石墨化碳/氨基固相萃取柱 （500 mg/6 mL，美國(guó)Supe1co公司）。

1.3金銀花樣品 42批樣品的信息見(jiàn)表1。

表1　樣品信息Tab.1 Information of sam p les

2　方法與結(jié)果

2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 取標(biāo)準(zhǔn)品各0.5 mL，置于50 mL量瓶中，丙酮定容至刻度，搖勻，即得1.0μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液。精密量取適量，丙酮稀釋至所需質(zhì)量濃度，搖勻，即得。

2.2樣品制備 樣品粉碎，過(guò)藥典3號(hào)篩，精密稱(chēng)取樣品1.0 g，置于10 mL具塞試管中，加入乙腈5 m L，渦旋提取5 min，3 500 r/min離心15 min，取上清液，置于梨形瓶中，5 mL乙腈提取一次，合并提取液，減壓濃縮至1 m L左右。

固定石墨化碳/氨基固相萃取柱，5 mL乙腈∶甲苯 （3∶1）溶液預(yù)淋洗，當(dāng)液面到達(dá)柱面頂部時(shí)，將上述濃縮液加入柱中，1 mL左右乙腈洗滌梨形瓶3次，洗滌液加入固相萃取柱。20mL乙腈∶甲苯 （3∶1）溶液洗脫，梨形瓶收集淋洗液，減壓濃縮至近干，取出，置于刻度試管中，加丙酮定容至1 m L，進(jìn)入GC-ECD分析。

2.3儀器條件 HP-5色譜柱（30 m×0.32 mm× 0.25μm）；進(jìn)樣口溫度250℃，不分流進(jìn)樣；檢測(cè)器溫度300℃；載氣氮?dú)?，體積流量1 mL/min；進(jìn)樣量1μL；升溫程序?yàn)槌跏?00℃，以10℃/min速率升到180℃，保持1 min，以3℃/min速率升到220℃，保持2 min，以8℃/min速率升到270℃，保持5 min。該條件下分離效果良好，標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見(jiàn)圖1（編號(hào)1～37分別為五氯苯、α-六六六、六氯苯、β-六六六、γ-六六六、五氯硝基苯、δ-六六六、七氯、艾試劑、異丙甲草胺、三氯殺螨醇、環(huán)氧七氯、反式氯丹、A-硫丹、順式氯丹、己唑醇、狄氏劑、pp-DDE、異狄氏劑、B-硫丹、pp-DDD、op-DDT、硫丹硫酸鹽、pp-DDT、異狄氏劑酮、啶蟲(chóng)脒、甲氧ddt、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、滅蟻靈、氯氟氰菊酯、噠螨靈、氯菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯1、氰戊菊酯2、溴氰菊酯）。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1線(xiàn)性關(guān)系 根據(jù)37種農(nóng)藥的最低定量限，設(shè)定線(xiàn)性最低點(diǎn)為10 ng/m L；綜合考慮農(nóng)藥的最大殘留限量，設(shè)定線(xiàn)性最高點(diǎn)為500 ng/mL。取“2.1”項(xiàng)下混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，配成10、20、50、100、200、500 ng/mL溶液。以峰面積為縱坐標(biāo)（y），樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)行回歸計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2，在10～500 ng/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.4.2精密度和檢出限 取200 ng/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣6次，測(cè)定各農(nóng)藥RSD值。以信噪比（S/N）為3測(cè)定檢出限 （LOD），信噪比 （S/N）為10測(cè)定定量限。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.3加樣回收率 精密稱(chēng)取樣品1.0 g，加入適量標(biāo)準(zhǔn)品制成20、50、200 ng/g樣品，平行3次，按 “2.2”、 “2.3”項(xiàng)下條件和方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2，均符合農(nóng)藥殘留測(cè)定的要求［9］。

2.5農(nóng)藥殘留量測(cè)定 按 “2.2”、“2.3”項(xiàng)下條件和方法，對(duì)42份樣品進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，所有樣品均檢出有農(nóng)藥殘留較高，但數(shù)量和含有量并不高，總體上和大多數(shù)農(nóng)作物相似。其中，檢出10種農(nóng)藥的有1個(gè)，5～9種的有24個(gè)，少于5種的有17個(gè)。

另外，37種農(nóng)藥中檢出16種，其中有機(jī)氯類(lèi)10種，擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)6種。前者總體檢出量比較低，滴滴涕和六六六極少，但啶蟲(chóng)脒較高，達(dá)61.9%，而且最大檢出量達(dá)到了0.491 mg/kg；后者氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氰戊菊酯檢出率較高，檢出量大多在0.05～0.5 mg/kg范圍內(nèi)，少數(shù)超過(guò)0.5 mg/kg。

2.6風(fēng)險(xiǎn)分析 由于攝入量差異，同一農(nóng)藥在不同食品上的暴露風(fēng)險(xiǎn)存在很大差異。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估最常用的指標(biāo)是慢性污染物膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 （%ADI）［10-12］。%ADI≤100%，說(shuō)明風(fēng)險(xiǎn)水平尚可接受；%ADI＞100%，說(shuō)明處于不安全狀態(tài)，需采取相應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)管理措施。

參考對(duì)應(yīng)的計(jì)算方法［13］，對(duì)金銀花中檢出的16種農(nóng)藥進(jìn)行ADI%計(jì)算。其中，ADI值按照GB 2763-2012［14］中的有關(guān)規(guī)定，STMR（規(guī)范試驗(yàn)殘留中值）取平均殘留值，居民日均金銀花消耗量參考 《中國(guó)藥典》2015版中推薦使用量［15］的最大值 （15 g），結(jié)果見(jiàn)表3。由表可知，16種農(nóng)藥的%ADI在0.001%～0.555%之間，均遠(yuǎn)小于100%，說(shuō)明其在金銀花中的暴露風(fēng)險(xiǎn)水平均在可接受范圍內(nèi)。

表3　風(fēng)險(xiǎn)分析結(jié)果 （%）Tab.3 Resu lts of risk analysis（%）

3　討論

3.1測(cè)定方法的選擇

在方法建立過(guò)程中，考慮到兩類(lèi)農(nóng)藥極性差距較大，故選擇對(duì)大部分農(nóng)藥具有良好提取效果的乙腈作為提取溶劑。為簡(jiǎn)化操作，縮短前處理時(shí)間，參考經(jīng)典QuEChERS方法［16］，選擇渦旋震蕩提取、離心分離的提取方式；樣品凈化采用操作簡(jiǎn)便、適用性廣的固相萃取法；考慮到金銀花色素以及有機(jī)酸含有量高的特點(diǎn)，選擇了對(duì)這些成分去除效果好的石墨化碳/氨基固相萃取柱；檢測(cè)方法選擇了具有專(zhuān)屬性響應(yīng)的GC-ECD，其對(duì)研究涉及的兩類(lèi)農(nóng)藥選擇性好，而且靈敏度高，可以滿(mǎn)足測(cè)定需要。

結(jié)果顯示，整個(gè)方法操作便捷，耗時(shí)較短，降低成本的同時(shí)，也提高了測(cè)定效率，適用于金銀花中有機(jī)氯類(lèi)及擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留測(cè)定。

3.2市售金銀花中農(nóng)藥殘留狀況 42批樣品來(lái)自藥材市場(chǎng)、公司、種植基地、藥店、醫(yī)院藥房、飲片廠6個(gè)渠道，以及遼寧、山東、四川、河南等13個(gè)省和直轄市，覆蓋面較廣，能基本代表金銀花的整體情況。

結(jié)果顯示，氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氰戊菊酯和啶蟲(chóng)脒檢出率較高。通過(guò)實(shí)地調(diào)研和查閱文獻(xiàn)［17-20］可知，各地金銀花種植過(guò)程中的蟲(chóng)害十分普遍，尤以蚜蟲(chóng)、尺蠖、天牛等更嚴(yán)重，因此常用殺蟲(chóng)劑的施用幾乎不可避免，導(dǎo)致了金銀花中這幾種常用殺蟲(chóng)劑被頻繁檢出。

3.3金銀花農(nóng)藥殘留監(jiān)管建議

3.3.1建立針對(duì)金銀花的農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)

最大殘留限量作為藥材質(zhì)量指標(biāo)之一，可以倒逼生產(chǎn)企業(yè)主動(dòng)采取措施控制農(nóng)藥使用，防止濫用，而且比較直觀，利于監(jiān)管。目前，國(guó)內(nèi)尚沒(méi)有針對(duì)金銀花的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，為了更好地對(duì)該植物中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行有效監(jiān)控和管理，尤其是氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、啶蟲(chóng)脒等檢出率及含有量較高的農(nóng)藥，應(yīng)盡快推進(jìn)限量標(biāo)準(zhǔn)的制定。

3.3.2建立針對(duì)金銀花的農(nóng)藥安全使用規(guī)范 金銀花蟲(chóng)害高發(fā)，為有效控制害情，保障其質(zhì)量和產(chǎn)量，當(dāng)前情況下高效低毒殺蟲(chóng)劑的使用依然是不可避免的。為保障農(nóng)藥安全使用，防止種植過(guò)程中農(nóng)藥的誤用濫用導(dǎo)致殘留污染狀況加劇，針對(duì)金銀花的農(nóng)藥安全使用規(guī)范也是勢(shì)在必行的。

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Analysis of residual dynam ics of organochlorine and pyrethroid pesticides in Lonicera japonica Flos by GC-ECD

GU Yan1， XUE Jian1*， JIN Hong-yu2， MA Shuang-cheng2

（1.Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College，Beijing 100193，China；2.National Institutes for Food and Drug Control，Beijing 100050，China）

AIM To estab1ish a gas chromatographywith e1ectron capture detection（GC-ECD）method for ana1yzing the residua1dynamics of organoch1orine and pyrethroid pesticides in Lonicera japonica Flos.METHODS GC-ECD was app1ied to simu1taneous1y determining twenty-nine organoch1orine and eight pyrethroid pesticides in forty-two batches of samp1es，then risk ana1ysis wasmade.RESULTS The residues of pesticides were detected in a11 the samp1es，tota11y containing sixteen kinds.Among them，ten of them were organoch1orine，and six of them were pyrethroid，the overa11detection rate of the former was 1ower than that of the 1atter.The a11owab1e dai1y intakes（%ADI）were 0.001%-0.555%.CONCLUSION The detection rates of pesticides are re1ative1y high in Lonicera japonica Flos，a11ofwhich arewithin acceptab1e ranges.Themaximum residue 1imit standards and safety app1ication regu1ations of pesticides in Lonicera japonica Flos shou1d be set as soon as possib1e.

Lonicera japonica Flos；pesticides；organoch1orine；pyrethroid；residua1dynamics；risk ana1ysis；%ADI；GC-ECD

R284.1

A

1001-1528（2016）06-1325-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2016.06.025

2016-02-01

“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專(zhuān)項(xiàng) （2014ZX09304307-002）

顧 炎（1991—），女，碩士生，從事中藥分析研究。Te1：（010）57833097，E-mai1：bpzxgy203@126.com

薛 健 （1964—），女，碩士，研究員，從事中藥有效成分分析及農(nóng)藥殘留重金屬研究。Te1：（010）57833097，E-mai1：xuejian200@sina.com