鄭躍，劉麗

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

膈下逐瘀顆粒對(duì)小鼠抗炎、鎮(zhèn)痛作用的研究

鄭躍1，劉麗2*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：考察膈下逐瘀顆粒對(duì)小鼠的抗炎、鎮(zhèn)痛作用的影響，為臨床應(yīng)用及藥物開(kāi)發(fā)提供參考依據(jù)。方法：用二甲苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)，計(jì)算腫脹度和腫脹抑制率。用瓊脂肉芽腫致小鼠炎癥實(shí)驗(yàn)，記錄肉芽腫的重量。用熱板法測(cè)定小鼠痛閾值并記錄、統(tǒng)計(jì)、分析。用醋酸扭體法觀察小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)的次數(shù)，并計(jì)算鎮(zhèn)痛抑制率。結(jié)果：膈下逐瘀顆粒各劑量組能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹作用，使瓊脂所致肉芽濕重減輕。膈下逐瘀顆粒各劑量組對(duì)醋酸致痛及熱板致痛均有一定的抑制作用。結(jié)論：膈下逐瘀顆粒具有明顯的鎮(zhèn)痛抗炎作用。

膈下逐瘀顆粒；抗炎鎮(zhèn)痛；耳廓腫脹;瓊脂肉芽腫；熱板致痛；醋酸致痛

膈下逐瘀顆粒由清代著名醫(yī)家王清任的膈下逐瘀湯加減化裁而成，劑型方面由湯劑改為顆粒劑。膈下逐瘀顆粒以活血化瘀、行氣止痛為治療原則，在治療慢性盆腔炎性疾病方面取得了顯著療效。本研究意在通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究探討膈下逐瘀顆粒的鎮(zhèn)痛、抗炎作用，為臨床應(yīng)用及新藥開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 材料和動(dòng)物

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種雌性小鼠,350只,體質(zhì)量范圍(22±2)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)：小鼠SCXK黑2013-004。

1.2 儀器

AL204電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)、恒溫水浴鍋。

1.3 藥品與試劑

膈下逐瘀湯化裁方(牡丹皮15 g，赤芍20 g，烏藥、川芎各15 g，香附20 g，枳殼15 g，元胡20 g，桃仁、鱉甲、地龍各15 g)；膈下逐瘀顆粒(由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院提供)；康婦炎膠囊(批號(hào)150530，山東步長(zhǎng)神州制藥有限公司，成分：蒲公英、敗醬草、赤芍、薏苡仁、蒼術(shù)、當(dāng)歸、川芎、香附、澤瀉、白花蛇舌草、延胡索)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組

實(shí)驗(yàn)設(shè)為膈下逐瘀顆粒高、中、低劑量組、膈下逐瘀湯化裁方湯劑組、康婦炎膠囊陽(yáng)性藥組和空白對(duì)照組。共計(jì)6組，每組10只小鼠。

2.2 供試品配制方法和給藥途徑方法

根據(jù)臨床用量，并參照人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體表面積折算系數(shù)，分別配制不同的濃度。給藥前1天配制,4℃冷藏保存,每天上午8點(diǎn)左右給藥1次,灌胃給予。給藥劑量：膈下逐瘀顆粒高劑量31.2 g/kg、膈下逐瘀顆粒中劑量15.6g/kg、膈下逐瘀顆粒低劑量7.8 g/kg、膈下逐瘀湯化裁方湯劑劑量21.5 g/kg、婦炎康膠囊陽(yáng)性量0.468 g/kg。

2.3 抗炎實(shí)驗(yàn)

2.3.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)

取6組小鼠(分組見(jiàn)動(dòng)物分組)，分別灌胃等容量生理鹽水及試藥，每日1次，連續(xù)3 d，于末次給藥后1 h，各組小鼠右耳廓兩面均勻涂抹二甲苯(40 ml/只)，以左耳作對(duì)照。1 h后脫頸椎處死小鼠，沿耳廓基線(xiàn)剪下兩耳，用9 mm打孔器分別在兩耳對(duì)稱(chēng)部位打下圓形耳片，電子分析天平稱(chēng)質(zhì)量，計(jì)算腫脹度(以每鼠左右耳片質(zhì)量之差平均值來(lái)表示)和腫脹抑制率。

腫脹抑制率(%)=(對(duì)照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對(duì)照組平均腫脹度×100%

2.3.2 瓊脂肉芽腫致小鼠炎癥實(shí)驗(yàn)

取6組小鼠(分組見(jiàn)動(dòng)物分組)，每只背部一次性皮下注射2%的瓊脂溶液0.1 mL/10 g后，分別灌胃等容量生理鹽水及試藥，每日1次，連續(xù)5 d，末次給藥1 h后，脫頸椎處死，剪開(kāi)其背部，自皮下將瓊脂連同周?chē)Y(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，用分析天平稱(chēng)重，并記錄肉芽腫的重量。

2.4 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

2.4.1 熱板法

當(dāng)水溫為(55±0.5)℃時(shí)，以小鼠第一次添后足的時(shí)間作為痛閾值，以此作為指標(biāo)挑選痛閾值在5～30 s內(nèi)的雌性昆明種小鼠60只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為6組，分別灌胃等容量生理鹽水及試藥，每日1次，連續(xù)3 d，于末次用藥1 h，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。給藥前，于熱板儀上重復(fù)測(cè)取兩次正常痛閾值作為該組給藥前痛閾值。給藥后1 h用溫水擦拭干凈，開(kāi)始測(cè)小鼠痛閾值，之后每隔半個(gè)小時(shí)測(cè)定各小鼠痛閾值。記下小鼠給藥前后痛閾值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.4.2 醋酸扭體法

取6組小鼠(分組見(jiàn)動(dòng)物分組)，分別灌胃等容量生理鹽水及試藥，每日1次，連續(xù)3 d，于末次給藥后0.5 h，給小鼠腹腔注射0.2 mL 2%冰醋酸，觀察15 min內(nèi)每只小鼠發(fā)生扭體反應(yīng)的次數(shù)，并計(jì)算鎮(zhèn)痛抑制率。

扭體抑制率(%)=(對(duì)照組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù))/對(duì)照組平均扭體次數(shù)×100%

2.5 統(tǒng)計(jì)方法

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 膈下逐瘀顆粒對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹的影響

膈下逐瘀顆粒各劑量組均能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹作用，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 膈下逐瘀顆粒對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹的影響

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01

3.1.2 膈下逐瘀顆粒對(duì)瓊脂肉芽腫致小鼠炎癥的影響

空白組小鼠肉芽增生明顯，陽(yáng)性對(duì)照藥組、膈下逐瘀顆粒各劑量組和湯劑組的小鼠肉芽濕重均減輕。膈下逐瘀顆粒各劑量組與模型組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01) 。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 膈下逐瘀顆粒對(duì)瓊脂肉芽腫致小鼠炎癥的影響

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01

3.2 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 膈下逐瘀顆粒對(duì)熱板刺激小鼠痛閾值的影響

表3表明，給藥后60min膈下逐瘀顆粒高、中劑量組、湯劑組鎮(zhèn)痛作用明顯增強(qiáng)，與空白對(duì)照組比較，具有顯著性差異。

表3 膈下逐瘀顆粒對(duì)熱板刺激小鼠痛閾值的影響

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01

3.2.2 膈下逐瘀顆粒對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響

表4表明，膈下逐瘀顆粒高、中、低劑量組及湯劑組扭體次數(shù)均顯著低于空白對(duì)照組(P<0.01)，可明顯抑制醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)。說(shuō)明膈下逐瘀顆粒對(duì)外周神經(jīng)性疼痛的鎮(zhèn)痛效果更強(qiáng)。

表4 膈下逐瘀顆粒對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01

采用熱板實(shí)驗(yàn)和醋酸扭體實(shí)驗(yàn)分別考察膈下逐瘀顆粒對(duì)外周神經(jīng)性疼痛的作用以及中樞神經(jīng)性疼痛產(chǎn)生的作用。

4 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，膈下逐瘀顆粒各劑量組能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹作用，使瓊脂所致肉芽濕重減輕，對(duì)熱板致痛及醋酸致痛均有抑制作用。說(shuō)明膈下逐瘀顆粒具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

縱觀全方，膈下逐瘀顆粒藥物組成為牡丹皮、赤芍、烏藥、川芎、香附、枳殼、元胡、桃仁、鱉甲和地龍。在王清任膈下逐瘀湯的基礎(chǔ)上減去五靈脂、當(dāng)歸、紅花、甘草，同時(shí)加入鱉甲、地龍,既保留了活血祛瘀、行氣止痛的功效，又增加了軟堅(jiān)散結(jié)的作用。其中牡丹皮清熱涼血活血化瘀;赤芍能“通順血脈，緩中，散惡血，逐賊血”;川芎活血養(yǎng)血，行血中之氣;香附乃血中氣藥，血?dú)夥街兴赜弥幠苤痧稣{(diào)經(jīng)，又能引血藥至氣分而生血;枳殼、元胡、烏藥行氣止痛;桃仁破癥瘕，通月水，止痛;鱉甲、地龍行氣活血軟堅(jiān)散結(jié),全方活血化瘀、理氣止痛。

現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)赤芍[1]具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗炎、抗凝血、抗血栓的作用;川芎[2]可降低血粘度，改善血流變，還具有一定的抗菌作用;桃仁[3]具有抗凝血、抗血栓形成作用，可改善血液流變學(xué)，還具有抗炎、抗菌、鎮(zhèn)痛作用;牡丹皮[4]具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗早孕、抗血小板聚集作用，可明顯改善血流變;枳殼[5-6]能興奮子宮，收縮子宮平滑肌，可治療子宮脫垂、產(chǎn)后腹脹以及氣虛所致的崩漏、帶下，還具有鎮(zhèn)痛作用;烏藥[7]具有抗病毒、抑菌、抗炎鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)凝血功能等藥理作用。這與我們得出的膈下逐瘀顆粒具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用是一致的。

由于中藥復(fù)方藥味繁多、成分復(fù)雜，除了單味中藥的單一成分起作用，多種藥物在聯(lián)合后可能產(chǎn)生拮抗、抑制作用，或者新的療效作用，因此期待膈下逐瘀顆粒的研究進(jìn)一步深化。

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2016-10-29

2016-12-29

哈爾濱市科學(xué)技術(shù)局面上項(xiàng)目(2014RFXG071)；黑龍江省整理、傳承老中醫(yī)藥專(zhuān)家學(xué)術(shù)思想課題(CZ14-07)；黑龍江省哲學(xué)社會(huì)科學(xué)規(guī)劃辦公室一般項(xiàng)目(13B059)

鄭躍(1985-)，女，主治醫(yī)師，博士研究生,主要研究方向:中醫(yī)婦科。

*通訊作者：劉麗(1966-)女，主任醫(yī)師，主要研究方向:中醫(yī)婦科。

R285.5

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1002-2392(2017)01-0028-03