談明祿，陳長江

（青海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站，812100）

一例雞大腸桿菌病的病原分離及治療

談明祿，陳長江

（青海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站，812100）

大腸桿菌病是嚴(yán)重影響?zhàn)B殖業(yè)發(fā)展的主要細(xì)菌病之一，是由大腸埃希氏菌的某些血清型所引起的一類疾病的總稱，主要癥狀為心包炎、氣囊炎、敗血癥、臍炎、眼炎、卵黃性腹膜炎或慢性腫瘤樣肉芽腫，雞的發(fā)病率達(dá)到10%～69%,死亡率約為3.8%～72.0%，給養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。2016年5月青海省湟源縣某雞場開始發(fā)病，三天之內(nèi)，死亡121只。 病雞多精神沉郁，食欲減退，腹部膨大，糞便呈灰綠色或黃色，通過對5只瀕死雞進(jìn)行了剖檢、病理學(xué)診斷和病原檢測，確診該雞場發(fā)生了大腸桿菌病，篩選出對這些致病菌比較敏感的幾種藥物進(jìn)行治療，控制疫情。

1 發(fā)病情況

發(fā)病雞場存欄雞5860只，均為散養(yǎng)產(chǎn)蛋雞，240日齡。5月16日開始發(fā)病，發(fā)病雞大約500只左右，三天之內(nèi)，死亡121只。病雞表現(xiàn)為精神沉郁，采食、飲水減少或廢絕，兩翅下垂，縮頸，羽毛粗亂，消瘦。出現(xiàn)呼吸困難，黏膜發(fā)紺，腹瀉，糞便呈灰綠色或黃色；產(chǎn)蛋率下降，產(chǎn)畸形蛋。最后，病雞頭、頸、腿抽搐死亡。

2 剖檢變化

對5只瀕死雞進(jìn)行剖檢，均呈現(xiàn)肝臟腫大，質(zhì)脆，呈暗紅色軟泥狀，表面有小壞死灶(白色)或不同程度的纖維樣偽膜(心包膜上也有)，脾臟腫大，腸系膜發(fā)炎，腸袢互相粘連，小腸有充血、出血，腫脹臌氣，黏膜上有粉紅黏液和散在點(diǎn)狀出血；雞腹腔內(nèi)充滿卵黃液和淡黃色腥臭的液體，卵泡變性破裂，卵膜充血，呈褐色或黑褐色；輸卵管表面不光滑，高度擴(kuò)張，切面呈輪呈狀，黏膜充血、增厚，有發(fā)炎的癥狀，內(nèi)積異形蛋樣滲出物，管腔中也有黃白色的纖維素性凝片；卵巢中的卵泡變形，呈灰色、褐色或醬色色澤，有的卵泡皺縮，滯留在腹腔中，破裂的卵黃則凝結(jié)成大小不等的碎片。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

3.1 涂片鏡檢

無菌采取5只雞的心、肝、脾，進(jìn)行涂片，革蘭氏染色鏡檢，均發(fā)現(xiàn)了革蘭氏陽性的、單個(gè)存在的小桿菌。

3.2 病原的分離培養(yǎng)

無菌采取5只雞的心、肝、脾，分別接種于普通營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂和伊紅美蘭瓊脂平板上，置于37℃恒溫箱培養(yǎng)20 h，觀察細(xì)菌的生長情況。

普通營養(yǎng)瓊脂平板菌落情況為邊緣整齊，中央隆起、光滑、半透明、無色，直徑小于1 mm的針尖大小“露珠狀”小菌落；麥康凱平板生長情況為菌落中等大小，中央輕微隆起，邊緣整齊、光滑、紅色；伊紅美蘭瓊脂平板，紫黑色小菌落，周圍帶有綠色金屬光澤。以上結(jié)果均符合大腸桿菌的特征。分別挑取不同瓊脂平板上典型的單個(gè)菌落革蘭氏染色、鏡檢，結(jié)果與涂片鏡檢的結(jié)果一致。

3.3 生化試驗(yàn)

選取5個(gè)麥康凱瓊脂平板上的紅色菌落，作三糖鐵、尿素酶、IMVIC試驗(yàn)。挑取單個(gè)典型菌落，分別接種于糖發(fā)酵罐，置37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24 h，判定結(jié)果。

3.3.1 三糖鐵：斜面產(chǎn)酸變黃，管底產(chǎn)氣，不產(chǎn)生硫化氫。

3.3.2 不能產(chǎn)生硫化氫和分解尿素，符合大腸桿菌的特性。

3.3.3 吲哚試驗(yàn)陽性，M-R試驗(yàn)陽性，V-P試驗(yàn)陰性，不利用枸櫞酸鹽，符合大腸桿菌IMVIC反應(yīng)特性++--。

3.3.4 糖發(fā)酵試驗(yàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣，發(fā)酵管變黃，有氣泡；不利用蔗糖。

根據(jù)以上結(jié)果，可確定所分離的細(xì)菌為大腸桿菌。

3.4 致病性試驗(yàn)

將麥康凱瓊脂平板上的紅色菌落菌接種于營養(yǎng)肉湯，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。 取健康小白鼠6只，分為A、B兩組，A組3只，腹腔接種營養(yǎng)肉湯菌液，每只0.2mL;B組3只，腹腔接種等量的滅菌生理鹽水作對照組，分別隔離飼養(yǎng)觀察。 取6只7日齡健康雛雞，隨機(jī)分為C、D兩組，與小白鼠同樣的方法，C組皮下接種營養(yǎng)肉湯菌液，每只0.2mL;D組接種等量的滅菌生理鹽水，隔離飼養(yǎng)。結(jié)果A、C兩組均在48小時(shí)內(nèi)死亡，B、D健活。

3.5 藥敏試驗(yàn)

藥敏紙片購自北京天壇生物制品公司，批號(hào)：20151013。包括：氧氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星、培氟沙星、沙拉沙星、強(qiáng)力霉素、磷霉素、氟苯尼考、阿莫西林、頭孢噻呋、頭孢曲松、丁胺卡那霉素。

3.5.1 用滅菌的棉球蘸取細(xì)菌的肉湯培養(yǎng)物(麥康凱瓊脂平板上的紅色菌落菌接種于營養(yǎng)肉湯)均勻涂布到瓊脂平板的表面，然后將氧氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星等12種常用抗生素的藥敏試紙分別貼到瓊脂平板表面，先一塊平板中央放藥敏試紙一張，外周均勻分布6張，另外5種放在另一個(gè)平板上 （每換一種紙片都要滅菌一次鑷子）。37℃培養(yǎng)24h后測量抑菌圈大小，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。（高敏：抑菌圈直徑大于15mm；中敏：抑菌圈直徑為10～15mm；低敏：抑菌圈直徑小于10mm）。

3.5.2 從藥敏試驗(yàn)結(jié)果（表1）可以看出，此次大腸桿菌病對氧氟沙星、強(qiáng)力霉素、洛美沙星、氟苯尼考較敏感，對環(huán)丙沙星、丁胺卡那霉素、培氟沙星中度敏感，對沙拉沙星、磷霉素、阿莫西林、頭孢噻呋、頭孢曲松不敏感。

3.6 治療

通過選用敏感藥物氧氟沙星飼喂給藥，3天后死亡率明顯降低；在治療1周后，病雞群恢復(fù)健康。

表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果（抑菌圈直徑mm）

4 討論

4.1 大腸桿菌是一種條件性致病病原微生物，它廣泛存在于飼料、墊草、糞污和禽舍的灰塵中，也作為常在菌，存在于正常動(dòng)物的腸道中，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降，特別是應(yīng)激情況下，細(xì)菌的致病性即可表現(xiàn)出來，使感染的雞發(fā)病。 因此，防治雞大腸桿菌病應(yīng)改善雞舍衛(wèi)生條件，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，定期消毒，消除本病誘因，減少發(fā)病率。

4.2 適當(dāng)添加維生素和微生態(tài)制劑，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力。由于大腸桿菌是一種極易產(chǎn)生抗藥性的細(xì)菌，因此使用對癥性藥物時(shí)還應(yīng)交替使用，以提高藥效。 在飼料中添加一些維生素A、E對治療本病也有一定幫助。不定期飼喂乳酸菌片，維持雞腸道正常菌的平衡，減少致病性大腸桿菌的侵入。

4.3 該病的診斷和治療應(yīng)該是在細(xì)菌的分離與鑒定以及藥敏試驗(yàn)的基礎(chǔ)開展。最好根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果確定用藥，才能取得滿意療效。在用藥的過程中做到輪換用藥，防止產(chǎn)生耐藥性。

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1003-8655（2017）02-0055-02