林健燕，郭澤強，羅必泰，周艷君，邱昌文，龐興旺

(1.廣西壯族自治區(qū)南寧市中心血站 530003；2.南寧市疾病預防控制中心 530023)

登革熱病毒(Dengue virus，DENV)的感染譜表現(xiàn)為無癥狀的隱性感染、非特征性發(fā)熱、登革熱、登革出血熱、登革休克綜合征[1]；且約75%的感染者表現(xiàn)為無癥狀的隱性感染[2]。處于隱性感染的獻血者在獻血前征詢時不能排除其獻血，且我國尚未把登革熱病毒納入采供血機構的血液檢測項目，那么其所捐獻的血液中很可能攜帶病毒，成為經血傳播的傳染源。為了解南寧市獻血人群中登革熱病毒的感染狀況，收集了1 712例獻血者標本進行登革熱病毒抗原和抗體檢測，現(xiàn)將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 2015年12月至2017年9月的每月10日分別在南寧中心血站的不同采血點隨機抽取部分經過健康征詢合格及血液初篩檢測合格的獻血者。每位獻血者在血液采集時均留取約5～6 mL血樣于EDTA抗凝管中，用于DENV NS1抗原、DENV IgM抗體及DENV IgG抗體的檢測。

1.2標本保存 現(xiàn)場采集的血液保存于2～8 ℃冰箱，并用2～8 ℃冰盒運送至實驗室，實驗室在3 000 r/min的條件下離心15 min分離血清，并將血清存放于-20 ℃低溫冰箱。所有標本在采集后的4 d內完成檢測。

1.3主要試劑與儀器 NS1抗原檢測試劑盒購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，IgM和IgG抗體診斷試劑盒購自中山生物工程有限公司。全自動加樣儀和全自動酶免儀為瑞士HAMILTON公司的產品。

1.4檢測方法 按照試劑盒的使用說明書進行標本的檢測和結果判讀。

NS1抗原采用雙抗體夾心ELISA的原理進行檢測。微孔板上設定陰性對照3孔、陽性對照2孔和空白對照1孔，在除空白孔外的各孔中加入稀釋液50 μL，然后分別在相應孔中加入待測標本或陰、陽性對照各50 μL振蕩混勻。37 ℃溫育60 min后在除空白孔外的各孔中加入酶標試劑50 μL振蕩混勻，繼續(xù)37 ℃溫育30 min后用洗滌液洗板5遍。每孔先后加入顯色劑A、B液各50 μL振蕩混勻于37 ℃顯色15 min后加入終止液50 μL，立即讀取A450 nm值，空白孔調零。結果判定：以陰性對照孔A值的均值+0.10為截斷值(Cut off)，待測標本的A值大于等于截斷值為陽性，小于截斷值為陰性。

IgM和IgG抗體采用間接ELISA進行檢測。將10 μL待測血清標本加入500 μL樣品稀釋液中對標本進行稀釋。包被板上設定陰性對照、陽性對照和空白對照各2孔，在每個陰性對照、陽性對照孔中分別加入陰性對照血清和陽性對照血清100 μL。每個空白對照孔中加入洗滌劑100 μL，其余各孔中加入已稀釋好的待測標本100 μL。振蕩混勻后于37 ℃溫育40 min，用洗滌液洗板5遍后在除空白孔外的各孔中加入酶標試劑50 μL振蕩混勻，繼續(xù)37 ℃溫育30 min后用洗滌液洗板5遍，每孔先后加入底物A、B液各50 μL振蕩混勻于37 ℃顯色10 min后加入終止液50 μL，立即讀取A450 nm值，空白孔調零。結果判定：IgM檢測以陰性對照孔A值的均值+0.20為截斷值(Cut off)，IgG檢測以陰性對照孔A值的均值+0.15為截斷值(Cut off)，待測標本的A值大于等于截斷值為陽性，小于截斷值為陰性。

1.5統(tǒng)計學處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據分析，計數(shù)資料用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1血清學檢測結果 1 712例獻血者中，DENV NS1抗原陽性18例，陽性率1.1%；DENV IgM抗體陽性4例，陽性率0.2%；DENV IgG抗體陽性121例，陽性率7.1%。表1中顯示存在雙重指標陽性的情況，其中1例NS1抗原和IgM抗體均陽性，1例NS1抗原和IgG抗體均陽性。將1 712例獻血者分為以下4種類型：(1)1 571例獻血者NS1、IgM、IgG均為陰性，沒有感染過登革熱病毒；(2)20例獻血者NS1和(或)IgM陽性，新近感染了登革熱病毒；(3)120例獻血者只是IgG陽性，曾經感染過登革熱病毒；(4)1例獻血者NS1和IgG均陽性，存在登革熱病毒的二次感染。見表1。

表1 獻血人群登革熱病毒抗原抗體陽性檢出情況(n=1 712)

表2 血清學檢測結果與人群基本特征之間的相關性[n(%)]

-表示無數(shù)據

2.2血清學檢測結果與人群特征的關系 對血清學檢測結果陽性的獻血人群按照性別、年齡、文化程度、居住地等特征進行比較，發(fā)現(xiàn)IgM與性別之間差異有統(tǒng)計學意義，男性IgM陽性率更高；IgG與年齡之間差異有統(tǒng)計學意義，30歲以上的人群IgG陽性率更高。見表2。

3 討 論

登革熱在全球100多個國家流行，但是東南亞和西太平洋地區(qū)作為登革熱的主要流行區(qū)，該地區(qū)的患者約占全球患者的75%[3]。廣西壯族自治區(qū)與東盟多國相毗連，南寧市作為廣西壯族自治區(qū)的省會城市是中國-東盟博覽會的永久舉辦地，是中國與東盟各國聯(lián)系的橋頭堡。隨著中國東盟自由貿易區(qū)的建立，每年經南寧市進出中國和東盟的旅游、經商、務工、學習人員日益增多，包括登革熱在內的東南亞常見傳染病對廣西乃至全國的威脅迅速增大。本研究在分析人群特征與血清學檢測結果之間的關系時，發(fā)現(xiàn)IgM抗體與性別有關，男性IgM陽性率更高，說明男性由于野外作業(yè)機會較多尤其到東盟各國經商、務工機會較多，更易于遭受有效蚊蟲叮咬導致感染。IgG抗體與年齡有關，30歲以上人群IgG陽性率更高，說明隨著年齡增長，暴露可能性增加，尤其是30歲以上的人群有更多的機會到東南亞旅游、經商和務工，獲得感染的可能性增大。正是由于地理位置、氣候條件及社會活動等因素的存在，南寧市一直是登革熱傳播和流行的高風險地區(qū)。

登革熱病毒有4種血清型，主要通過蚊媒叮咬傳播；然而，針刺傷[4-5]、器官移植[6-7]、輸血[8-9]等非蚊媒叮咬途徑的有效傳播感染案例已有報道。由于大量的患者需要輸血治療，涉及范圍廣泛，因此輸血傳播登革熱病毒的案例自報道以來就一直引起全球輸血工作者和研究者的高度關注。南寧市每年約13萬人次參與獻血，然而獻血人群或健康人群中登革熱病毒的感染狀況一直少有研究報道。本次研究發(fā)現(xiàn)南寧市獻血人群中DENV NS1抗原、IgM抗體、IgG抗體的陽性率分別是1.1%、0.2%、7.1%。有研究指出：NS1抗原和(或)IgM抗體陽性提示正遭受病毒感染，處于感染期；IgG抗體陽性提示既往曾經受過感染，感染已恢復并能抵抗同型病毒的再次感染[10-12]。說明登革熱病毒在南寧市既有既往流行也有現(xiàn)時流行，獻血者中既有曾經受感染者也有正在受感染者。已發(fā)現(xiàn)的21例NS1抗原和(或)IgM抗體陽性的獻血者，其所捐獻的血液中可能攜帶有登革熱病毒并有可能導致受血者感染。121例IgG抗體陽性的獻血者，其所捐獻的血液有可能會讓受血者被動獲得DENV IgG抗體。然而，有研究指出由于登革熱病毒存在抗體依賴性感染增強效應，曾經感染過登革熱病毒的個體，一旦重新感染不同型別的登革熱病毒時，易于發(fā)展為病死率較高的登革出血熱或登革休克綜合征[13-14]。因此，輸注了帶DENV IgG抗體血液的受血者，在獲得同型登革熱病毒的免疫力的同時也承擔了相應的風險。南寧市獻血人群中DENV NS1抗原、IgM抗體、IgG抗體的陽性率明顯低于周邊部分亞洲國家報道的結果[3，12-13]，表明南寧市登革熱的流行率較低，同時也提示抵抗登革熱病毒的人群免疫力較低，當?shù)歉餆岵《据斎霑r易引起暴發(fā)流行。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)存在NS1抗原和IgG抗體同時陽性的情況，說明二次感染的存在，提示南寧市可能同時存在不同型別的病毒流行，進一步提示了輸注IgG抗體陽性的受血者所面臨的風險。

因此，結合南寧市的實際情況，在綜合考慮成本-效益的前提下，建議按照以下方式適當完善當前的獻血者血液篩查策略，以減少登革熱病毒經血傳播的可能。(1)在獻血前的健康征詢表中增加登革熱病毒感染風險相關問題的條目；(2)從東南亞、非洲等登革熱流行區(qū)回來的人員應自入境時起14 d后才能參與獻血，并在獻血前同時進行DENV NS1抗原和DENV IgM抗體的篩查；(3)利用病毒滅活技術對血制品開展病毒滅活。