齊和日瑪 成日青 那生桑 布仁 塔娜 高晶 薩仁高娃

摘要：目的??測(cè)定內(nèi)蒙不同產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素含量，為制定蒙藥點(diǎn)地梅質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法??采用HPLC測(cè)定5個(gè)產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅樣品，色譜柱為COSMOSIL 5C18-MS-II（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.5%磷酸（40∶60），流速0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果??東北點(diǎn)地梅中槲皮素含量為3.58～10.51 mg/g，平均7.14 mg/g;山柰素含量為6.28～9.57 mg/g，平均8.15 mg/g。結(jié)論??本研究建立的測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適于同時(shí)測(cè)定東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素的含量，可為蒙藥點(diǎn)地梅質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：東北點(diǎn)地梅;槲皮素;山柰素;高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.10.019

中圖分類號(hào)：R284.1 ???文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ???文章編號(hào)：1005-5304（2018）10-0088-03

Content Determination of Quercetinum and Kaempferol in Androsace Filiformis?Retz. in Different Producing Areas?in Inner Mongolia

Qiherima， CHENG Ri-qing， NA Sheng-sang， Buren，?Tana， GAO Jing， Sarengaowa

Inner Mongolia Medical University， Huhhot 010110， China

Abstract： Objective?To determine the contents of quercetinum and kaempferol in Androsace filiformis?Retz. in different producing areas in Inner Mongolia; To provide references for establishing quality standards of Androsace filiformis Retz. Methods?HPLC was performed on the column of COSMOSIL 5C18-MS-II （4.6 mm?×?250 mm， 5 μm） with?mobile phase of acetonitrile - 0.5% phosphonic acid solution （40：60） at a flow rate of 0.8 mL/min; the detection wavelength was 360 nm; column temperature was 30 ℃. Results The contents?of quercetinum in Androsace filiformis?Retz. from 5 different producing areas were from 3.58 mg/g to 10.51 mg/g， the average content was 7.14 mg/g， and the contents of?kaempferol were from 6.28 mg/g to 9.57 mg/g，?the average content was 8.15 mg/g. Conclusion?The method in this study is simple and accurate， with good reproducibility， and can be used for the simultaneous determination of quercetinum and kaempferol in Androsace filiformis?Retz.， which can provide a basis for the establishment of quality standards?for?of?Androsace filiformis?Retz. in Inner Mongolia.

Keywords：?Androsace filiformis?Retz.; guercetinum; kaempferol; HPLC

點(diǎn)地梅屬植物Androsace是報(bào)春花科的一個(gè)中等大屬，我國(guó)約有70多種。點(diǎn)地梅是蒙醫(yī)常用藥，蒙藥名為“達(dá)蘭-套布其”，慣用品種為東北點(diǎn)地梅Androsace filiformis?Retz.和北點(diǎn)地梅Androsace septentrionalis?L.，在《無誤蒙藥鑒》《四部甘露》等蒙醫(yī)藥典籍中均有記載。蒙藥點(diǎn)地梅具有清熱、解毒、消腫、療傷、祛協(xié)日烏素、滋養(yǎng)強(qiáng)壯功效，主治創(chuàng)傷化膿疼痛、腫毒性關(guān)節(jié)炎、協(xié)日烏素癥、赫依協(xié)日烏素合并癥^[1]。

點(diǎn)地梅中主要含有黃酮類和三萜皂苷類成分，其中黃酮類成分主要為槲皮素和山柰素^[2-4]。槲皮素具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤等生物活性和廣泛的藥理作用^[5]，山柰素具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、防癌、抗癌等多種功效^[6]，兩者均為點(diǎn)地梅的有效成分。

點(diǎn)地梅為蒙醫(yī)習(xí)用藥材，但迄今尚無該藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因此限制了其在蒙醫(yī)藥領(lǐng)域的合理利用。本研究對(duì)內(nèi)蒙5個(gè)不同產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅樣品中的槲皮素和山柰素進(jìn)行含量分析，為蒙藥點(diǎn)地梅質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

1 ?儀器與試藥

Dionex UltiMate 3000液相色譜儀（美國(guó)Thermo- Fisher公司），BSC電子分析天平（德國(guó)塞多利斯科學(xué)儀器有限公司），HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）。

槲皮素對(duì)照品（批號(hào)100081-200907）、山柰素對(duì)照品（批號(hào)110861-200606），供含量測(cè)定用，中國(guó)食品藥品檢定研究院;乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司），水為市售娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。5批東北點(diǎn)地梅樣品分別采自內(nèi)蒙古不同地區(qū)，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室渠弼副教授鑒定為報(bào)春花科點(diǎn)地梅屬植物東北點(diǎn)地梅Androsace filiformis?Retz.的干燥全草，樣品來源信息見表1。

2 ?方法與結(jié)果

2.1 ?色譜條件

采用COSMOSIL 5C18-MS-II色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.5%磷酸（40∶60），流速0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

2.2 ?對(duì)照品溶液的制備

精密稱取槲皮素和山柰素對(duì)照品適量，分別加甲醇制成每1 mL含0.3 mg槲皮素和0.3 mg山柰素的對(duì)照品溶液。

2.3 ?供試品溶液的制備

取本品粉末約0.5 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入甲醇-25%鹽酸（體積比為4∶1）混合溶液25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用上述混合溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液^[7]。

2.4 ?系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，理論板數(shù)以各待測(cè)成分峰計(jì)均高于10 000，各成分基線分離良好。

2.5 ?線性關(guān)系考察

????分別取上述槲皮素和山柰素對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量分別為1、2、4、8、12、16 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積對(duì)質(zhì)量進(jìn)行線性回歸。槲皮素回歸方程為Y=73.81 5X-0.550 9，r²=0.999 9;山柰素回歸方程為Y=76.565 9X+0.215 1，r²=1.000 0，表明槲皮素和山柰素在0.3～4.8 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 ?精密度試驗(yàn)

取本品供試品溶液1份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果槲皮素和山柰素峰面積的RSD分別為0.18%和0.51%，表明儀器精密度良好。

2.7 ?重復(fù)性試驗(yàn)

取6份同一批樣品約0.5 g，精密稱定，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果槲皮素和山柰素峰面積的RSD分別為2.81%和3.60%，表明本法重復(fù)性良好。

2.8 ?穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣測(cè)定峰面積，槲皮素和山柰素峰面積的RSD分別為0.59%和0.60%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 ?加樣回收率試驗(yàn)

取6份已知槲皮素和山柰素含量的樣品粉末，每份約0.25 g，精密稱定，以2份為1組，分別按對(duì)照品加入量與供試品中待測(cè)成分量之比為0.5∶1、1∶1、1.5∶1同時(shí)加入槲皮素和山柰素對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。槲皮素加樣回收率為98.23%～104.77%，平均101.91%，RSD=2.51%;山柰素加樣回收率為95.48%～105.12%，平均100.97%，RSD=3.55%。表明本法回收率良好。

2.10 ?樣品含量測(cè)定

取5批東北點(diǎn)地梅樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表3。東北點(diǎn)地梅樣品中槲皮素含量為3.58～10.51 mg/g，山柰素含量為6.28～9.57 mg/g，平均含量分別為7.14 mg/g和8.15 mg/g。

3 ?討論

本研究在選擇樣品提取方法時(shí)，首先比較了超聲提取法和回流提取法，結(jié)果回流提取法提取相對(duì)完全、重復(fù)性好;其次比較了先甲醇回流后加鹽酸水解方法與同時(shí)加入甲醇和鹽酸的提取效果，結(jié)果后者提取率更高，方法學(xué)更穩(wěn)定。故本試驗(yàn)確定采用文中所述的提取方法。

5個(gè)產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素的含量分別為3.58～10.51 mg/g和6.28～9.57 mg/g，平均含量分別為7.14 mg/g和8.15 mg/g，其中樣品1（烏蘭察布蘇木山）中2種成分的含量均較高，樣品4（興安盟五岔溝）中的含量均最低，且2個(gè)產(chǎn)地樣品中槲皮素含量相差較大，說明不同產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅品質(zhì)有較大差別。

本研究建立的測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用來同時(shí)測(cè)定東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，5個(gè)產(chǎn)地東北點(diǎn)地梅中槲皮素和山柰素的含量均較高，可作為蒙藥點(diǎn)地梅質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制的指標(biāo)成分。

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