于海躍， 崔君鵬， 劉寶林

中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院普外科，遼寧 沈陽 110001

肝細胞癌是一種消化道惡性腫瘤，世界范圍內(nèi)發(fā)病率約為100萬人/年，發(fā)病率極高，而我國肝細胞癌發(fā)病率、死亡率均居世界前列[1]。肝癌的重要特征是癌細胞增殖失去正常調(diào)控[2]。其發(fā)生、發(fā)展與多種因素有關(guān)，包括病毒性肝炎、酗酒、黃曲霉素等原因，也可發(fā)生于無任何已知危險因素者中。現(xiàn)階段研究發(fā)現(xiàn)多種基因在肝癌的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用，XRCC1基因在肝癌中的作用隨著研究的深入逐漸體現(xiàn)出來。X線修復交叉互補蛋白(XRCC1)位于人19號染色體的長臂區(qū)(19q13.2～19q13.3)。其基因組大小約31.9 kb，XRCC1編碼633個氨基酸，相對分子量約69.5 kD[3]。該基因參與堿基切除修復(BER)及DNA單鏈斷裂修復(SSBR)，是基因組穩(wěn)定維持的關(guān)鍵基因之一。Rs25487(Arg399Gln)位點的變異可對XRCC1基因功能產(chǎn)生一定影響，導致基因功能改變，從而在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中產(chǎn)生作用。多個病例-對照研究對該位點進行了研究報道[4-12]，其結(jié)論并不統(tǒng)一。本文旨在通過Meta分析，對以上研究進行綜合定量分析，從而得出基于以上試驗較為可靠的結(jié)論。

1 資料與方法

1.1文獻檢索本研究以肝細胞癌與XRCC1(Arg399Gln)基因多態(tài)性之間關(guān)系為中心，對國內(nèi)外數(shù)據(jù)庫包括萬方、CNKI、Medline、PubMed、CMB、VIP等進行全面檢索，力求全面準確，無語言限制，截至出版日期為2018年2月28日，同時對納入文獻的參考文獻也進行全面檢索。對于多篇文獻出現(xiàn)的重疊、數(shù)據(jù)相同等情況，決定納入數(shù)據(jù)量最大或最新發(fā)表文獻。

1.2文獻的納入及排除標準對于2011年至2018年見所有公開發(fā)表的圍繞主題相關(guān)的文獻進行統(tǒng)一篩選，所納入文獻中的試驗要求使用有效的分子生物學方法進行檢測，可準確確定基因型，可準確確定各基因型的具體數(shù)目，有無死亡失訪病例。文獻主題應緊密圍繞XRCC1(Arg399Gln)基因型與肝細胞癌之間的關(guān)系。所納入文獻必須為病例-對照研究。文獻內(nèi)容應全面清楚，可計算出相應基因型的病例數(shù)及可供計算比數(shù)比(odds ratio，OR)及其95%可信區(qū)間(95%CI)。對于研究方向錯誤，研究對象非人類，文獻類型為綜述、述評及病例報道類文獻不予納入。對于數(shù)據(jù)不完整、重復發(fā)表及重復收錄的文獻不予重復納入。

1.3數(shù)據(jù)提取提取數(shù)據(jù)時應由2名作者獨立進行，采用保準數(shù)據(jù)提取表進行數(shù)據(jù)提取，交叉核對，對于存在異議處應進行討論，由通訊作者參與決定解決方案。提取的信息應包含第一作者、出版年份、種族地區(qū)、病例組及對照組相應基因型樣本容量。同時對數(shù)據(jù)進行NOS評分，得出相應分值。

1.4文獻質(zhì)量評價我們使用NOS量表作為納入文獻質(zhì)量評價尺度，評價內(nèi)容包括：病例確定是否恰當、病例的代表性、對照的選擇、對照的定義、組間可比性、對照組及病例組是否采用了相同的確定方法。總分數(shù)為6～9分則可認為是高質(zhì)量(或低偏倚風險)的研究，4～5分則認為是中度偏倚風險，1～3分則認為具有高度偏倚風險。利用漏斗圖評價潛在的發(fā)表偏倚。

1.5統(tǒng)計學分析采用RevMan 5.3軟件進行統(tǒng)計學分析，以OR及95%CI作為效應分析統(tǒng)計量。通過卡方檢驗，I2檢驗進行數(shù)據(jù)異質(zhì)性評估，在P>0.1時同意合并數(shù)據(jù)同質(zhì)性較好。采用固定效應模型合并分析。否則進行隨機效應模型分析。根據(jù)I2的值可對異質(zhì)性程度進行分析。當其值>75%可認為具有高度異質(zhì)性，25%～50%為中度異質(zhì)性，<25%則認為具有低度異質(zhì)性。以漏斗圖評價偏倚。統(tǒng)計分析采用顯性基因模型及隱性基因模型。采用雙側(cè)檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1文獻檢索結(jié)果通過文獻全面檢索，共檢索出相關(guān)文獻42篇，經(jīng)過篩選最終有9篇[4-12]符合本次研究納入標準，均為英文文獻。篩選流程見圖1。所有納入文獻經(jīng)過嚴格NOS評分，評分均>6分，皆納入本次研究。文獻數(shù)據(jù)提取詳見表1。

表1 文獻數(shù)據(jù)提取表Tab 1 Extraction table of literature data

圖1 文獻篩選流程圖Fig 1 Literature screening flow chart

2.2文獻特征本次研究所納入文獻均為病例-對照研究，共計6 671例樣本。其中病例組3 094例，對照組3 577例。篩選過程中不符合納入標準的文獻均予以排除。

2.3統(tǒng)計學分析結(jié)果所納入9篇文獻經(jīng)過統(tǒng)計分析處理，其結(jié)果如圖2～3所示。兩種模型I2數(shù)值較大，采取隨機效應模型進行分析。分析結(jié)果顯示當A為顯性基因模型時，OR=0.72,95%CI： 0.46～1.12,P=0.14,差異無統(tǒng)計學意義，對肝細胞癌無任何作用；而當A為隱性基因模型時，OR=1.36,95%CI: 1.01～1.84,P=0.04,差異有統(tǒng)計學意義，XRCC1可促進肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展。

2.4發(fā)表偏倚因結(jié)果分析顯示I2數(shù)值較大，采取隨機效應模型分析，漏斗圖如圖4～5所示。其圖形較對稱，可認為該研究偏倚較小。

3 討論

本研究通過文獻檢索，納入9篇病例-對照研究，綜合進行Meta分析得出結(jié)論。分析結(jié)果顯示，當A為顯性基因模型時(OR=0.72，95%CI：0.46～1.12，P=0.14)，差異無統(tǒng)計學意義，當A為隱性基因模型時(OR=1.36，95%CI：1.01～1.84，P=0.04)，差異有統(tǒng)計學意義，從而本次分析可得出一定結(jié)論，當?shù)任换?/p>

圖2 A為顯性基因模型Fig 2 A was the dominant gene model

圖3 A為隱性基因模型Fig 3 A was the recessive gene model

圖4 A為顯性基因模型漏斗圖

圖5 A為隱性基因模型漏斗圖Fig 5 Funnel plot of the recessive gene model

A基因為顯性模型時，其對肝細胞癌的發(fā)生無任何作用，而當A為隱性基因模型時，其對肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展具有促進作用。本研究納入文獻研究人群主要以亞洲地區(qū)為主，包含少量歐洲地區(qū)人群，結(jié)果對亞洲地區(qū)的肝細胞癌具有一定的指導意義，仍需大量的其他地區(qū)的文獻逐漸納入到研究中來。

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素參與的過程。現(xiàn)階段更多研究從基因水平對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進行了闡述。XRCC1編碼產(chǎn)物蛋白質(zhì)與DNA修復中的多種酶直接相關(guān)，通過產(chǎn)物中的功能區(qū)域，參與SSBR和BER路徑[13-15]的核心過程。XRCC1基因(Arg399Gln)多態(tài)性尤其值得關(guān)注，其位點位于功能活躍區(qū)段，其變異可能引起DNA修復活動減少[16-18]。XRCC1的突變可削弱XRCC1與其他酶的相互作用從而增加癌癥發(fā)生的風險[8, 19-20]。多種內(nèi)源性代謝過程或環(huán)境致癌物均可參與到細胞損傷過程中，如果修復系統(tǒng)不能保持穩(wěn)定，便會逐步加強損傷。在印度的一個族群中，發(fā)現(xiàn)了Gln基因與肝細胞癌之間的顯著聯(lián)系[21]。DNA修復機制非常重要，其重要在于保持基因組完整性和預防致癌作用。BER途徑是針對較小的基礎(chǔ)病變機制(主要以氧化及烷基化為中心)引起損傷的主要修復途徑。XRCC1基因在多步驟中被認為是重要的蛋白質(zhì)，是第一個從哺乳動物細胞中分離出來的影響細胞對電離輻射敏感性的基因[3]。XRCC1在多種其他腫瘤中的作用均得到了正式報道，其在頭部腫瘤、肺癌、食管癌、乳腺癌及其他惡性腫瘤中的試驗中均有所發(fā)現(xiàn)[22-23]。在不同的白人肝細胞癌病例組中，發(fā)現(xiàn)了XRCC1(Arg399Gln)基因型的活躍表達[24-25]，在非洲也有相同的證據(jù)表明相同的結(jié)果[26]。所納入研究中有多篇文章中發(fā)現(xiàn)合并有乙型肝炎及丙型肝炎的患者中，可檢測出明顯的XRCC1(Arg399Gln)基因的高度表達。

綜上所述，本次研究結(jié)果顯示，等位基因A為顯性基因模型時對肝細胞癌無任何作用，當A為隱性基因模型時促進肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展伴隨著復雜的過程，多種因素綜合作用最終促進了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本文僅針對XRCC1(Arg399Gln)基因在肝細胞癌中的表達進行了研究分析，對于引起腫瘤的其他因素，患者的飲食、吸煙、飲酒、病毒性肝炎等其他情況未進行進一步分析。同時，本研究納入文獻人群覆蓋面不夠廣泛，主要以亞洲人群為主，對于亞洲人群疾病有一定的參考意義，對于其他人群仍需要廣泛的試驗輔助證實。