肖文霞，王會芝，周廣杰，欒艷秋

(北京市東城區(qū)第一婦幼保健院，北京 100007)

輔助T細(xì)胞(Th)根據(jù)其分泌的細(xì)胞因子和功能不同，可分為Th1和Th2細(xì)胞[1]。Th1/Th2是維持機(jī)體健康的重要免疫機(jī)制之一。在正常情況下，Th1和Th2兩種細(xì)胞互為抑制，機(jī)體處于Th1/Th2動態(tài)平衡中，但在病毒感染、藥物及各種應(yīng)激等情況下，Th1/Th2平衡遭到破壞，機(jī)體會出現(xiàn)免疫反應(yīng)異常，導(dǎo)致組織器官損傷。本研究回顧性分析我院30例妊娠期糖尿病(GDM)孕婦血清中Th1分泌的細(xì)胞因子干擾素-γ(IFN-γ)及Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子白介素-4(IL-4)的水平，用IFN-γ/IL-4比值表示Th1/Th2，以探討Th1/Th2和GDM的相關(guān)性，為臨床預(yù)防和治療GDM提供一定的理論基礎(chǔ)。

一、資料與方法

1.研究對象：選取2015年10月至2016年10月間在我院住院治療的GDM孕婦30例為GDM組，年齡20～44歲，孕周37～40周。同時(shí)隨機(jī)選取同一時(shí)期內(nèi)在我院住院的正常孕婦30例為對照組，年齡20～42歲，孕周37～41周。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合GDM診斷標(biāo)準(zhǔn)：妊娠24～28周孕婦口服75 g無水葡萄糖進(jìn)行口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(OGTT)，空腹及服糖后1 h、2 h血糖值分別為5.1 mmol/L、10.0 mmol/L、8.5 mmol/L，任何一點(diǎn)血糖值達(dá)到或超過上述標(biāo)準(zhǔn)即診斷為GDM；(2)兩組孕婦均為單胎孕婦，且均無產(chǎn)兆。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)糖尿病合并妊娠孕婦，診斷為GDM但孕期使用過胰島素者；(2)存在其他內(nèi)外科合并癥、宮內(nèi)感染、臨床發(fā)熱征象者。

GDM組孕婦孕期通過調(diào)整飲食及運(yùn)動，血糖控制基本滿意，孕期未使用胰島素。所有受試對象均知情同意并簽署知情同意書，本研究由我院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

2.標(biāo)本制備：所有對象在早晨抽取空腹靜脈血4 ml，部分血液送我院檢驗(yàn)科進(jìn)行糖化血紅蛋白測定，部分血液常溫下靜置2.5～3.0 h，以3 000 r/min的速率離心10 min，取上清液置于EP管中，置于-80℃冰箱保存，待測。詳細(xì)記錄每位對象的年齡、孕周、血糖控制基本情況、糖化血紅蛋白數(shù)值等情況。

3.實(shí)驗(yàn)方法：用ELISA方法測定兩組孕婦血清中的IFN-γ和IL-4，試劑盒由深圳晶美公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

二、結(jié)果

1.兩組研究對象的一般資料比較：兩組研究對象的年齡、孕周、糖化血紅蛋白水平比較，均無顯著性差異(P>0.05)(表1)。

2.兩組對象Th1/Th2細(xì)胞因子比較：兩組比較，GDM組孕婦血清中IFN-γ水平顯著低于對照組(P<0.05)；IL-4水平則顯著高于對照組(P<0.05)。GDM組孕婦血清中IFN-γ/IL-4比值顯著低于對照組(P<0.05)(表2)。

表1 兩組研究對象一般資料比較(-±s)

表2 兩組對象血清中IFN-γ和IL-4測定結(jié)果比較(-±s)

注：與對照組比較，*P<0.05

討 論

免疫系統(tǒng)是機(jī)體的第一道防線，可以抵抗病原體感染及危險(xiǎn)信號刺激。T淋巴細(xì)胞，尤其是CD4+T淋巴細(xì)胞可以通過輔助B細(xì)胞在免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。CD4+T細(xì)胞根據(jù)產(chǎn)生的細(xì)胞因子不同，可分為Th1和Th2細(xì)胞因子。Th1細(xì)胞可通過分泌IL-2和IFN-γ，從而介導(dǎo)細(xì)胞免疫[2]；Th2細(xì)胞則通過分泌IL-4和IL-10促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖以產(chǎn)生免疫球蛋白G(IgG)和IgE，從而介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)[3]。正常情況下，機(jī)體內(nèi)Th1和Th2相互排斥、相互調(diào)節(jié)，保持Th1/Th2比值的動態(tài)平衡，為機(jī)體提供最佳的免疫保護(hù)作用。但當(dāng)機(jī)體受到外界病原體刺激時(shí)，Th1/Th2比值可能出現(xiàn)失衡并向某一方面轉(zhuǎn)化[4]。

正常妊娠是一個(gè)類似于同種異體移植的復(fù)雜過程，胎兒攜帶1/2異于母體的父源性白細(xì)胞組織相容性抗原(HLA)[5]，這對于母親來說是異物，因此胚胎植入過程某種意義上類似移植，在正常妊娠中，胚胎不會被母體免疫系統(tǒng)所排斥[6]，胎兒表面或胎盤組織表達(dá)的抗原可以誘導(dǎo)母體的同種免疫反應(yīng)，母體能夠免疫耐受半同種胎兒來源的滋養(yǎng)細(xì)胞，這是胚胎種植和成功妊娠的關(guān)鍵[7]。有研究表明：Th1型細(xì)胞因子，如IL-2和IFN-γ，可以提高NK細(xì)胞(自然殺傷細(xì)胞)的毒性，從而抑制胚胎種植、滋養(yǎng)細(xì)胞生長及胚胎發(fā)育[8]，介導(dǎo)胎兒排斥；而Th2型細(xì)胞因子，如IL-4和IL-10可通過抑制Th1型免疫反應(yīng)，保護(hù)胎兒免受免疫系統(tǒng)攻擊，從而有利于妊娠維持[9]。因此，妊娠是一種Th1/Th2向Th2偏移的現(xiàn)象，Th2偏移是對Th1細(xì)胞因子抑制的結(jié)果[10]。Th2偏移通常用以解釋妊娠的免疫耐受，并被認(rèn)為是成功妊娠的重要標(biāo)志[11-12]。另外，Th2占優(yōu)勢可刺激機(jī)體產(chǎn)生大量抗體，不僅有利于對抗細(xì)菌，還有利于提供給胎兒被動免疫[13]。相反，Th1占優(yōu)勢則可促進(jìn)胎兒排斥，引起復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓疾病、胎兒生長受限及早產(chǎn)等[14-15]。

已有研究表明IFN-γ+T細(xì)胞分泌IFN-γ，代表Th1細(xì)胞[16]，因此可以用IFN-γ水平代表Th1細(xì)胞水平。本研究結(jié)果顯示：GDM孕婦血清中IFN-γ水平顯著低于對照組(P<0.05)，提示GDM孕婦體內(nèi)IFN-γ分泌減少，說明其體內(nèi)Th1細(xì)胞水平降低。這與Ategbo等[17]的研究結(jié)果相一致，該研究用ELISA方法測定59例GDM和60例正常孕婦血清中的細(xì)胞因子，結(jié)果顯示：GDM孕婦血清中IFN-γ水平明顯低于正常對照組，并推測Th1細(xì)胞因子下降有利于GDM孕婦維持妊娠。IL-4+T細(xì)胞分泌IL-4，代表Th2細(xì)胞[18]，IL-4的水平可以表示Th2細(xì)胞水平，本研究結(jié)果顯示：GDM孕婦血清中IL-4水平顯著高于對照組(P<0.05)，提示GDM孕婦體內(nèi)IL-4分泌增多，說明其體內(nèi)Th2細(xì)胞水平升高。

IFN-γ和IL-4之間的平衡對Th0向Th1或Th2分化起關(guān)鍵作用，可通過檢測IFN-γ/IL-4的平衡來反映機(jī)體Th1/Th2的變化[16]。本研究結(jié)果顯示：與正常孕婦相比，GDM孕婦血清中IFN-γ/IL-4比值顯著降低(P<0.05)，提示GDM孕婦體內(nèi)Th1/Th2比值失衡，更加向Th2漂移。因此本研究認(rèn)為：與其他妊娠并發(fā)癥如流產(chǎn)、子癇前期等不同，GDM孕婦體內(nèi)Th1/Th2不是向Th1轉(zhuǎn)化，而是更加向Th2漂移，是一種Th2更加占主導(dǎo)的狀態(tài)，提示GDM孕婦體內(nèi)存在著免疫激活和功能失調(diào)。由于Th2細(xì)胞具有抗炎作用，可抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)，因此我們推測：由于GDM是一種炎癥狀態(tài)[18]，體內(nèi)各種炎癥因子明顯升高，Th2細(xì)胞優(yōu)勢表達(dá)，可能是機(jī)體的一種代償機(jī)制，通過分泌更多的Th2細(xì)胞因子，抑制體內(nèi)的炎癥進(jìn)一步加重，并促進(jìn)母體免疫更加耐受，有利于維持妊娠。

關(guān)于GDM孕婦體內(nèi)Th1/Th2比值更加向Th2漂移的機(jī)制目前尚不清楚。有學(xué)者認(rèn)為GDM孕婦體內(nèi)存在的高胰島素血癥，可促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th2表型分化[19]，從而出現(xiàn)Th2占主導(dǎo)地位。Viardot等[20]通過研究發(fā)現(xiàn)：胰島素可以影響T細(xì)胞分化，促進(jìn)T細(xì)胞向Th2表型轉(zhuǎn)化，不僅可增加Th2細(xì)胞數(shù)量，還可增加Th2分泌的細(xì)胞因子。胰島素促使Th1/Th2比值降低是胰島素重要的免疫調(diào)節(jié)作用，與胰島素的其他抗炎癥作用，包括抑制NF-kB，減少抗炎癥細(xì)胞因子以及促進(jìn)抗炎癥細(xì)胞因子生成相一致。另有學(xué)者認(rèn)為GDM孕婦體內(nèi)可產(chǎn)生過多的自由基，同時(shí)抗氧化能力下降，存在氧化應(yīng)激[18]，而氧化應(yīng)激可以促進(jìn)CD4+T細(xì)胞向Th2表型分化[21]。但是，關(guān)于GDM患者Th1/Th2失衡的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究與探討。

綜上所述，GDM患者體內(nèi)存在著Th1/Th2失衡的現(xiàn)象，與其他妊娠并發(fā)癥不同，Th1/Th2失衡不是向Th1轉(zhuǎn)化，而是更向Th2轉(zhuǎn)化，Th2更加優(yōu)勢表達(dá)。這種失衡是否是GDM的發(fā)病機(jī)制之一尚需進(jìn)一步深入研究。