王 倩，何長生，周迎春，王 軍，沈 艷，劉 華，王 維

（安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽合肥 230091）

在眾多豬群病毒性疾病中，豬瘟（CSF）、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（HP-PRRS）、口蹄疫（FMD）和豬偽狂犬?。≒R）等是危害養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病，其危害嚴(yán)重，控制難度大，嚴(yán)重影響規(guī)模豬場(chǎng)的生產(chǎn)成績和經(jīng)濟(jì)效益，是我國重點(diǎn)防控的豬群動(dòng)物疫病[1-2]。按照中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部屠宰技術(shù)中心）2015—2018年連續(xù)4年制定的《國家動(dòng)物疫病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)實(shí)施方案》要求，綜合考慮生豬養(yǎng)殖特點(diǎn)、飼養(yǎng)規(guī)模和流通范圍等，安徽省確定了監(jiān)測(cè)數(shù)量，統(tǒng)一了檢測(cè)方法，按照流行病學(xué)調(diào)查與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)相結(jié)合的原則，在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)設(shè)立了豬病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)點(diǎn)。2015—2018年，本研究在安徽省選定的12個(gè)定點(diǎn)規(guī)模豬場(chǎng)，連續(xù)4年進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行整理分析，為完善動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)預(yù)警體系和防控動(dòng)物疫病提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 監(jiān)測(cè)點(diǎn)設(shè)置

2015—2018年，選定安徽省東部滁州市全椒縣、南部安慶市望江縣、中部六安市裕安區(qū)作為養(yǎng)殖環(huán)節(jié)（生豬）定點(diǎn)監(jiān)測(cè)縣。4年間選定的監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)基本不變，部分養(yǎng)殖場(chǎng)因經(jīng)營不善、環(huán)保整改等原因無法進(jìn)行監(jiān)測(cè)，由同縣（區(qū)）與其養(yǎng)殖規(guī)模相似的其他場(chǎng)點(diǎn)替補(bǔ)。根據(jù)《國家動(dòng)物疫病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)實(shí)施方案》中關(guān)于動(dòng)物飼養(yǎng)規(guī)模分類標(biāo)準(zhǔn)，選定5個(gè)中型生豬養(yǎng)殖場(chǎng)（1 000頭＜豬存欄量≤5 000頭）和7個(gè)小型生豬養(yǎng)殖場(chǎng)（豬存欄量≤1 000頭）共12個(gè)固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，分別于2015年上半年（6月份）、下半年（12月份），以及2016—2018年的5—7月份，共開展5次重大動(dòng)物疫病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查。

1.2 采樣種類和數(shù)量

利用注射器和扁桃體采樣器，采集血清和對(duì)應(yīng)扁桃體樣品。按照《國家動(dòng)物疫病定點(diǎn)監(jiān)測(cè)實(shí)施方案》要求，2015—2017年，在中型和小型豬場(chǎng)，每場(chǎng)分別最少采集30頭和15頭豬的血清及對(duì)應(yīng)扁桃體樣品，2018年在中型和小型豬場(chǎng)，每場(chǎng)分別最少采集20頭和10頭豬的血清及對(duì)應(yīng)扁桃體樣品。連續(xù)4年在12個(gè)固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，采集血清樣品1 394份和對(duì)應(yīng)的扁桃體組織樣品1 391份，共計(jì)2 785份。在每種規(guī)模場(chǎng)點(diǎn)采樣時(shí)，盡量兼顧種公豬、生產(chǎn)母豬、后備母豬、哺乳仔豬、保育豬和育肥豬；若不能兼顧，則采集場(chǎng)內(nèi)現(xiàn)有生長階段的豬，補(bǔ)齊采樣總數(shù)。

1.3 儀器和試劑

口蹄疫病毒（FMDV）3ABC單抗阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、O型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒：購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所；FMDV、豬瘟病毒（CSFV）和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（HP-PRRSV）熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒：購自北京元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司；PRRSV抗體檢測(cè)試劑盒、CSFV抗體檢測(cè)試劑盒、豬偽狂犬病毒（PRV）檢測(cè)試劑盒（gE）和PRV檢測(cè)試劑盒（gB）：購自美國愛德士公司。儀器包括：磁珠純化儀（King Fisher Flex）、熒光定量PCR儀（ABI Step One Plus）、 酶 標(biāo) 儀（TECAN SUNRISE REMOTE）、96通道全自動(dòng)洗板機(jī)（ELX405R）等。

1.4 檢測(cè)方法

采用熒光定量RT-PCR方法，對(duì)采集的扁桃體組織樣品進(jìn)行病毒檢測(cè)，包括CSFV、FMDV和HP-PRRSV；采用ELISA方法，對(duì)采集的血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè)，包括A型、O型FMDV抗體及3ABC抗體，HP-PRRSV、CSFV抗體，PRV gE、gB抗體。操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 判定標(biāo)準(zhǔn)

按照試劑盒說明書進(jìn)行判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同病種

2.1.1 FMD 2015—2018年，均未檢測(cè)出FMDV核酸陽性，但均檢出FMDV 3ABC抗體；O型FMDV免疫抗體合格率分別為32.0%、19.9%、30.1%和71.78%，A型免疫抗體分別為89.86%、68.57%、40.8%和43.57%，抗體合格率整體呈下降趨勢(shì)（表1）。

表1 2015—2018年FMD檢測(cè)結(jié)果

2.1.2 CSF、HP-PRRS、PR 除2015年外，其余年份未檢出CSFV核酸陽性；CSFV免疫抗體合格率雖然均超過了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，但隨著CSF強(qiáng)制免疫政策的退出，抗體合格率整體呈下降趨勢(shì)。HP-PRRSV核酸陽性率呈逐年下降趨勢(shì)，而免疫抗體合格率呈上升趨勢(shì)，且均超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)。2015—2018年，每年均有PRV gE（野毒）感染抗體被檢出，gB免疫抗體合格率普遍較低，且呈下降趨勢(shì)（表2）。

表2 2015—2018年CSF、HP-PRRS、PR檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同規(guī)模豬場(chǎng)

2.2.1 中型豬場(chǎng) 2015—2018年分別檢測(cè)了14個(gè)（上下半年各7個(gè)）、6個(gè)、6個(gè)和5個(gè)中型場(chǎng)的951份血清學(xué)樣品。結(jié)果顯示，中型豬場(chǎng)的CSFV和HP-PRRSV免疫抗體較為穩(wěn)定，連續(xù)4年超過70%的農(nóng)業(yè)農(nóng)村部標(biāo)準(zhǔn)，但O型和A型FMDV免疫效果不理想；連續(xù)4年在中型豬場(chǎng)檢測(cè)出HP-PRRSV核酸陽性，但陽性率呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)（表3）。

2.2.2 小型豬場(chǎng) 2015—2018年分別檢測(cè)了10個(gè)（上下半年各5個(gè)）、6個(gè)、6個(gè)和6個(gè)小型場(chǎng)的443份血清學(xué)樣品。小型豬場(chǎng)CSFV抗體和HPPRRSV抗體雖然超過70%的標(biāo)準(zhǔn)，但是低于中型豬場(chǎng)；O型、A型FMDV免疫抗體和PRV gB免疫抗體合格率與中型豬場(chǎng)基本持平；僅在2015年和2018年檢測(cè)出HP-PRRSV核酸陽性，但陽性率小于中型豬場(chǎng)（表4）。

表3 2015—2018年中型豬場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果

表4 2015—2018年小型豬場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同生產(chǎn)階段

生產(chǎn)母豬的CSFV、HP-PRRSV和PRV gB抗體水平最高，種公豬的O型和A型FMDV免疫抗體水平最高，后備母豬的PRV gE抗體水平最高，保育豬群和育肥豬群的整體抗體水平低于其他生產(chǎn)階段豬群（表5）。

表5 2015—2018年不同生產(chǎn)階段抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 FMD

此次監(jiān)測(cè)對(duì)選取的豬場(chǎng)詳細(xì)調(diào)查了疫苗免疫背景信息，發(fā)現(xiàn)大部分規(guī)模豬場(chǎng)雖然使用了政府采購的豬O型和A型FMDV滅活疫苗，但是不僅O型疫苗免疫效果不理想，A型疫苗的免疫抗體水平也呈逐年下降趨勢(shì)，小型豬場(chǎng)免疫效果更差。這可能與免疫操作不規(guī)范、母源抗體干擾、環(huán)境與飼養(yǎng)管理不善等因素有關(guān)[3]。種公豬、生產(chǎn)母豬和后備母豬的O型和A型FMDV抗體合格率均高于育肥豬和保育豬，這與張俊波等[4]對(duì)規(guī)?；i場(chǎng)O型FMD調(diào)查的結(jié)果一致。許楊等[5]研究顯示，育肥豬在免O型FMD時(shí)母源抗體已經(jīng)很低，首免后15 d抗體效價(jià)仍然不高；黃克青等[6]研究顯示，保育階段是FMD抗體水平較低、抗病力最薄弱的飼養(yǎng)階段。種公豬、生產(chǎn)母豬和后備母豬因沒有母源抗體干擾，抵抗力比育肥豬和保育豬都高，所以抗體水平高于育肥豬和保育豬群。建議加強(qiáng)育肥和保育階段豬群O型FMD免疫，提高其抗體水平。2015—2018年均檢測(cè)出FMDV 3ABC感染抗體，但病毒核酸均呈陰性。楊蘇珍等[7]研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)2只豬人工感染FMDV 21 d后，3ABC抗體仍呈陰性，證明病毒未能在體內(nèi)進(jìn)行有效復(fù)制，尚沒有引發(fā)病癥。

3.2 CSF

2015—2018年CSFV核酸陽性率呈逐年下降趨勢(shì)，并且連續(xù)4年免疫抗體合格率超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，說明雖然CSF逐漸退出了國家強(qiáng)制免疫計(jì)劃，但豬場(chǎng)自身依然對(duì)CSF免疫和補(bǔ)免很重視，也證明了高質(zhì)量的疫苗和科學(xué)合理的免疫程序?qū)SF控制十分重要[8]。中型豬場(chǎng)的CSFV抗體合格率高出小型豬場(chǎng)7.08個(gè)百分點(diǎn)，不同豬場(chǎng)的抗體水平也存在一定差異，這可能與不同規(guī)模豬場(chǎng)的日常管理、疫苗免疫程序及采取的生物安全防控措施等因素有一定的相關(guān)性[9]。保育豬、育肥豬、后備母豬和生產(chǎn)母豬的CSFV抗體合格率均較高，免疫效果理想，但其中有4份種公豬的抗體合格率較低，這可能存在免疫操作不當(dāng)問題。

3.3 HP-PRRS

當(dāng)前HP-PRRS仍是影響我國生豬養(yǎng)殖的主要疫病，其流行范圍廣，流行毒株復(fù)雜多樣，但仍以地方性流行和散發(fā)為主，因此可防可控。此次監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，HP-PRRSV核酸陽性率呈逐年下降趨勢(shì)，其中中型豬場(chǎng)的陽性率高出小型豬場(chǎng)24.72個(gè)百分點(diǎn)。牛紅雨等[10]研究發(fā)現(xiàn)，中型豬場(chǎng)養(yǎng)殖密度高，養(yǎng)殖數(shù)量大，不同圈舍的豬直接或間接接觸的概率較高，感染風(fēng)險(xiǎn)較高，因而感染率較小型場(chǎng)高。2015—2018年HP-PRRSV平均免疫抗體合格率為80.85%，抗體水平整體較高，保育豬和生產(chǎn)母豬的抗體水平更理想。但種公豬免疫效果不好，需要對(duì)其加強(qiáng)監(jiān)測(cè)和免疫接種。

3.4 PR

此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖場(chǎng)多采用基因缺失疫苗和滅活苗進(jìn)行免疫，但滅活疫苗免疫效率低，成本高且用量大[11]。監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，PRV gE感染抗體陽性率較高，尤其是母豬群體。因此，應(yīng)按照《國家中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》要求，加強(qiáng)日常監(jiān)測(cè)，及時(shí)淘汰陽性豬，做好PR凈化工作。PRV gB免疫抗體合格率也呈下降趨勢(shì)，說明整體免疫效果不好，需要通過改換其他類型疫苗或者強(qiáng)化免疫程序，以提高抗體水平。此外，還需加強(qiáng)引種檢疫、隔離和凈化工作。羅先等[12]提出引進(jìn)種豬后，需做好隔離檢測(cè)及凈化維持工作，尤其是種公豬和后備種豬，必須逐頭檢測(cè)，淘汰陽性豬；唐小明等[13]研究顯示，中小規(guī)模豬場(chǎng)感染率較高，而引種檢疫不嚴(yán)、免疫程序不合理、生產(chǎn)水平低下是重要原因。因此，種豬是PR凈化的重點(diǎn)，須從源頭進(jìn)行凈化和控制。

此次監(jiān)測(cè)時(shí)間連續(xù)4年，樣品來源真實(shí)，結(jié)果數(shù)據(jù)可靠。從檢測(cè)結(jié)果看，大部分病種免疫抗體水平不高，普遍存在野毒感染。如果病原出現(xiàn)變異或因外部環(huán)境發(fā)生變化而引起應(yīng)激反應(yīng)，免疫效果得不到保障或養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全措施不到位，導(dǎo)致疫病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)就極高，因而應(yīng)采取“養(yǎng)重于防，防重于治”的綜合措施[14]。

4 結(jié)論

本次監(jiān)測(cè)連續(xù)4年從安徽省東部、中部和南部選取12個(gè)生豬養(yǎng)殖場(chǎng)，對(duì)FMD、CSF、HPPRRS、PR等主要豬群疫病病原和血清抗體進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)FMDV和PRV免疫抗體合格率較低并呈逐年下降趨勢(shì)，且存在一定的病毒流行；CSF、HP-PRRS防控效果較好，免疫抗體水平較高，均超過了70%的標(biāo)準(zhǔn)，但種公豬免疫效果相對(duì)較差；小型豬場(chǎng)的主要疫病免疫抗體合格率普遍低于中型豬場(chǎng)，保育豬和育肥豬抗體合格率低于其他生產(chǎn)階段豬群。因此，該地需要加強(qiáng)對(duì)FMD、PR的監(jiān)測(cè)和免疫，重點(diǎn)是小型豬場(chǎng)以及保育豬和育肥豬群；采用科學(xué)防控措施，開展疫病凈化。