莊海旗，劉江琴，鐘 宇，崔 燎，羅 輝（廣東醫(yī)科大學(xué) 1. 廣東天然藥物研究與開發(fā)實驗室；2. 化學(xué)教研室；. 分析中心；4. 海洋醫(yī)藥研究院；5. 湛江市環(huán)北部灣海洋微生物資源研究開發(fā)重點(diǎn)實驗室，廣東湛江 52402）

隆頭魚科(Labridae)是鱸形目隆頭魚亞目的一科，有71屬519余種，分布于全世界熱帶和溫帶海域，是海洋魚類種類數(shù)第二大科或鱸形目中第三大科[1-3]。隆頭魚科魚(簡稱隆頭魚)多見于近岸淺海的海巖或珊瑚礁，為肉食性魚類，主要以無脊椎動物、甲殼類動物、魚類身上寄生物或海藻為食，由于牙齒尖利常以碎貝殼或咬食珊瑚為輔食。中國產(chǎn)隆頭魚類有29屬90余種，分布在我國的南海和東海，是南海常見的經(jīng)濟(jì)魚類。海洋魚類富含多不飽和脂肪酸，尤其富含EPA和DHA等長鏈不飽和脂肪酸[4-5]，隆頭魚常見于湛江水產(chǎn)市場，但有關(guān)其魚體或肌肉脂肪酸組成的研究尚未見有文獻(xiàn)報道。鑒于海洋魚油含有大量人類所需補(bǔ)充的ω-3系必需脂肪酸以及魚油中的DHA和EPA在藥品、保健品及食品中的廣泛應(yīng)用[6-7]，本研究測定了南海海域分布的7種隆頭魚脂肪酸的數(shù)據(jù)，為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供了實驗數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

7種隆頭魚于秋冬季節(jié)分4批次收集于廣東湛江霞山東風(fēng)市場，由廣東海洋大學(xué)陳文河教授協(xié)助鑒定為邵氏豬齒魚Choerodon schoenleinii、黑帶海豬魚Halichoeres nigrescens、斷紋紫胸魚Stethojulis terina、三帶頸鰭魚Iniistius trivittatus、洛神頸鰭魚Iniistius dea、九棘長鰭鸚鯛Pteragogus enneacanthus和紅頸擬隆頭魚Pseudolabrus eoethinus。

24種混合標(biāo)準(zhǔn)脂肪酸甲酯(等質(zhì)量比)美國Sigma公司出品；所有試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

島津GC-2010型氣相色譜(配有GC-workstation工作站；日本島津公司)；AL204 電子天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 魚肉脂肪酸甲酯化[8-9]稱取冷凍干燥后研磨的7 種隆頭魚肉粉50 mg，各加入2 mL 0.5%對硫酸-甲醇溶液60 ℃水浴加熱1 h，完成后于冷水中冷卻，每種樣品試液加入2 mL蒸餾水，然后分2次加入2 mL正己烷，充分混和萃取，靜置分層，取上層清液，再加入適量無水硫酸鈉吸附水分，即得各魚體肌肉脂肪酸甲酯化的樣品溶液，備以氣相色譜分析。

1.3.2 氣相色譜條件[8-9]DB-WAX彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)，程序升溫(120 ℃1 min，15 ℃/min升溫至205 ℃，保持3 min后，5 ℃/min升溫至240 ℃，保持18 min)，載氣：N2，柱壓力100.0 kPa，總流量32.2 mL/min，線速47.1 cm/s，分流比10:1[8-9]。

1.3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 取標(biāo)準(zhǔn)脂肪酸甲酯溶液和各種魚肉脂肪酸甲酯樣品5 μL進(jìn)樣。每種測定脂肪酸的校正面積Ai’=fi·Ai；fi：以C16:0校正因子為1，其它脂肪酸甲酯的校正因子為標(biāo)準(zhǔn)C16:0的峰面積除以其峰面積。試驗數(shù)據(jù)用 Excel 2003和IBM SPSS Statistics 20軟件進(jìn)行處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 24種標(biāo)準(zhǔn)脂肪酸甲酯的保留時間、校正因子及各隆頭魚脂肪酸成分含量測定(圖1、表1)

圖1 隆頭魚肌肉脂肪酸甲酯總離子流色譜圖

表1 24種標(biāo)準(zhǔn)脂肪酸甲酯的保留時間及其校正因子

2.2 7種隆頭魚中脂肪酸含量的測定

用校正峰面積歸一化法[8-9]計算樣品脂肪酸成分相對含量，結(jié)果見表2。7種隆頭魚肌肉中，可確定的脂肪酸有24種，保留時間8.30～28.00 min內(nèi)的脂肪酸異構(gòu)體或揮發(fā)性成分的物質(zhì)峰用∑不確定成分表示，其占總脂肪酸百分比為1.46%～3.53%。實驗中各種隆頭魚脂肪酸成分含量各不相同。隆頭魚肌肉由C14:0、C15:0、C16:0、C17:0、C18:0和C20:0等6種飽和脂肪酸(SFA)組成，其∑SFA為32.43%～54.64%；由C14:1、C16:1、C17:1和C18:1、C20:1等5種組成單不飽和脂肪酸(MUFA)組成，其∑MUFA為 13.45%～26.63%； 由 C16:2、 C18:2、 C18:3(6)、C18:3(3)、C20:2(6)、C20:4(6)(AA)、C20:4(3)、C20:5(3)(EPA)、 C22:4(6)、 C22:5(6)、 C22:5(3)(DPA)和C22:6(DHA)等13種脂肪酸為多不飽和脂肪酸(PUFA)，其∑PUFA為15.42%～36.03%。其中C14:0、C16:0、C16:1、C18:0、C18:1、C20:4(6)(AA)、C20:5(3)(EPA)、C22:4(6)、C22:5(3)(DPA)、C22:6(3)(DHA)等10種脂肪酸占主要成分，占總脂肪酸14.38%～52.61%。

表2 7種隆頭魚脂肪酸含量 (%，n=4)

(接上表)

2.3 系統(tǒng)聚類分析

通過IBM SPSS Statistics 20軟件將所有脂肪酸原始數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，結(jié)果如圖2所示。

圖2 7種隆頭魚科魚脂肪酸的聚類分析樹狀圖

3 討論

3.1 本研究氣相色譜分析的特點(diǎn)

氣相色譜法分析生物體脂肪酸是常用的有效方法。對于生物樣品的柱前處理，本研究相對于液相色譜法的柱前衍生法[10]及文獻(xiàn)氣相色譜的柱前甲酯化法[11]，具有柱前樣品用量少，脂肪酸甲酯化簡單，特異性高等特點(diǎn)，目前尚未見應(yīng)用本法進(jìn)行樣品柱前處理的文獻(xiàn)報道。本研究使用DB-WAX毛細(xì)管柱對脂肪酸有較理想的分離效果，根據(jù)毛細(xì)管柱口徑和不同長鏈脂肪酸甲酯的氣化特性，同時考慮各脂肪酸的分離度、色譜峰塔板數(shù)及其色譜保留時間等各種因素的影響，應(yīng)用本程序升溫法使分析脂肪酸分離達(dá)到優(yōu)化狀態(tài)，并應(yīng)用峰面積校正因子計算可進(jìn)一步獲得更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

3.2 隆頭魚肌肉ω-6系和ω-3系脂肪酸的比率

魚油具有調(diào)節(jié)血脂、防止血液凝固、預(yù)防老年癡呆癥、提高記憶力、抗癌、提高免疫力、預(yù)防和治療糖尿病等功效。這些功效的作用源于其含有大量ω-3脂肪酸[6,12]。有研究結(jié)果表明海洋魚油有較高的ω-3與ω-6比值[13]。目前有關(guān)隆頭魚脂肪酸的文獻(xiàn)報道尚少，Levi等[14]研究了地中海西北部睛斑扁隆頭魚Symphodus ocellatus的脂肪酸組成，與本研究的7種隆頭魚組成基本相似，其ω-3/ω-6比率為2.9。本研究除紅頸擬隆頭魚ω-3/ω-6為4.7外，ω-3系脂肪酸含量(24.67%～37.08%)遠(yuǎn)高于ω-6系脂肪酸(8.47%～16.55%)，但ω-3/ω-6的比率為1.9～3.3，低于曹子豪等[15]報道的曼氏無針烏賊ω-3/ω-6(4.20～4.29)，高于羅永康[16]報道的7 種淡水魚的ω-3/ω-6(0.2～1.9)。經(jīng)常食用隆頭魚可提高人體ω-3脂肪酸的攝入量，有利于平衡體內(nèi)來自于動植物膳食的脂肪酸[10-11]。

3.3 隆頭魚科魚脂肪酸的聚類分析

魚油脂肪酸成分?jǐn)?shù)據(jù)通過相關(guān)軟件處理，可對不同魚種進(jìn)行聚類分析[17-18]。本文的系統(tǒng)聚類分析結(jié)果(圖2)可見：黑帶海豬魚(Ha.N)與三帶頸鰭魚(In.T)脂肪酸成分相似度較大，斷紋紫胸魚(St.T)與九棘長鰭鸚鯛(Pt.E)脂肪酸成分相似度較大，即4種魚可內(nèi)分兩組；邵氏豬齒魚(Ch.S)與洛神頸鰭魚(In.D)相似度較低，但在距離5內(nèi)仍為一組；第3組紅頸擬隆頭魚(Ps.E)的脂肪酸成分與前6種魚的脂肪酸差別較大，故自成一組。隆頭魚種類繁多，是體形較為分化的一個類群[1]，本研究中7魚種有6個屬的魚種，其中三帶頸鰭魚(In.T)與洛神頸鰭魚(In.D)同屬，但聚類分析沒有在同一組，因此本研究的7種隆頭魚的脂肪酸聚類分析與傳統(tǒng)的魚類分類學(xué)的分類無直接關(guān)系。

3.4 隆頭魚脂肪酸的開發(fā)潛力

一般魚油主要功效成分是DHA(二十二碳六烯酸)和EPA(二十碳五烯酸)，以及脂溶性維生素A和維生素D等[19-20]。隆頭科魚中ω-3脂肪酸主要成分集中在C20:5(3)(EPA)和C22:6(3)(DHA)。本研究數(shù)據(jù)中，7種隆頭魚科魚均具有較高的EPA+DHA，兩種脂肪酸總含量為19.80%～35.06%，是較好補(bǔ)充EPA和DHA的食品來源。其中黑帶海豬魚Halichoeres nigrescens、斷紋紫胸魚Stethojulis Terina、三帶頸鰭魚Iniistius trivittatus等3種的EPA+DHA含量分別達(dá)32.90%、30.88%和35.06%，高于文獻(xiàn)報道的被世界營養(yǎng)學(xué)會推薦為三大營養(yǎng)魚類之一的黃鰭金槍魚(DHA25.34%)、藍(lán)鰭金槍(DHA24.1%)、鰹魚(DHA 26.7%)[21-22]，低于黃鰭金槍魚(DHA39.17%)[23]含量。這3種隆頭科魚的魚油是開發(fā)EPA+DHA精制魚油的理想資源，但魚類EPA+DHA的含量可能隨食物鏈、生長時期及環(huán)境的不同而有所差別[24-25]，開發(fā)利用前應(yīng)進(jìn)行必要的檢測。

綜上，本研究測定了7種隆頭魚24種脂肪酸成分，其多不飽和脂肪酸含量高達(dá)33.71%～52.61%，其中ω-3系脂肪酸含量達(dá)24.67%～37.08%，可作為膳食營養(yǎng)補(bǔ)充劑添加到食品中。其中黑帶海豬魚Halichoeres nigrescens、斷紋紫胸魚Stethojulis Terina、三帶頸鰭魚Iniistius trivittatus功能性脂肪酸EPA+DHA含量高達(dá)30%以上，是開發(fā)富含EPA+DHA脂肪酸精制魚油的理想資源；脂肪酸組分聚類分析表明，7種隆頭科魚可分成3組群，但與傳統(tǒng)的魚類分類學(xué)的分類無直接關(guān)系。