黃再?gòu)?qiáng) 朱琳 高明菊 馮光泉 馬小雙 常征

摘 要 目的：比較不同生長(zhǎng)年限三七花的化學(xué)成分類別及人參皂苷含量的差異，探討生長(zhǎng)年限對(duì)三七花品質(zhì)的影響。方法：收集2年生、3年生、4年生三七花樣品各10批，采用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行測(cè)定。色譜柱為Shim-pack GIST C18，流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸水溶液（梯度洗脫），柱溫為30 ℃，流速為0.5 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，進(jìn)樣量為20 μL。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》繪制30批樣品的指紋圖譜并指認(rèn)特征成分，同時(shí)進(jìn)行相似度分析;采用SPSS 22.0軟件對(duì)樣品進(jìn)行聚類分析。采用上述HPLC法對(duì)不同生長(zhǎng)年限三七花共30批樣品中的人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc進(jìn)行含量測(cè)定;采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行質(zhì)量控制分析。結(jié)果：所建指紋圖譜的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均良好;含量測(cè)定方法線性關(guān)系（R 2>0.999）、定量限、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度均良好。通過(guò)指紋圖譜指認(rèn)了不同生長(zhǎng)年限三七花中人參皂苷Re、R1、Rb1、Rc、Rb2、Rb3等6個(gè)共有成分以及3年生三七花樣品中的人參皂苷Rd;2年生、3年生、4年生三七花各10批樣品指紋譜圖在同一年限樣品間比較的平均相似度分別為0.881、0.952、0.945，不同生長(zhǎng)年限樣品之間進(jìn)行比較的相似度也均不低于0.817。30批三七花樣品可聚為4個(gè)類別，第Ⅱ類均為4年生樣品，第Ⅲ類均為3年生樣品，第Ⅰ、Ⅳ類多為2年生樣品以及少量3年生、4年生樣品。2年生樣品中4種人參皂苷成分含量及總含量的RSD為8.90%～21.43%，總皂苷含量為11.65%～17.76%;3年生樣品中上述成分含量及總含量的RSD為6.45%～14.23%，總皂苷含量為15.74%～19.30%;4年生樣品中上述成分含量及總含量的RSD為7.50%～18.86%，總皂苷含量為15.92%～20.16%。質(zhì)量控制分析結(jié)果顯示，2年生樣品主要分布在Ⅱ、Ⅲ類區(qū)域，3年生、4年生樣品主要分布在Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域，人參皂苷成分的含量大小排序?yàn)棰?Ⅱ>Ⅲ。結(jié)論：不同生長(zhǎng)年限三七花的化學(xué)成分類別大體接近，但仍存在一定差異，其中2年生樣品中人參皂苷類成分含量較低、波動(dòng)較大，整體品質(zhì)略差;3年生、4年生樣品中人參皂苷類成分含量更高、波動(dòng)相對(duì)更小，整體品質(zhì)較高且趨于穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞 三七花;生長(zhǎng)年限;高效液相色譜法;指紋圖譜;人參皂苷;含量測(cè)定

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To compare chemical composition types and ginsenoside content of Panax notoginseng flowers with different growing years， and to explore the effect of growing year on the quality of P. notoginseng flowers. METHODS： Each 10 batches of biennial， triennial and quadrennial P. notoginseng flower were collected and determined by HPLC. The determination was performed on Shim-pack GIST C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.05% phosphoric acid solution （gradient elution） at the flow rate of 0.5 mL/min. The column temperature was set at 30 ℃， and the detection wavelength was set at 203 nm. The sample size was 20 μL. Similarity Evaluation System of TCM Chromatogram Fingerprint was used to establish the fingerprint of 30 batches of samples， identify the diagnostic components and analyze the similarity. Cluster analysis was conducted by using SPSS 22.0 software. The contents of ginsenoside Rb1， Rb2， Rb3 and Rc in 30 batches of P. notoginseng flower with different growing years were determined by above HPLC. The quality control analysis was conducted by using SPSS 22.0 software. RESULTS： Established fingerprint showed good precision， stability and reproducibility. There were good linear relationship （R 2>0.999）， quantitative limit， precision， stability， repeatability and accuracy of the content determination method. Six common components as ginsenoside Rb1， Rb2， Rb3 and Rc were identified in P. notoginseng flower with different growing years by fingerprint; ginsenoside Rd was identified in triennial P. notoginseng flower. The similarities of the fingerprints among 10 batches of biennial， triennial and quadrennial P. notoginseng flower were 0.881， 0.952 and 0.945， respectively. The similarity among samples with different growing years was more than 0.817. Thirty batches of P. notoginseng flower could be grouped into 4 categories， the category Ⅱ was quadrennial samples， the category Ⅲ was triennial samples， while the categories Ⅰ and Ⅳ were mostly biennial samples and a small number of triennial and quadrennial samples. RSDs of 4 ginsenosides contents and their total contents in biennial samples were 8.90%-21.43% and total saponin contents were 11.65%-17.76%， respectively. RSDs of 4 ginsenosides contents and their total contents in triennial samples were 6.45%-14.23%， and total saponin contents were 15.74%-19.30%. RSDs of 4 ginsenosides contents and their total contents in quadrennial samples were 7.50%-18.86%， and total saponin contents were 15.92%-20.16%. The results of quality control analysis showed that biennial samples mainly distributed in the areas of Ⅱ and Ⅲ; triennial and quadrennial samples mainly distributed in the areas of Ⅰ and Ⅱ; the order of ginsenosides content was Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ. CONCLUSIONS： Chemical components of P. notoginseng flower with different growing years are generally close in types but there still are some differences， among which the content of ginsenosides in biennial samples is lower， fluctuates more， and the overall quality is slightly poor; the content of ginsenosides in triennial and quadrennial samples is higher， fluctuates less， and the overall quality is higher and tends to be stable.

KEYWORDS? ?Panax notoginseng flowers; Growing year; HPLC; Fingerprint; Ginsenosides; Content determination

三七花是傳統(tǒng)名貴中藥五加科植物三七[Panax notoginseng（Burk.） F. H. Chen]的干燥花蕾，其性味甘涼，具有清熱、平肝、降壓之功效，有較好的藥用價(jià)值和保健作用[1]。三七在第1年生長(zhǎng)期一般不開(kāi)花（偶有出現(xiàn)“夢(mèng)花”），第2年起正常開(kāi)花，目前市場(chǎng)上以2年生、3年生、4年生三七花為主。有關(guān)三七花化學(xué)成分的研究報(bào)道較多，主要集中在人參皂苷Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd等成分的含量測(cè)定[2-3]，也可見(jiàn)三七花與其他五加科人參屬花的鑒別研究[1，4-6]。但關(guān)于不同年限三七花中化學(xué)成分及其質(zhì)量差異的研究報(bào)道較少。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，2年生、3年生三七花在成分類別及其含量上存在較大差異[7]，但研究報(bào)道中三七花樣本量偏小。為了全面系統(tǒng)地研究不同生長(zhǎng)年限三七花在化學(xué)成分類別及人參皂苷含量上的差異，本課題組收集了2年生、3年生、4年生三七花共計(jì)30個(gè)批次的樣品，通過(guò)高效液相色譜法（HPLC）建立其指紋圖譜并進(jìn)行多個(gè)指標(biāo)成分（人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc）的含量測(cè)定，以期綜合比較生長(zhǎng)年限對(duì)三七花品質(zhì)的影響。

1 材料

1.1 儀器

LC-2030型HPLC儀（日本Shimadzu公司）;BP121S型萬(wàn)分之一電子分析天平、BP211D型十萬(wàn)分之一電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）;SQP型電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司];SB-3200DTD型超聲儀（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司）;DFY-500D型粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）。

1.2 藥品與試劑

2年生、3年生、4年生三七花樣品各10批（均為2018年6-10月采收的三七花）和加樣回收率試驗(yàn)用樣品1批（批號(hào)：WS-1，于2018年2月采收的三七花），均購(gòu)自文山市三七國(guó)際交易中心，產(chǎn)地主要為文山當(dāng)?shù)丶爸苓叺貐^(qū)。樣品經(jīng)云南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院文國(guó)松副研究員、文山學(xué)院三七學(xué)院黃再?gòu)?qiáng)助教鑒定為五加科人參屬三七[P. notoginseng（Burk）F. H. Chen]的干燥花蕾，并在參考采樣記錄的基礎(chǔ)上，通過(guò)花蕾的大小、顏色等性狀確定了其生長(zhǎng)年限。2018年6-10月采收的30批三七花樣品信息詳見(jiàn)表1。

人參皂苷Re（批號(hào)：MUST-18032502，純度：≥98.00%）、人參皂苷R1（批號(hào)：MUST-14042810，純度：≥99.52%）、人參皂苷Rd（批號(hào)：MUST-18032202，純度：≥98.00%）、人參皂苷Rb2（批號(hào)：MUST-18032302，純度：≥99.32%）、人參皂苷Rb3（批號(hào)：MUST-17042812，純度：≥99.65%）、人參皂苷Rc（批號(hào)：MUST-18042803，純度：≥98.00%）等對(duì)照品均購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司;人參皂苷Rb1對(duì)照品（北京世紀(jì)奧科生物科技有限公司，批號(hào)：C54H92023，純度：≥98.00%）;乙腈、磷酸均為色譜純，乙醇為分析純，水為超純水。

2 不同年限三七花HPLC指紋圖譜研究

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取人參皂苷Re、R1、Rd、Rc、Rb1、Rb2、Rb3對(duì)照品各適量，加50%乙醇溶解制成每1 mL分別含上述成分0.51、0.45、0.41、0.87、0.81、0.75、0.84 mg的單一對(duì)照品溶液，4 ℃低溫保存，備用。

2.1.2 供試品溶液 將三七花樣品粉碎成粗粉，取樣品粉末1 g，置于150 mL錐形瓶中，加入50%乙醇100 mL，稱定質(zhì)量，超聲（頻率：40 kHz，功率：200 W）提取40 min，冷卻至室溫后，再次稱定質(zhì)量，加50%乙醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，以16層錐形濾紙（底部塞有脫脂棉）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液，于4 ℃保存，備用。

2.2 色譜條件

色譜柱：Shim-pack GIST C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）;流動(dòng)相：乙腈（A）-0.05%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0 min，3%A;8 min，10%A;20 min，25%A;30 min，36%A;60 min，36%A）;柱溫：30 ℃;流速：0.5 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm;進(jìn)樣量：20 ?L。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下人參皂苷Rb3單一對(duì)照品溶液（該成分在三七花中含量相對(duì)較高，故用來(lái)進(jìn)行方法學(xué)考察，下同）適量，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄色譜圖。結(jié)果，各色譜峰峰面積的RSD≤0.35%、保留時(shí)間的RSD≤0.38%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（批號(hào)：S3-1）適量，分別于室溫下放置0、8、16、24 h時(shí)，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，在26～45 min保留時(shí)間內(nèi)（這一時(shí)間段色譜圖上特征峰出峰較多，下同），各色譜峰峰面積的RSD≤0.35%、保留時(shí)間的RSD≤0.30%（n=4）;同時(shí)，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版A）》進(jìn)行相似度分析，結(jié)果不同時(shí)間點(diǎn)各色譜圖的相似度≥0.97，表明供試品溶液在室溫條件下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取三七花樣品粉末（批號(hào)：S3-1）1 g，平行6份，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，在26～45 min保留時(shí)間內(nèi)，各色譜峰峰面積的RSD≤0.30%、保留時(shí)間的RSD≤0.22%（n=6）;同時(shí)，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版A）》進(jìn)行相似度分析，結(jié)果不同樣品各色譜圖的相似度≥0.98，表明本方法重復(fù)性良好。

2.4 不同年限三七花 HPLC指紋圖譜生成與相似度分析

取不同生長(zhǎng)年限的30批三七花樣品粉末各1 g，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。將不同批次三七花樣品的色譜圖AIA格式文件導(dǎo)出，依次全譜導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件（2012版A）》中，生成指紋圖譜的共有模式（R），即對(duì)照指紋圖譜（見(jiàn)圖1），再經(jīng)軟件處理后建立不同生長(zhǎng)年限三七花各10批樣品的疊加指紋圖譜（見(jiàn)圖2），同時(shí)進(jìn)行相似度分析。

相似度分析結(jié)果顯示，2年生、3年生、4年生三七花樣品的指紋譜圖在同年限10批間進(jìn)行比較的相似度分別≥0.823、≥0.847、≥0.830，平均相似度分別為0.881、0.952、0.945。這表明，同一生長(zhǎng)年限的三七花樣品之間的化學(xué)成分類別較為一致，相對(duì)較穩(wěn)定。不同生長(zhǎng)年限樣品之間進(jìn)行比較的結(jié)果顯示，2年生與3年生樣品之間相似度≥0.825，2年生與4年生樣品之間相似度≥0.817，3年生與4年生樣品之間相似度≥0.865。這表明，不同生長(zhǎng)年限三七花樣品中化學(xué)成分類別大體接近，但仍存在一定差異。

2.5 不同生長(zhǎng)年限三七花樣品HPLC指紋圖譜特征峰的指認(rèn)

根據(jù)采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版A）》對(duì)不同生長(zhǎng)年限三七花各10批樣品的色譜圖處理分析后生成的各生長(zhǎng)年限三七花樣品的對(duì)照指紋圖譜（見(jiàn)圖1），確認(rèn)了各生長(zhǎng)年限三七花樣品的36個(gè)共有色譜峰，并通過(guò)比各單一對(duì)照品溶液的主峰保留時(shí)間，指認(rèn)了不同生長(zhǎng)年限三七花中共有的人參皂苷Re、R1、Rb1、Rc、Rb2、Rb3等6個(gè)共有成分以及3年生三七花樣品中的人參皂苷Rd。

由圖1可見(jiàn)，2年生三七花樣品中大部分色譜峰面積都較3年生、4年生三七花樣品小;2年生、4年生三七花色譜圖中都有很小的5號(hào)峰，而在3年生三七花中未見(jiàn)該色峰;與3年生三七花比較，4年生三七花色譜圖中6、7、18、32、37號(hào)峰有變小的趨勢(shì)。各年限三七花的成分種類較為一致，而各成分峰面積大小存在明顯差異，3年生、4年生三七花樣品的對(duì)照指紋圖譜中色譜峰數(shù)目較多、峰面積較大，而2年生三七花樣品對(duì)照指紋圖譜中色譜峰數(shù)目略少、峰面積較小。根據(jù)對(duì)照指紋圖譜可以初步認(rèn)為，3年生、4年生三七花樣品中各成分含量相對(duì)較高，2年生樣品各成分含量略低。

2.6 不同生長(zhǎng)年限三七花樣品指紋圖譜的聚類分析

采用SPSS 22.0軟件對(duì)不同生長(zhǎng)年限三七花樣品的原始指紋圖譜進(jìn)行聚類分析，以平方歐式距離作為樣品的測(cè)度，以Ward 連接法進(jìn)行聚類，結(jié)果見(jiàn)圖3。聚類分析結(jié)果顯示，30批三七花樣品可聚為4個(gè)類別，其中第Ⅱ類均為4年生三七花樣品，第Ⅲ類均為3年生三七花樣品，而第Ⅰ、Ⅳ類多為2年生三七花樣品以及少量3年生、4年生三七花樣品。

3 不同生長(zhǎng)年限三七花樣品中4種人參皂苷的含量測(cè)定

基于30批三七花樣品的指紋圖譜研究結(jié)果及已有相關(guān)對(duì)照品，本研究選擇色譜峰面積相對(duì)較大、含量相對(duì)較高的人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc等4種成分進(jìn)行含量測(cè)定，比較不同生長(zhǎng)年限三七花樣品中上述成分的含量差異。

3.1 溶液的制備

3.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc對(duì)照品各適量，加50%乙醇溶解制成每1 mL分別含上述成分0.551、0.475、0.510、0.530 mg的單一對(duì)照品溶液，4 ℃低溫保存，備用。

3.1.2 供試品溶液 按照“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于4 ℃保存，備用。

3.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

采用“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。取“3.1.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：S3-1）進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖（見(jiàn)圖4），并與“3.1.1”項(xiàng)下單一對(duì)照品溶液和空白溶劑色譜圖（圖略）進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果，理論板數(shù)以人參皂苷Rb3計(jì)不低于6 000，4種待測(cè)人參皂苷的色譜峰分離度均大于1.5，空白溶劑無(wú)干擾，表明本色譜條件系統(tǒng)適用性良好。

3.3 方法學(xué)考察

3.3.1 線性關(guān)系與定量限考察 取“3.1.1”項(xiàng)下人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc各單一對(duì)照品溶液，經(jīng)0.45 ?m 微孔濾膜濾過(guò)，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣4、8、12、16、20、24、28 ?L，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（x，?g）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果，上述4種人參皂苷在相應(yīng)進(jìn)樣量范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（R 2>0.999）。各待測(cè)成分的回歸方程及線性范圍見(jiàn)表2。

3.3.2 精密度試驗(yàn) 取“3.1.1”項(xiàng)下人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc各單一對(duì)照品溶液，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定5次，記錄色譜圖。結(jié)果，上述待測(cè)成分峰面積的RSD分別為0.22%、0.23%、0.18%、0.24%（n=5），表明儀器精密度良好。

3.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取三七花供試品溶液（批號(hào)：S3-1）適量，經(jīng)0.45 ?m微孔濾膜濾過(guò)后，分別在室溫下放置0、8、16、24 h時(shí)，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc峰面積的RSD分別為0.21%、0.25%、0.15%、0.26%（n=4），表明供試品溶液在室溫條件下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取三七花樣品粉末（批號(hào)：S3-1）1 g，平行6份，按“3.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，經(jīng)0.45 ?m微孔濾膜濾過(guò)后，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc的含量。結(jié)果，上述待測(cè)成分的平均含量分別為3.56%、5.01%、7.64%、4.33%，RSD分別為0.22%、0.23%、0.16%、0.24%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

3.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的三七花樣品粉末（批號(hào)：WS-1，人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc的含量經(jīng)測(cè)定分別為1.77%、2.50%、3.81%、2.15%）0.1 g，平行6份，分別按質(zhì)量比為1 ∶ 1加入人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc各對(duì)照品，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，經(jīng)0.45 ?m微孔濾膜濾過(guò)后，再按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算上述待測(cè)成分的含量并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，上述待測(cè)成分的平均加樣回收率分別為98.85%、98.87%、99.83%、100.74%（RSD均小于4%，n=6），表明該方法準(zhǔn)確性良好，詳見(jiàn)表3。

3.4 樣品含量測(cè)定

取30批三七花樣品粉末各1 g，按“3.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，經(jīng)0.45 ?m微孔濾膜濾過(guò)后，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc的含量及其總含量。平行3份操作，取平均值，結(jié)果見(jiàn)表4。

由表4可見(jiàn)，2年生三七花樣品中4種人參皂苷成分含量及總含量的RSD為8.90%～21.43%，總皂苷含量為11.65%～17.76%;3年生三七花樣品中上述成分含量及總含量的RSD為6.45%～14.23%，總皂苷含量為15.74%～19.30%;4年生三七花樣品中上述成分含量及總含量的RSD為7.50%～18.86%，總皂苷含量為15.92%～20.16%。結(jié)果表明，與2年生三七花比較，3年生、4年生樣品中4種人參皂苷（Rb1、Rb2、Rb3、Rc）的總含量更高，含量波動(dòng)相對(duì)更小，提示三七花生長(zhǎng)至第3、4年時(shí)各成分逐漸趨于穩(wěn)定。

3.5 不同生長(zhǎng)年限三七花樣品多指標(biāo)成分含量的質(zhì)量控制分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)不同生長(zhǎng)年限三七花共30批樣品中人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc的總含量進(jìn)行質(zhì)量控制分析，并根據(jù)分析結(jié)果將30批樣品分為3類區(qū)域，結(jié)果見(jiàn)圖5。結(jié)果顯示，2年生三七花樣品主要分布在Ⅱ、Ⅲ類區(qū)域，3年生、4年生三七花樣品主要分布在Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域，人參皂苷成分的含量大小排序?yàn)棰?Ⅱ>Ⅲ，表明3年生、4年生三七花的品質(zhì)相對(duì)較高，2年三七花品質(zhì)略差。

4 討論

本研究建立了不同生長(zhǎng)年限三七花的HPLC指紋圖譜，并選擇含量相對(duì)較高的人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc為指標(biāo)，建立了同時(shí)測(cè)定上述4種成分的含量測(cè)定方法，以比較研究了不同生長(zhǎng)年限三七花樣品化學(xué)成分類別及含量，從而評(píng)價(jià)其品質(zhì)差異。相比文獻(xiàn)方法[6]，本研究建立的三七花HPLC指紋圖譜分析時(shí)間縮短，且色譜峰峰形明顯改善、色譜峰數(shù)明顯增加，能更為完整地體現(xiàn)三七花的化學(xué)成分的整體特征;同時(shí)，所建立的含量測(cè)定方法能同時(shí)測(cè)定三七花中人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc等4種成分，方法簡(jiǎn)便可行，精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性均良好。

綜合比較不同生長(zhǎng)年限三七花樣品的HPLC指紋圖譜和4種人參皂苷（Rb1、Rb2、Rb3、Rc）的含量測(cè)定結(jié)果后發(fā)現(xiàn)，各生長(zhǎng)年限樣品的化學(xué)成分類別大體接近但仍存在一定差異，其中2年生樣品的人參皂苷類成分含量較低、波動(dòng)較大，整體品質(zhì)略差;而相對(duì)而言，3年生、4年生樣品的人參皂苷類成分含量更高、波動(dòng)更小，整體品質(zhì)較高、趨于穩(wěn)定。筆者推測(cè)，生長(zhǎng)年限對(duì)三七花成分含量的影響可能是由于在2年生長(zhǎng)期時(shí)，三七的植物吸收和代謝系統(tǒng)才基本形成，此時(shí)植物需要大量吸收營(yíng)養(yǎng)成分以促進(jìn)生長(zhǎng)，且生長(zhǎng)主要集中在根部，因此提供給花、莖、葉的養(yǎng)分較少;而到了第3、4年生長(zhǎng)期時(shí)，三七根部生長(zhǎng)趨勢(shì)減慢，植物代謝系統(tǒng)較為發(fā)達(dá)，提供給三七花、莖、葉的養(yǎng)分增加，故其相應(yīng)化學(xué)成分含量逐漸增加[8]。

由于本研究受項(xiàng)目條件等限制，本課題組獲得的對(duì)照品類別有限，故本次試驗(yàn)僅指認(rèn)了不同生長(zhǎng)年限三七花樣品中人參皂苷Re、R1、Rb1、Rc、Rb2、Rb3等6個(gè)共有成分以及3年生三七花樣品中的人參皂苷Rd，并對(duì)含量相對(duì)較高的人參皂苷成分Rb1、Rb2、Rb3、Rc進(jìn)行了定量檢測(cè)，而色譜圖中峰面積最大的16、18、25號(hào)等色譜峰尚未能指認(rèn)，也未能進(jìn)行含量測(cè)定。因此，在下一步研究中，本課題組擬通過(guò)擴(kuò)大對(duì)照品來(lái)源等手段，進(jìn)一步對(duì)16、18、25號(hào)等色譜峰進(jìn)行指認(rèn)，并增加相應(yīng)含量測(cè)定指標(biāo)，以深入研究和綜合評(píng)價(jià)不同生長(zhǎng)年限三七花的品質(zhì)。

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（收稿日期：2019-04-20 修回日期：2020-03-10）

（編輯：段思怡）