王淑靜 婁玉鈐

【摘 要】目的：研究配伍赤芍桂枝湯對制馬錢子在風(fēng)濕病治療中抗炎鎮(zhèn)痛的影響。方法：將赤芍桂枝湯與不同比例的制馬錢子相配伍后，進(jìn)行小鼠的抗炎與鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)?？寡讓?shí)驗(yàn)采用小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)，通過測定各組吸光度值進(jìn)行比較;鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)采用熱板法，通過末次給藥后1 h和2 h分別測定各組小鼠痛閾值進(jìn)行比較。結(jié)果：通過對毛細(xì)血管通透性的影響研究表明，13.41%馬錢子組可以明顯增強(qiáng)制馬錢子的抗炎作用（P ﹤0.05），7.19%馬錢子組與3.72%馬錢子組有增強(qiáng)馬錢子抗炎作用的趨勢（P > 0.05）。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中，各配伍組與制馬錢子組相比，都可以提高其痛閾，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。結(jié)論：配伍赤芍桂枝湯不能明顯增強(qiáng)制馬錢子的鎮(zhèn)痛作用，僅13.41%馬錢子組能明顯增強(qiáng)制馬錢子的抗炎作用。

【關(guān)鍵詞】 赤芍桂枝湯;制馬錢子;風(fēng)濕病;抗炎;鎮(zhèn)痛;實(shí)驗(yàn)研究

【ABSTRACT】Objective：To study the anti-inflammatory and analgesic effects of Semen Strychni Praeparata combined with Chishao Guizhi Tang（赤芍桂枝湯）in the treatment of rheumatism.Methods：The anti-inflammatory and analgesic experiments of mice were carried out after the mixture of Chishao Guizhi Tang and strychnine in different proportion.In the anti-inflammatory experiment，the permeability of capillaries in the abdominal cavity of mice was tested，and the absorbance values of each group were compared.In the analgesic experiment，the hot plate method was used，and the pain thresholds of each group were measured at 1 h and 2 h after the last administration.Results：Study on the capillary permeability showed that 13.41% of Semen Strychni Praeparata could significantly enhance the anti-inflammatory effect，7.19% and 3.72% of Semen Strychni Praeparata could enhance the anti-inflammatory effect，but the difference was not statistically significant（P > 0.05）.In the analgesic experiment，the pain threshold of each compatibility group was higher than that of the Semen Strychni Praeparata group，but the difference was not statistically significant（P > 0.05）.Conclusion：Semen Strychni Praeparata can not significantly enhance the analgesic effect after compatibility，only 13.41% of Semen Strychni Praeparata can significantly enhance the anti-inflammatory effect.

【Keywords】 Chishao Guizhi Tang（赤芍桂枝湯）;Semen Strychni Praeparata;rheumatism;anti-inflammation;analgesia;experimental study

馬錢子[1]藥性猛烈，走竄力強(qiáng)，具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛效果，臨床上用于治療風(fēng)濕頑痹效果顯著。本課題組前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)，配伍赤芍桂枝湯能夠減輕制馬錢子的毒性[2-3]。因此，本次實(shí)驗(yàn)通過研究配伍赤芍桂枝湯對制馬錢子抗炎與鎮(zhèn)痛作用的影響，為臨床更安全合理有效地運(yùn)用制馬錢子提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥 品

1.1.1 制馬錢子粉 實(shí)驗(yàn)所用馬錢子藥材統(tǒng)一購于河南省藥材公司，按照《中華人民共和國藥典》2010版一部馬錢子項(xiàng)下規(guī)定的砂燙法炮制成制馬錢子，粉碎10 min，過200目篩;制馬錢子用高效液相色譜儀測得士的寧含量為14.43 mg·g-1，馬錢子堿4.79 mg·g-1[4-9]。

1.1.2 赤芍桂枝湯浸膏粉末 藥物飲片統(tǒng)一由河南風(fēng)濕病醫(yī)院提供，赤芍桂枝湯組成：桂枝9 g、赤芍9 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗9 g。將以上藥物按比例放入煎藥機(jī)中，加10倍量水，煎煮1 h，濃縮后干燥粉碎即得，后過200目篩，1 g干浸膏粉相當(dāng)于原生藥5.9 g。水浴滅菌30 min，低溫冷藏，實(shí)驗(yàn)時(shí)與制馬錢子按配伍比例制成混懸液。

以上藥物均由河南風(fēng)濕病醫(yī)院提供，由河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院劉雅敏統(tǒng)一制備，打粉，干燥，密閉使用。另外考慮樣品制備損耗等因素，按1 g干浸膏相當(dāng)于原生藥6 g計(jì)算。

1.1.3 制馬錢子與赤芍桂枝湯配伍比例 本實(shí)驗(yàn)所選取的制馬錢子與赤芍桂枝湯配伍比例依據(jù)是婁多峰教授和婁玉鈐教授在長期的臨床實(shí)踐中總結(jié)出的用藥經(jīng)驗(yàn)，在臨床中業(yè)已使用并證明有效。3個(gè)劑量組分別為13.41%馬錢子組（馬錢子占赤芍桂枝湯與制馬錢子混合物的百分比為13.41%）、7.19%馬錢子組、3.72%馬錢子組。

1.2 動 物 選取SPF級昆明小白鼠180只，體質(zhì)量18～22 g，雌雄兼用，購自河南省實(shí)驗(yàn)動物中心，實(shí)驗(yàn)動物許可證號SCXK（豫）2012-0002。動物質(zhì)量合格證號：No.41003100000519，No.41003100000600，No.41003100000619，No.41003100000626，No.41003100000638，No.41003100000659。統(tǒng)一在河南省藥檢所動物實(shí)驗(yàn)中心飼養(yǎng)并實(shí)驗(yàn)，條形飼料，每籠5只，單籠喂養(yǎng)，自由飲水。實(shí)驗(yàn)室溫度（23.0±2.0）℃，濕度50%～65%。

2 方 法

抗炎（毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)）與鎮(zhèn)痛（熱板法）實(shí)驗(yàn)，分別獨(dú)立進(jìn)行。制馬錢子最小100%死亡量（Dm）為450 mg·kg-1，最大0不死量（Dn）為200 mg·kg-1。

2.1 抗炎實(shí)驗(yàn)

2.1.1 實(shí)驗(yàn)分組 SPF級昆明小白鼠90只隨機(jī)分為空白對照組、陽性對照組、制馬錢子組、13.41%馬錢子組、7.19%馬錢子組、3.72%馬錢子組，每組15只。

2.1.2 給藥方法 空白對照組給予蒸餾水，陽性對照組給予布洛芬緩釋膠囊，制馬錢子組及其余3組按照比例各自配成混懸液（按臨床用量的換算值，臨床應(yīng)用馬錢子粉入丸散劑為0.3～0.6 g，20 g小鼠與70 kg成人的比例為1∶387.9，按最小量0.3 g給藥，得出小鼠的臨床用藥為38.67 mg·kg-1，其余各配伍組按制馬錢子的比例確定給藥劑量）。給藥量按每10 g體質(zhì)量給藥0.3 mL，連續(xù)灌胃5 d，每日1次，統(tǒng)一每日上午8：00～9：00定時(shí)給藥。

2.1.3 實(shí)驗(yàn)操作 第5天灌胃給藥30 min后，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的依文思蘭溶液0.1 mL·（10 g）-1注射至小鼠尾靜脈，然后將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6%的冰醋酸溶液0.1 mL·（10 g）-1注射至小鼠腹腔，20 min后脫頸椎處死;將5 mL生理鹽水注射至腹腔后，輕揉小鼠腹部，使腹腔內(nèi)染料充分溶于生理鹽水中，并混合均勻;輕輕剪開小鼠腹部肌肉，用吸管吸出小鼠腹部洗滌液4 mL，加生理鹽水稀釋至10 mL，放至離心機(jī)，以3000 r·min-1離心15 min，離心半徑15 cm;取上清液在紫外分光光度計(jì)上595 nm比色測定各吸光度。

2.2 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 將YLS-6A型熱板測痛儀，自動控溫在（55±0.5）℃，將雌性小鼠置于恒溫盒內(nèi)，按小鼠舔后足或者跳躍的時(shí)間長度測定痛閾值，選取痛閾值在5～30 s的雌性小鼠90只。隨機(jī)分為空白對照組、陽性對照組、制馬錢子組、13.41%馬錢子組、7.19%馬錢子組、3.72%馬錢子組，每組15只。

2.2.2 給藥方法 同2.1.2。

2.2.3 實(shí)驗(yàn)操作 于第5天末次灌胃給藥1 h、2 h后，測定痛閾值。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD分析，方差不齊時(shí)采用Dunnett's方法分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 各組抗炎作用比較 吸光度表示液體的渾濁度，吸光度越大表示越渾濁，抗炎能力越小。本次實(shí)驗(yàn)過程中由于小鼠尾靜脈注射難度較大，后又經(jīng)取舍各組均留10只小鼠作為統(tǒng)計(jì)。與空白對照組比較，除制馬錢子組外，制馬錢子各配伍組均能降低小鼠的毛細(xì)血管的吸光度，但效果都不及陽性對照組。與制馬錢子組比較，只有13.41%馬錢子組能顯著降低小鼠的毛細(xì)血管的吸光度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;各配伍組組間比較，小鼠的毛細(xì)血管吸光度隨馬錢子占比增多而降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

3.2 各組鎮(zhèn)痛作用比較 與空白對照組比較，13.41%馬錢子組在給藥1 h后能顯著提高小鼠的痛閾，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;7.19%馬錢子組與3.72%馬錢子組在給藥2 h后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。各配伍組與制馬錢子組比較，都有提高其痛閾的趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

4 討 論

桂枝湯是《傷寒論》群方之首，由桂枝、芍藥、甘草、生姜、大棗組成，功效是解肌發(fā)表，調(diào)和營衛(wèi)。關(guān)于桂枝湯之芍藥，歷代醫(yī)家眾說紛紜。赤芍、白芍始分于梁代，多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為“白補(bǔ)而赤瀉、白收而赤散”[10];西醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，小鼠腹腔注射赤芍提取物芍藥苷1 g·kg-1，能減少自發(fā)活動，赤芍乙醇浸膏可抑制士的寧引起的小鼠痙攣[11-13];赤芍中赤芍總苷[14]能顯著增加小鼠耳廓毛細(xì)血管開放量，其中7.5 mg·kg-1，25 mg·kg-1作用比較明顯。樂娜等[15]研究表明，赤芍對急性血瘀證大鼠血液流變學(xué)的作用優(yōu)于白芍，這與其芍藥苷含量較多，而芍藥苷有較強(qiáng)改善血液流變學(xué)異常和保護(hù)血管內(nèi)皮功能作用有關(guān)。賈敏等[16]指出，赤芍總苷在10-4～10-3 g·L-1劑量區(qū)間范圍內(nèi)對用K+、PE及5-HT預(yù)收縮的血管均有顯著舒張作用，而白芍總苷的舒血管作用不明顯。

從本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，抗炎實(shí)驗(yàn)中，13.41%馬錢子組能明顯增強(qiáng)制馬錢子的抗炎作用，7.19%馬錢子組與3.72%馬錢子組有增強(qiáng)馬錢子抗炎作用的趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中，各配伍組與制馬錢子組比較，都有提高痛閾的趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。婁多峰教授和婁玉鈐教授致力于風(fēng)濕病的治療與研究，臨床上，用桂枝湯與制馬錢子配伍治療風(fēng)濕病取得較好的效果。因此，本課題組圍繞制馬錢子與桂枝湯加減進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)制馬錢子與不同比例的赤芍桂枝湯配伍能不同程度地增強(qiáng)其抗炎與鎮(zhèn)痛作用，為臨床更好地運(yùn)用制馬錢子與赤芍桂枝湯配伍提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但其中的作用機(jī)制還需進(jìn)一步更深層次的研究。

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收稿日期：2020-01-20;修回日期：2020-03-10