童 偉，陳登奕，陳俊文，彭 瑩，李月紅

（湖北醫(yī)藥學院附屬襄陽市第一人民醫(yī)院檢驗科，湖北襄陽 441000）

2019年12月以來，湖北省武漢市部分醫(yī)院陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了多例有華南海鮮市場暴露史的不明原因肺炎病例[1]，并在隨后的1個多月內迅速蔓延至全國?！霸绨l(fā)現(xiàn)、早隔離、早診斷、早治療”是目前應對新型冠狀病毒的最有效手段，臨床對于新冠肺炎的診斷主要依據患者的臨床表現(xiàn)、流行病學史、影像學檢查和實驗室檢查[2]。2020年3月3日國家衛(wèi)健委發(fā)布了《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》，第一次將2019-nCoV特異性抗體檢測納入臨床確診標準，同時國家藥監(jiān)局也應急審批了廣州萬孚（膠體金試紙條）、英諾特（唐山）、博奧塞斯（重慶）和廈門萬泰（化學發(fā)光法）四家企業(yè)的注冊申請，本研究選取了廣州萬孚的膠體金法和廈門萬泰的化學發(fā)光法兩種不同的2019-nCoV總抗體檢測系統(tǒng)，從靈敏度、特異度等方面進行評價，并比較各種系統(tǒng)的優(yōu)勢和缺點，為臨床選取合適的檢測策略提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象 根據《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第六版）》標準，選取2020年2月5日～25日我院收治的新型冠狀病毒肺炎確診病例和疑似病例（含臨床確診病例）81例，同時選取38例體檢人群作為健康對照組。根據兩次以上2019-nCoV核酸檢測結果，將病例分為確診病例組28例，女性11例，男性17例，年齡28～81歲，平均年齡（53.4±21.3）歲，兩次以上核酸結果陽性，均為發(fā)病7日以上；疑似病例組53例，女性25例，男性28例，年齡35～67歲，平均年齡（55.6±14.7）歲，有明確的流行病學接觸史及典型的臨床癥狀和肺部影像學特征，但兩次核酸結果陰性，均為發(fā)病7日以上；健康對照組38例，無明確的流行病學接觸史及典型的臨床癥狀和肺部影像學特征，且核酸結果陰性。

1.2 試劑和儀器

1.2.1 試劑：新型冠狀病毒（2019-nCoV）抗體（IgG+IgM）檢測試劑盒（廣州萬孚），樣本緩沖液（廣州萬孚），2019-nCoV總抗體（IgG+IgM）檢測試劑盒（廈門萬泰）。

1.2.2 儀器：低速離心機（安徽中佳），生物安全柜（山東新華），Caris200全自動化學發(fā)光分析儀（北京萬泰）。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣本收集與處理：采集所有研究對象靜脈血5ml，置于含分離膠的黃頭真空采血管內，靜置20min,于生物安全柜內2 500g離心10min,靜置30min，取血清備用。

1.3.2 膠體金法測定：采用新冠病毒抗體（IgG+IgM）檢測試劑盒按操作說明書進行操作，該方法采用免疫層析技術原理，應用捕獲法檢測人血清抗體。

1.3.3 化學發(fā)光法測定：使用Caris200全自動化學發(fā)光分析儀采用新冠病毒總抗體（IgG+IgM）檢測試劑盒進行檢測，檢測前已做好校準，該方法采用雙抗體夾心法，運用吖啶酯化學發(fā)光原理檢測。測定儀根據RLU及內置校準曲線自動計算出S/CO值。樣本S/CO值＜1.0時為陰性，≥1.0時視為抗體有反應性。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS15.0進行統(tǒng)計學分析，疑似病例組數據使用配對資料χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 診斷特異度評價 分別用膠體金法和化學發(fā)光法檢測38例陰性對照組血清中2019-nCoV總抗體，膠體金法37例為陰性，1例弱陽性，診斷特異度為97.4%；化學發(fā)光法38例都為陰性，診斷特異度為100%。膠體金為弱陽性的一例患者無任何新冠病毒感染的臨床表現(xiàn)，進而對該病例行影像學檢查，CT顯示兩肺清晰可見。詢問既往史得知其患有類風濕，加查類風濕因子為陽性，考慮可能由于類風濕因子升高導致膠體金法檢測“假陽性”或“弱陽性”。

2.2 診斷敏感度評價 分別用膠體金法和化學發(fā)光法檢測28例確診病例組血清中2019-nCoV總抗體，兩種檢測方法全部陽性，即診斷敏感度為100%。

2.3 兩種方法在疑似病例診斷中的比較 分別用膠體金法和化學發(fā)光法檢測53例疑似病例組血清中2019-nCoV總抗體，結果詳見表1?；瘜W發(fā)光法和膠體金法在檢測疑似病例時兩種方法差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.78，P＞0.05）。疑似病例組有兩例患者血清中2019-nCoV總抗體用膠體金法檢測為弱陽性，而化學發(fā)光法均顯示陰性，經醫(yī)院專家組會診討論，結合影像學和血細胞分析結果，不支持新型冠狀病毒肺炎，考慮兩例為“假陽性”。膠體金法作為經典的免疫學定性檢測方法，通過肉眼觀察顏色來判斷陰陽性，為了保證較高的敏感度，彌補核酸檢測的假陰性率高的問題，有可能調低了檢測限的臨界值（cut-off值），或者因為某些原因檢測到其它無活性的病毒分子片段產生交叉反應，從而造成“假陽性”或“弱陽性”的結果。

3 討論

2019-nCoV引發(fā)的肺炎疫情已經被世界衛(wèi)生組織定性為世界大流行。目前2019-nCoV病原學檢測方法主要包括病毒核酸檢測和血清抗體檢測，核酸檢測主要采用實時熒光RT-PCR方法[3]檢測鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等呼吸道中的病毒RNA。血清抗體檢測通常檢測患者血清或血漿樣本中的IgM，IgG抗體或特異性的總抗體[4]。一般情況下，IgM是初次免疫應答最早出現(xiàn)的抗體，但持續(xù)時間不長，是近期感染的標志物。IgG是再次免疫應答產生的主要抗體，出現(xiàn)較晚，但持續(xù)時間長，且IgG滴度升高4倍以上可以作為再次感染的標志。本研究采用的特異性總抗體包括了IgM和IgG在內的全部新冠病毒特異性抗體，既具有IgM抗體檢測早期診斷新型冠狀病毒感染的優(yōu)勢，又具有檢測IgG抗體既往感染（包括處于恢復期IgM下降的患者）的特點。

本研究表明，膠體金法和化學發(fā)光法在檢測2019-nCoV總抗體時靈敏度和特異度都能夠達到臨床要求，對疑似病例的診斷無顯著差異，在應用價值上各有優(yōu)缺點。膠體金法檢測不需要設備，方便快捷，適合于基層醫(yī)療機構和社區(qū)進行篩查試驗，但是結果無法定量，對于弱陽性的結果靠肉眼判斷比較困難，易受類風濕因子、異嗜性抗體、補體等干擾物質干擾，容易產生“假陽性”結果。因此遇到“弱陽性”結果需要更換檢測方法復查?；瘜W發(fā)光法檢測2019-nCoV抗體可以采用接收機工作特征（Receiver Operating characteristic,ROC）曲線確定陽性判斷值[5]，做到相對定量，而且使用大型自動化儀器進行檢測，操作安全，高通量，結果可靠性強，因此更適合綜合性醫(yī)療機構進行大批量檢測或體檢機構進行大規(guī)模篩查。但對單個樣本檢測時間一般大于30min，不適合特殊場合的快檢需求。

由于本研究病例數量有限，可能對兩種方法的應用評價還不全面，需要進一步收集更多相關病例資料。同時對比的兩種方法均為免疫學檢測方法檢測患者血清中抗體的水平，而抗體的產生都有窗口期，此時免疫學方法就無法對其進行有效檢測。因此抗體檢測對核酸檢測容易漏檢的問題是很好的補充，將在新型冠狀病毒肺炎的診斷、治療監(jiān)測和病程轉歸等方面提供更多的臨床數據[6]。