李智超 郭夏 王石 尹微

華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬武漢兒童醫(yī)院1風濕免疫科，2檢驗科，3新生兒內科（武漢430000）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種涉及多系統(tǒng)和臟器自身免疫性疾?。?］。其病因尚未明確，可能與遺傳因素、感染、激素水平、環(huán)境因素、藥物等多種因素相關［2］?；颊叩呐R床表現多樣復雜，且可隨病情變化呈現病情輕重交替的臨床表現，可出現發(fā)熱、疲勞、體質量減輕、關節(jié)炎（痛）、頭疼、淋巴結增大等癥狀［3］。目前，SLE 在兒童中發(fā)病率也較高，達到15% ～20%［4］。臨床上藥物治療主要包括糖皮質激素和免疫抑制劑，但有部分患者表現出對激素敏感性不佳，治療效果并不好［5］。并且，治愈患兒極可能因為藥物、感染、紫外線照射、激素使用不當、食物等多種原因引起復發(fā)，嚴重影響患兒的生命健康和生存質量［6］。研究表明，槐杞黃顆粒輔助用藥可改善過敏性紫癜患兒機體炎癥狀態(tài)；也有研究表明，槐杞黃顆粒治療SLE 成人患者具有較好療效，但槐杞黃顆粒對于復發(fā)兒童SLE 的療效及免疫功能改善的報道并不多見，且改善效果也并不明確［7］。故本研究旨在探討槐杞黃顆粒輔助治療SLE 復發(fā)患兒療效，病分析其對患兒炎癥狀態(tài)、免疫功能、復發(fā)率的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年3月6日至2020年7月8日的152 例SLE 復發(fā)患兒為研究對象，采用隨機數字表法將其分為觀察組和對照組，每組76 例，兩組患兒性別、年齡、病程、累及器官、原有治療方案、納入研究時復發(fā)的表現等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），組間可比，見表1。納入標準：符合《中國系統(tǒng)性紅斑狼瘡診療指南》［8］中相關診斷標準者；年齡2 ～13 歲；SLE 復發(fā)患兒（患者確診為SLE后經?？浦委煵∏榭刂坪笤俅纬霈F相關臨床癥狀及實驗室指標，SLEDAI 評分≥5 分）［9］；ANA 滴度陽性患兒；家屬簽署知情同意書者。排除標準：初治患兒；對本研究藥物過敏者；伴有其他自身免疫性疾病者；同時參與其他項目研究者等。本研究經我院醫(yī)學倫理委員會審批同意，倫理審批號為20181207。

1.2 方法對照組給予常規(guī)治療（包括糖皮質激素或免疫抑制劑等），注射用甲強龍（國藥集團容生制藥有限公司，50 mg，國藥準字H20040845，批號：20140502）生理鹽水稀釋后靜滴，20 mg/（kg·d）；環(huán)磷酰胺（山西普德藥業(yè)股份有限公司，0.5 g，國藥準字H14023686，批號：20141201）靜脈沖擊治療，按0.6 g/（m2·d）劑量給藥，1次/4周，共計3 次。

觀察組在此基礎上增加槐杞黃顆粒（啟東蓋天力藥業(yè)有限公司，10 g，國藥準字B20020074，批號：20181006）治療，3歲以下半袋/次，3 ～15歲1袋/次，2 次/d，連續(xù)用藥12 周。

1.3 觀察指標（1）臨床療效評價標準：①顯效：臨床癥狀明顯改善，SLEDAI 評分和24 h 尿蛋白含量顯著降低；②有效：臨床癥狀有所改善，SLEDAI評分和24 h 尿蛋白含量有所降低；③無效：臨床癥狀無改善甚至加重，SLEDAI 評分和24 h 尿蛋白含量無明顯變化甚至惡化。臨床總有效率=（顯效+有效）/總例數×100%。（2）抽取患兒靜脈血約5 mL，其中2 mL 待其自行凝固后，離心處理，取血清。比較兩組治療前后血清抗核抗體（ANA）滴度陽性率，ANA 檢測采用免疫印跡法，試劑盒購于德國歐蒙公司，原產地：德國，具體方法簡述如下：以Hep2 細胞為底物，待測血清按1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200、1∶10 000 進行稀釋，ANA 滴度≥1∶100 為陽性。（3）搜集患者24 h 尿液，采用紫外可見分光光度計（南京菲勒儀器有限公司，原產地：中國）以雙縮脲法檢測24 h 尿蛋白定量（24 h Upro）。（4）采用ELISA 檢測血清白介素-2、10（IL-2、IL-10）水平，試劑盒均購于上海酶聯生物科技有限公司，原產地均為中國，所有操作均嚴格按照試劑盒要求進行。（5）剩余3 mL 置于有抗凝劑的采血管中，采用流式細胞儀（美國BD 公司，型號：Calibur，原產地：美國）以直接免疫熒光標記法檢測外周血T淋巴細胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+）比例，并計算CD4+/CD8+，流式管1 加入PerCP-CD3/FITC-CD4/PECD8（美國BD 公司，原產地：美國）各10 μL，進行免疫標記反應，流式管2 分別加入PreCP-IgG/FITCIgG/PE-IgG（美國BD 公司，原產地：美國）作為同型對照，所有操作嚴格按照說明書進行。（6）采用系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動度（SLEDAI）評分［10］評估兩組患兒治療前后SLE 活動度，SLEDAI 評分共99 分，0 ～4 分代表基本無活動，≥15 分代表重度活動。（7）隨訪6 個月，比較兩組患兒SLE 復發(fā)率。

表1 兩組患兒一般資料比較Tab.1 Comparison of general data between the two groups例

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 20.0 進行統(tǒng)計分析，計數資料以例（%）表示，比較用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差表示，比較用t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者臨床療效比較觀察組總有效率明顯高于對照組（P＜0.05），見表2。

表2 兩組患者臨床療效比較Tab.2 Comparison of clinical efficacy between two groups例（%）

2.2 ANA 滴度陽性率及24 h Upro與治療前比較，治療后兩組患兒ANA 滴度陽性率及24 h Upro均下降，且觀察組明顯低于對照組（均P＜0.05），見表3。

表3 兩組患兒治療前后ANA 滴度陽性率及24 h Upro比較Tab.3 Comparison of ANA titer positive rate and 24 h Upro between two groups before and after treatment

2.3 炎性因子水平與治療前比，治療后兩組患兒血清IL-2 水平均升高，且觀察組明顯高于對照組；兩組血清IL-10 水平均降低，且觀察組明顯低于對照組（均P＜0.05），見表4。

表4 兩組患兒治療前后炎性因子水平比較Tab.4 Comparison of inflammatory factor levels between the two groups before and after treatment ±s

表4 兩組患兒治療前后炎性因子水平比較Tab.4 Comparison of inflammatory factor levels between the two groups before and after treatment ±s

注：與治療前比較，*P ＜0.05；與對照組比較，#P ＜0.05

組別觀察組對照組t值P值例數76 76 IL-2（pg/mL）治療前32.58±3.08 32.13±4.16 0.758 0.450治療后35.52±3.45*#33.78±3.21*3.219 0.002 IL-10（pg/mL）治療前26.59±4.87 27.12±5.50 0.629 0.530治療后18.97±3.21*#22.38±4.54*5.347＜0.001

2.4 T 淋巴細胞亞群比例治療后觀察組患兒外周血CD3+、CD4+比例及CD4+/CD8+均高于治療前和對照組（均P＜0.05），見表5。

2.5 SLEDAI 評分治療后兩組患兒SLEDAI 評分均低于治療前，觀察組更低（均P＜0.05），見圖1。

圖1 兩組患兒治療前后SLEDAI 評分比較Fig.1 Comparison of SLEDAI scores between the two groups before and after treatment

2.6 復發(fā)率隨訪6 個月，觀察組患兒SLE 復發(fā)3 例，復發(fā)率3.95%，明顯低于對照組的16.46%（P＜0.05）。

3 討論

研究［11］發(fā)現，ANA 抗體是SLE 的代表性自身抗體，ANA 抗體滴度陽性率可在一定程度上反映SLE 病情進展。24 h Upro 是反映機體24 h 內尿液中蛋白含量的指標，其含量越高，提示蛋白尿越嚴重，腎功能越差［12］。汪衛(wèi)等［13］的研究也發(fā)現，槐杞黃顆粒有一定的腎臟保護作用。LI 等［14］認為槐杞黃顆粒是通過靶向p-ERK/CHOP 途徑抵抗MPC5足細胞損傷而預防蛋白尿。本研究結果顯示，治療后觀察組患兒ANA 滴度陽性率及24 h Upro 均低于對照組，說明槐杞黃顆粒輔助治療可提高ANA 滴度轉陰的效果，改善腎功能，與上述研究結果相同。

IL-2 由CD4+T 細胞產生，在免疫類疾病中扮演重要作用，參與疾病的進展［15］。研究發(fā)現，缺乏IL-2的小鼠易患自身免疫??；IL-2在SLE患者中表達較正常人低［16］。本研究中治療后血清IL-2 水平均較治療前升高，且觀察組高于對照組，說明槐杞黃顆粒調節(jié)機體IL-2 表達水平升高。IL-10 是由B 細胞產生，GEGINAT 等［17-21］發(fā)現，SLE 患者血清IL-10水平升高程度與ANA 抗體滴度及SLE 活動度呈正相關。本研究中治療后血清IL-10 水平均較治療前降低，且觀察組低于對照組，說明槐杞黃顆粒調節(jié)機體IL-10 表達水平降低；研究還發(fā)現治療后觀察組患兒SLEDAI 評分明顯低于對照組，提示在常規(guī)治療基礎上輔以槐杞黃顆粒后，SLE 復發(fā)患兒機體炎癥反應明顯減輕，SLE 活動度明顯下降。

表5 兩組患兒治療前后T 淋巴細胞亞群比例比較Tab.5 Comparison of the proportion of T lymphocyte subsets between the two groups before and after treatment x±s

本研究還發(fā)現治療后觀察組患兒外周血CD3+、CD4+比例及CD4+/CD8+均高于對照組，提示在常規(guī)治療基礎上輔以槐杞黃顆?？捎行г鰪姍C體免疫功能?；辫近S顆粒是由黃精、枸杞、槐耳清膏等精制而成，可益氣養(yǎng)陰，現代藥理學研究表明，槐杞黃顆粒具有抗炎、增強免疫力等功效［22］。基礎研究也證實，黃精主要成分黃精多糖有一定免疫調節(jié)作用，可刺激多種細胞因子產生，增強小鼠機體免疫功能［23］。枸杞滋補肝腎、滋陰養(yǎng)血，現代藥理也證實了枸杞有增強機體免疫力的功效［24-25］。在常規(guī)治療基礎上輔以槐杞黃顆粒后，SLE 復發(fā)免疫功能提高，是以有助于促進患兒康復。

最后本研究統(tǒng)計了出院后6 個月的SLE 復發(fā)率，結果顯示，觀察組患兒SLE 再復發(fā)率明顯低于對照組，說明槐杞黃顆粒治療輔助治療可有效降低SLE 復發(fā)患兒出院后再復發(fā)率。雖然本研究發(fā)現槐杞黃顆粒能夠調節(jié)IL-2、IL-10 表達水平及免疫功能，但未進一步對遠期復發(fā)控制效果進行研究，后期應進行大樣本的長期隨訪以證實槐杞黃顆粒在SLE 復發(fā)患兒的療效，并且對槐杞黃顆粒調節(jié)炎癥因子及免疫的機制進行研究。

綜上，槐杞黃顆粒輔助治療可有效提高SLE復發(fā)患兒臨床療效，減輕患兒機體炎癥反應，提高其免疫功能，降低SLE 活動度，且復發(fā)率低，值得臨床推廣。