盧艷嬌 崔夢(mèng)夢(mèng) 郁雯雯 褚 迅

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院 上海市兒科醫(yī)學(xué)研究所 上海市小兒消化與營(yíng)養(yǎng) 重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（上海 200092）

先天性巨結(jié)腸（Hirschsprung disease，HSCR）是兒童常見(jiàn)的先天性消化道畸形，由于腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中腸神經(jīng)嵴細(xì)胞（enteric neural crest cells，ENCCs）與腸神經(jīng)細(xì)胞增殖、遷移或者分化發(fā)生缺陷引起。HSCR 表現(xiàn)為結(jié)腸不同長(zhǎng)度腸段的腸神經(jīng)節(jié)缺乏，遠(yuǎn)端無(wú)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞腸段狹窄，近端腸段擴(kuò)張形成功能性阻塞。中國(guó)人群HSCR的發(fā)病率約為1/5000，男女比例為4∶1。研究顯示HSCR是由多基因引起的遺傳性疾病，其主要致病基因?yàn)镽ET基因，其他遺傳變異與RET相互作用導(dǎo)致疾病的發(fā)生。50.0%家族性HSCR、7.3%～20.0%散發(fā)性HSCR與RET基因變異有關(guān)，所以HSCR又被認(rèn)為是一種寡基因疾病。已發(fā)現(xiàn)的疾病相關(guān)基因分為以下3類：①與RET分子通路相關(guān)基因（RET、GDNF、GFRA1、NTN、PSPN等）；②EDNRB通路相關(guān)基因（EDNRB、ECE1、EDN3）；③調(diào)控腸神經(jīng)發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子（PHOX2B、SOX10等）[1]。然而僅有30%的HSCR患者含有這些基因變異，這些患者多有家族性傾向。已發(fā)現(xiàn)的常見(jiàn)疾病遺傳變異僅能解釋散發(fā)病例的部分遺傳因素，因此需要更多研究去發(fā)現(xiàn)相關(guān)疾病基因及其信號(hào)途徑。

腸神經(jīng)系統(tǒng)形成過(guò)程復(fù)雜，其中任何一步出現(xiàn)異常都可能影響腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，進(jìn)而導(dǎo)致HSCR的發(fā)生。轉(zhuǎn)錄因子在腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中的作用至關(guān)重要。性別決定區(qū)Y 基因相關(guān)高可變區(qū)基因10（sex determining region Y HMG box 10，SOX10）編碼一種SPY 轉(zhuǎn)錄因子，在胚胎發(fā)育早期的神經(jīng)管中，遷移中的神經(jīng)嵴細(xì)胞以及成熟的神經(jīng)膠質(zhì)中均有表達(dá)，SOX 10單倍型劑量不足導(dǎo)致最初定居在腸內(nèi)的腸神經(jīng)嵴細(xì)胞數(shù)量減少，最終引起結(jié)腸無(wú)神經(jīng)元定植。此外，SOX 10調(diào)控RET/EDNRB 通路基因表達(dá)，影響相關(guān)的表達(dá)，從而導(dǎo)致腸神經(jīng)的發(fā)育異常[2]。PHOX 2 B（paired-like homeobox 2b）編碼一種高度保守的轉(zhuǎn)錄因子同源域蛋白，在神經(jīng)嵴來(lái)源的自主神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)，是調(diào)控RET表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。與腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育有關(guān)的其他轉(zhuǎn)錄因子還有PAX3（paired box 3）和ZFHX1B（zinc finger homeobox 1b）等[3]。先前的研究發(fā)現(xiàn)這幾個(gè)轉(zhuǎn)錄因子都與HSCR的發(fā)病相關(guān)。為了進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)與腸神經(jīng)發(fā)育相關(guān)有可能影響HSCR發(fā)生的其他轉(zhuǎn)錄因子，本研究基于生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)全面預(yù)測(cè)分析與腸神經(jīng)發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)而通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)其在HSCR患兒腸道狹窄段與擴(kuò)張段表達(dá)的差異，探討其影響HSCR發(fā)生發(fā)展的可能性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2019年1月至2020年10月在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院接受手術(shù)治療的30 例HSCR 患兒的臨床資料，并在巨結(jié)腸切除術(shù)中留取擴(kuò)張段與狹窄段結(jié)腸組織。入選患兒均根據(jù)病史、鋇劑灌腸檢查、術(shù)中冰凍切片以及術(shù)后病理學(xué)檢查確診為HSCR[4]，且均為短段型巨結(jié)腸。術(shù)中進(jìn)行病理學(xué)檢查，在遠(yuǎn)端無(wú)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞處取狹窄段腸段，在病理學(xué)檢查提示有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞處取擴(kuò)張段腸段。入選患兒均為漢族，均為散發(fā)性，無(wú)家族史，無(wú)其他消化道畸形。

本研究經(jīng)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理審查委員會(huì)審查并同意，所有參與者父母均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料及標(biāo)本收集 收集HSCR患兒的一般資料，如性別、年齡等。于患兒巨結(jié)腸切除術(shù)中，遵循無(wú)菌操作原則留取擴(kuò)張段與狹窄段結(jié)腸組織，迅速凍存于液氮中，置-80 ℃冰箱保存。

1.2.2FOXP 2mRNA 的表達(dá) 采用熒光定量PCR 檢測(cè)。使用QIAGEN 的RNeasy?Mini Kit 分別對(duì)30例HSCR患兒狹窄段和擴(kuò)張段腸管進(jìn)行總mRNA 的提取與定量。mRNA 用 TaKaRa 反轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)成cDNA并存于-20℃?zhèn)溆谩Ｓ肨aKaRa 的SYBR Green?Premix Ex Taq? Ⅱ試劑盒作為qRT-PCR 反應(yīng)體系，每個(gè)樣本設(shè)置3 個(gè)副孔。在QuantStudio Dx Real-Time PCR（Applied Biosystems，美國(guó)）儀器上進(jìn)行qRT-PCR 反應(yīng)，用QuantStudio Dx Software導(dǎo)出數(shù)據(jù)結(jié)果。FOXP2上游引物為5′-CTGGCAGCAGAGATGGAAGA-3′，下游引物為5′-CACCTGCAGTGGTCTCTGTT-3′，以GAPDH作為內(nèi)參基因，上游引物為5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′，下游引物為5′-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3′[5]。

1.2.3 轉(zhuǎn)錄因子富集分析 ChEA3（https://amp.pharm.mssm.edu/ChEA3）是一個(gè)對(duì)調(diào)控基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行預(yù)測(cè)富集的數(shù)據(jù)庫(kù)，其整合了ENCODE、ReMap以及一些獨(dú)立發(fā)表的CHIP-seq 數(shù)據(jù)，還整合GTEx、TCGA 以及ARCHS 4 中RNA-seq 數(shù)據(jù)內(nèi)的共表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)，另外還包含Enrichr數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)基因之間的轉(zhuǎn)錄因子共發(fā)生的數(shù)據(jù)[6]。因此，使用ChEA3在線工具對(duì)調(diào)控HSCR易感基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行預(yù)測(cè)以及富集分析。

采用ChEA3在線工具，對(duì)已報(bào)道的119個(gè)巨結(jié)腸相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行預(yù)測(cè)與富集分析。ChEA3數(shù)據(jù)庫(kù)分析得到的是綜合多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)果，不同數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)于所得基因的排名都有所差異。按照默認(rèn)的Mean Rank排名方式即綜合多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)得到的平均排名對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步分析，Mean Rank分?jǐn)?shù)越小所預(yù)測(cè)的把握度越高[6]。

1.2.4 轉(zhuǎn)錄因子組織特異性表達(dá)分析 人類蛋白質(zhì)圖譜（Human Protein Atlas，HPA）網(wǎng)站提供24 000種人類蛋白質(zhì)的組織和細(xì)胞分布信息。數(shù)據(jù)是通過(guò)免疫組學(xué)技術(shù)檢測(cè)每一種蛋白質(zhì)在48種人類正常組織、20種腫瘤組織、47個(gè)細(xì)胞系和12種血液細(xì)胞內(nèi)的分布和表達(dá)，其結(jié)果用免疫組化染色圖表示，并經(jīng)過(guò)專業(yè)人員閱讀和標(biāo)引。這些受檢組織來(lái)自144個(gè)不同個(gè)體和216個(gè)腫瘤組織，保證染色結(jié)果具有代表性[7]。在本研究中，將前面分析所得的轉(zhuǎn)錄因子FOXP 2 在組織數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索，分析FOXP 2的mRNA 與蛋白在人體各個(gè)器官組織中的表達(dá)情況，并著重觀察其在腸道內(nèi)不同細(xì)胞中的表達(dá)分布情況。

1.2.5 GeneMANIA分析 GeneMANIA在線軟件可以用來(lái)構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)并預(yù)測(cè)已定義基因的潛在功能。結(jié)果可以顯示基因之間的關(guān)系，包括共表達(dá)、物理相互作用、共定位以及基因間相互作用等[8]。根據(jù)轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測(cè)結(jié)果，使用GeneMANIA 來(lái)構(gòu)建FOXP 2與其靶基因之間的蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Graphpad Prism8.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，t檢驗(yàn)用來(lái)比較兩組獨(dú)立樣本，P<0.05為差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

入選的30例HSCR患兒均診斷為散發(fā)型、短段型HSCR。其中，男23例、女7例（男女比例為3.29∶1），中位年齡為1歲。

2.2 轉(zhuǎn)錄因子分析

利用ChEA3，對(duì)Mean Rank排名的前30位轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行組織分布分析，之后再進(jìn)行Go 功能注釋及富集分析，結(jié)果顯示這些轉(zhuǎn)錄因子多分布于腦部、皮膚、結(jié)腸等組織內(nèi)，并且Go 富集分析顯示與中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、胚胎期器官形成、表皮細(xì)胞發(fā)育以及膠原纖維的過(guò)程相關(guān)。在Mean Rank排名前30位轉(zhuǎn)錄因子中，排名第20 位的FOXP 2是唯一一個(gè)基于ChEA 3 所有數(shù)據(jù)庫(kù)均預(yù)測(cè)出的轉(zhuǎn)錄因子（圖1）。這些數(shù)據(jù)庫(kù)包括：GTEx、ARCHS4共表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)、Enrichr共發(fā)生分析數(shù)據(jù)庫(kù)、ReMap、ENCODE及一些已發(fā)表的CHIP-seq數(shù)據(jù)。此外，已有大量生物學(xué)證據(jù)顯示調(diào)控腸神經(jīng)發(fā)育并參與HSCR 發(fā)病的轉(zhuǎn)錄因子PHOX 2 B和SOX 10分別位于第3位和第65位，分別調(diào)控42個(gè)和27個(gè)基因，結(jié)果增加了所預(yù)測(cè)的轉(zhuǎn)錄因子FOXP 2調(diào)控HSCR 相關(guān)致病基因的可信度。

圖1 ChEA3 數(shù)據(jù)庫(kù)分析基于Mean Rank 排名的前30 位的轉(zhuǎn)錄因子

預(yù)測(cè)結(jié)果顯示FOXP 2調(diào)控119 個(gè)候選基因中的46個(gè)，主要包括Hedgehog信號(hào)通路的GLI3、PTCH1、HES 1、KLF 4，Notch 信號(hào)通路的JAG 1、JAG 2、NOTCH 1、NOTCH 2、NOTCH 3，RET 信號(hào)通路的GDNF、GFRA 1以及NRG 1、ERBB 4等一些其他通路的相關(guān)基因。GeneMANIA數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建的蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)顯示FOXP2與GLI3共表達(dá)，與PTCH1、ERBB4、EDNRB、ECE1、TGFB2、SERPINI1存在基因間相互作用，這些結(jié)果提示FOXP 2極有可能通過(guò)調(diào)控HSCR關(guān)鍵因子的基因表達(dá)而參與腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程。

2.3 HPA數(shù)據(jù)庫(kù)分析

從HPA數(shù)據(jù)庫(kù)獲得了FOXP2在44個(gè)組織器官中蛋白表達(dá)情況，其中在小腦、消化道、膀胱以及平滑肌中表達(dá)較高。另外，綜合HPA、GTEx、FANTOM 5 這三個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的RNA數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXP2的RNA表達(dá)量在平滑肌中最高，其次是膀胱，然后便是結(jié)腸。通過(guò)查詢HPA 數(shù)據(jù)庫(kù)的免疫組學(xué)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXP 2 蛋白在大腦皮質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞中度表達(dá)，而在神經(jīng)元細(xì)胞中高表達(dá)，并且在結(jié)腸肌層的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞以及腺細(xì)胞中呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性染色。FOXP2在腦神經(jīng)元細(xì)胞以及腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及腸壁組織內(nèi)的高表達(dá)，進(jìn)一步表明FOXP 2可能參與腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程，F(xiàn)OXP2表達(dá)水平變化有可能影響HSCR發(fā)生。

2.4 FOXP2在腸道組織內(nèi)的表達(dá)

qRT-PCR結(jié)果顯示FOXP2在30例HSCR狹窄段腸管中相對(duì)表達(dá)量為0.89±0.40，在擴(kuò)張段腸管中相對(duì)表達(dá)量為1.49±0.90，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.819，P<0.001）。

3 討論

研究顯示，HSCR 是以RET為主要疾病基因的寡基因遺傳性疾病，其病因及發(fā)病機(jī)制目前尚不完全明確。目前研究認(rèn)為，在腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中，腸神經(jīng)嵴細(xì)胞增殖、遷移和分化過(guò)程發(fā)生異常會(huì)導(dǎo)致遠(yuǎn)端腸道肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢內(nèi)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺如，從而導(dǎo)致HSCR。腸神經(jīng)發(fā)育需要相關(guān)的多個(gè)通路基因在時(shí)空順序上準(zhǔn)確有序表達(dá)，在此過(guò)程中轉(zhuǎn)錄因子起到關(guān)鍵作用[3]。轉(zhuǎn)錄因子是基因表達(dá)調(diào)控和細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中必不可少的因子，在器官組織發(fā)育與疾病發(fā)生過(guò)程中起非常重要的作用。文獻(xiàn)分析顯示119 個(gè)基因與HSCR 的發(fā)病相關(guān)，包括RET 信號(hào)通路、EDNRB信號(hào)通路、Notch信號(hào)通路、Neuregulin信號(hào)通路、Hedgehog信號(hào)通路、Semophorin信號(hào)通路、Prokinecticin信號(hào)通路以及其他一些與腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育相關(guān)的基因。本研究利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)分析調(diào)控HSCR 相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)ChEA 3 數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子FOXP2對(duì)46個(gè)疾病相關(guān)基因的表達(dá)具有調(diào)控作用，HPA 數(shù)據(jù)庫(kù)顯示轉(zhuǎn)錄因子FOXP 2在腦神經(jīng)元細(xì)胞和結(jié)腸壁組織中高表達(dá)，提示轉(zhuǎn)錄因子FOXP2可能參與神經(jīng)發(fā)育的調(diào)控。在此基礎(chǔ)上，利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)FOXP2在30例HSCR患兒的狹窄段腸管中mRNA表達(dá)量明顯降低，因此推測(cè)狹窄段神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺如可能與FOXP2的表達(dá)水平降低 有關(guān)。

FOXP2蛋白編碼715個(gè)氨基酸，其中C端包含具有DNA結(jié)合能力的forkhead-box結(jié)構(gòu)域，以及具有鋅指和亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)基序，其N 端則富含谷氨酰胺，蛋白結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性決定了其功能的多樣性，因此，當(dāng)FOXP 2 功能發(fā)生異常時(shí)可能改變其下游大量靶基因的表達(dá)異常，導(dǎo)致疾病的發(fā)生[9]。轉(zhuǎn)錄因子FOXP2作為Forkhead蛋白家族成員之一，不僅參與心臟、腸道、食管、骨以及肺臟等多個(gè)組織器官的發(fā)育，而且還參與早期大腦皮質(zhì)發(fā)育與神經(jīng)干細(xì)胞遷移和分化[10]。FOXD1、FOXD3、FOXA3以及FOXP1同為Forkhead蛋白家族成員，已有研究顯示這些轉(zhuǎn)錄因子與腸道神經(jīng)嵴細(xì)胞的分化有關(guān)[11]。研究發(fā)現(xiàn)FOXP2發(fā)生錯(cuò)義變異會(huì)破壞其DNA 結(jié)合位點(diǎn)結(jié)構(gòu)域，從而干擾其結(jié)合并調(diào)節(jié)靶基因的能力。FOXP2變異可導(dǎo)致發(fā)育性言語(yǔ)運(yùn)動(dòng)障礙和兒童言語(yǔ)失用癥的發(fā)生，并可伴有神經(jīng)肌肉系統(tǒng)發(fā)育異常、頭面部發(fā)育異常、骨骼發(fā)育畸形。少數(shù)病例還會(huì)出現(xiàn)智力低下甚至有孤獨(dú)癥表現(xiàn)。一項(xiàng)在澳大利亞人群中對(duì)709例精神分裂癥患者進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)1個(gè)位于FOXP2上的SNP（rs2189008）與語(yǔ)言障礙相關(guān)聯(lián)[12]。這些臨床表現(xiàn)表明其變異或者異常表達(dá)與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育異常相關(guān)聯(lián)[13]。

Hedgehog通路是腸道器官形成以及腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中重要信號(hào)通路。在小鼠動(dòng)物模型中，抑制Hedgehog信號(hào)通路會(huì)導(dǎo)致腸神經(jīng)節(jié)發(fā)育異常，從而導(dǎo)致HSCR或其他胃腸道畸形。另外，Hedgehog信號(hào)通路的異常激活會(huì)導(dǎo)致腸道神經(jīng)嵴細(xì)胞來(lái)源的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)早生成，從而影響腸神經(jīng)嵴細(xì)胞的增殖、遷移和分化[14]。使用GeneMANIA 網(wǎng)站構(gòu)建與FOXP2相關(guān)的蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)FOXP2與GLI 3 共表達(dá)，說(shuō)明FOXP 2 與GLI 3 在功能上有可能相關(guān)聯(lián)。GLI 3 與同家族的GLI 1 和GLI 2 均是介導(dǎo)Hedgehog通路信號(hào)的轉(zhuǎn)錄因子。其中，GLI1是下游靶基因的激動(dòng)劑，而GLI2和GLI3既是激動(dòng)劑又是抑制劑，GLI2偏向激動(dòng)劑作用，GLI3則偏向抑制劑作用[15]。使用轉(zhuǎn)基因小鼠模型，將GLI 1異位過(guò)表達(dá)致使小鼠出現(xiàn)類似HSCR 的表型，其中腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的受影響程度與GLI1表達(dá)水平相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)GLI3基因的錯(cuò)義變異改變其編碼蛋白的功能，導(dǎo)致HSCR 的發(fā)生；同時(shí)利用對(duì)斑馬魚(yú)以及小鼠模型，發(fā)現(xiàn)Ihh（Indian Hedgehog）的缺失會(huì)導(dǎo)致類似HSCR的表型[16]。這些研究表明，GLI的表達(dá)水平與GLI3的蛋白功能改變以及Hedgehog信號(hào)通路活性變化對(duì)腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育與HSCR發(fā)生至關(guān)重要?？缒さ鞍譙mo（Smoothened）是Hedgehog信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)必不可少的因子，Hedgehog結(jié)合PTCH1釋放Smo活性，并促進(jìn)下游GLI激活劑的形成，激活下游級(jí)聯(lián)反應(yīng)。PTCH1基因變異會(huì)導(dǎo)致HSCR風(fēng)險(xiǎn)明顯增高，并且使用小鼠動(dòng)物模型發(fā)現(xiàn)Ptch 1的敲除會(huì)造成小鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)早發(fā)生，而導(dǎo)致神經(jīng)嵴細(xì)胞明顯減少，從而降低遷移過(guò)程中的腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的密度，影響腸神經(jīng)細(xì)胞的遷移[17]。FOXP2與GLI及PTCH1基因功能相關(guān)聯(lián)，因此推測(cè)FOXP2有可能通過(guò)調(diào)控這2個(gè)基因的表達(dá)繼而調(diào)控Hedgehog信號(hào)通路，作用于神經(jīng)嵴細(xì)胞的分化與遷移過(guò)程，參與HSCR發(fā)病進(jìn)程。

本研究也提示，F(xiàn)OXP 2通過(guò)其他分子途徑參與腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程。EDNRB 和ECE 1 是EDNRB 信號(hào)通路的重要因子，對(duì)腸神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育至關(guān)重要，ERBB4是NRG1的受體，是神經(jīng)嵴細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中的分子調(diào)節(jié)劑，參與神經(jīng)元的遷移與分化過(guò)程[18]。預(yù)測(cè)結(jié)果顯示FOXP2也參與這些基因的表達(dá)調(diào)控。

綜上所述，通過(guò)生物信息分析提示FOXP 2可能參與調(diào)節(jié)腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程，并發(fā)現(xiàn)FOXP 2基因表達(dá)水平在HSCR病變組織中顯著下降，揭示FOXP2有可能與HSCR發(fā)生相關(guān)。進(jìn)一步通過(guò)臨床樣本研究FOXP 2遺傳變異與HSCR 發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性以及可通過(guò)基因敲低或者敲除的動(dòng)物模型來(lái)進(jìn)一步探索該基因?qū)δc神經(jīng)發(fā)育的影響，有可能為揭示HSCR 發(fā)病機(jī)制提供線索。