韓 君

(內(nèi)蒙古自治區(qū)藥品檢驗研究院，內(nèi)蒙古自治區(qū) 呼和浩特 010000)

鹽酸奧昔非君，又名安心酮，在甲醇中溶解，在乙醇中略溶，在水中微溶，在氯仿中極微溶，在乙醚中幾乎不溶。為去甲麻黃堿衍生物，有選擇性激動β受體及直接擴(kuò)張冠狀動脈血管作用，能降低冠脈阻力，增加冠脈流量，減少心室容積，降低心室壁張力，改善心肌氧平衡以及增強(qiáng)心肌收縮力。鹽酸奧昔非君片用于冠心病、心絞痛、心肌梗死。

1 試劑試藥

鹽酸奧昔非君對照：鹽酸奧昔非君原料(赤峰蒙欣藥業(yè)提供)；

磷酸二氫鈉：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

磷酸：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

甲醇：色譜純，SIGMA-ALDRICH；

純凈水：自制。

2 色譜條件與系統(tǒng)適用性

2.1 儀器：戴安U3000高效液相色譜儀

Waters e2695高效液相色譜儀

天平：Sarturious CP124S

MSE6·6S

BT 125D

色譜柱：CAPCELL PAK MG C18 5μm 4.6×250mm

Waters XTERRAS MS C18 5μm 4.6×250mm

Agilent ZORBAX SB C18 5μm 4.6×250mm

流動相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鈉-三乙胺(55∶45∶0.3)(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.05)

檢測波長：252nm 流速：1.0mL/min

進(jìn) 樣 量：20μL 柱溫：25℃

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸奧昔非君對照品8mg，置于200mL量瓶中，加0.1mol/L的HCl溶液超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL約含40μg鹽酸奧西非君的溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取供試品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸奧昔非君4mg)，置于100mL量瓶中，65℃超聲處理20分鐘，加0.1mol/L的HCl溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 測定法

精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計，即得。

3 色譜條件的選擇

3.1 波長的選擇

精密稱取鹽酸奧昔非君原料8mg，置于200mL量瓶中，加0.1mol/L HCl溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，在200nm～400nm的波長處進(jìn)行掃描，在252nm的波長處有最大吸收，故選擇252nm作為測定波長。

3.2 提取方法的選擇

3.2.1提取溶劑的選擇

分別精密稱取鹽酸奧昔非君原料8mg，置于200mL量瓶中，分別用甲醇和0.1mol/L HCl溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，按擬定的含量測定方法的色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果表明用0.1mol/L HCl溶液提取供試品穩(wěn)定性較好，用甲醇提取，供試品發(fā)生分解。

3.2.2超聲提取溫度的選擇

分別精密稱取供試品，分別選用直接超聲處理、60℃超聲處理、65℃超聲處理、70℃超聲處理，分別照擬定含量測定方法處理20min，各精密量取20μL注入液相色譜儀，結(jié)果表明超聲溫度為65℃時提取效果較好，故選擇65℃為超聲的提取溫度。

3.2.3超聲提取時間的選擇

分別精密稱取供試品，分別超聲處理10min、20min、30min和40min，照擬定含量測定方法處理，各精密量取20μL注入液相色譜儀，結(jié)果表明超聲時間對鹽酸奧昔非君片的提取幾乎無影響，為了提取完全，故把超聲提取時間定為20min。

3.2.4過濾方法的選擇

分別精密稱取供試品，照擬定含量測定方法處理，分別進(jìn)行0.45μm、0.22μm濾膜過濾和直接離心吸取上清液，精密量取20μL注入液相色譜儀，結(jié)果表明過濾方法對鹽酸奧昔非君片的提取幾乎無影響，故選用0.45μm濾膜過濾。

4 方法學(xué)研究

4.1 陰性試驗

依照廠家提供處方量(輔料及處方由赤峰蒙欣藥業(yè)有限公司提供)，按供試品溶液制備方法制定陰性供試品溶液，測定，在被檢測成分的出峰時間內(nèi)對測定不存在干擾，結(jié)果見圖1、圖2。

圖1 陰性實驗圖譜

圖2 供試品溶液圖譜

4.2 線性與范圍

精密稱取鹽酸奧昔非君原料(由赤峰蒙欣藥業(yè)有限公司提供)8.331mg，置于200mL的量瓶中，加0.1mol/L的HCl溶液溶解并稀釋制成每1mL中約含40μg的溶液，搖勻，精密量取上述溶液2μL、5μL、10μL、12μL、14μL、18μL、20μL、25μL、30μL注入色譜儀，記錄色譜圖；以濃度為橫坐標(biāo)(μg/mL)，以相對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)(微伏×秒)，進(jìn)行線性回歸。鹽酸奧昔非君線性回歸方程為：Y=31692X-15462(r=1，n=7)，結(jié)果表明鹽酸奧昔非君在5～160μg/mL濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

4.3 檢出限與定量限

將對照品溶液稀釋至0.8μg/mL時，測得的響應(yīng)值約為噪音值的3倍，故本品的檢出限為0.8μg/mL，根據(jù)檢出限推算得到定量限為2.4μg/mL，檢出限圖譜見圖3。

圖3 檢出限圖譜

4.4 精密度試驗

照含量測定項下處理對照品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得鹽酸奧昔非君峰面積精密度RSD為0.6%，說明儀器精密度良好。

4.5 穩(wěn)定性試驗

照含量測定項下處理供試品一份，分別于0h、6h、24h、36h、48h、72h進(jìn)行測定，結(jié)果表明鹽酸奧昔非君在72小時內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

4.6 重復(fù)性試驗

取同一批號的供試品，精密稱取6份，按上述供試品溶液的制備方法和色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.9%，結(jié)果說明該方法重復(fù)性良好。

4.7 回收率試驗

取0.5片量供試品9份，分別加入鹽酸奧昔非君原料藥1.6mg、2.0mg、2.4mg，置于100mL量瓶中，照含量測定項下處理，制備供試品溶液。精密量取上述溶液各20μL注入色譜儀，計算回收率，測得平均回收率為100.0%，RSD為0.6%。

4.8 耐用性試驗

取含量測定項下供試品溶液進(jìn)行測定，分別對不同柱溫、不同流速、不同流動相比例、不同品牌色譜柱及不同液相色譜儀耐用性進(jìn)行考察，測定結(jié)果見表1～5。

表1 耐用性試驗(改變柱溫)

表2 耐用性試驗(改變流速)

表3 耐用性試驗(改變色譜柱)

表4 耐用性試驗(改變流動相比例)

表5 耐用性試驗(改變液相色譜儀)

從耐用性試驗結(jié)果可看出，不同柱溫、不同流速、不同品牌色譜柱、不同流動相比例及不同液相色譜儀不影響鹽酸奧昔非君的測定。

5 供試品測定

按擬定的含量測定法測定供試品，結(jié)果見表6。

表6 供試品測定結(jié)果